Wnt信号通路关键基因β-catenin在RA诱导的P19胚胎性癌细胞神经分化过程中的亚细胞分布

Wnt信号参与了小鼠早期神经发育。我们以往的实验结果表明，Wnt信号可引起P19胚胎性癌细胞的神经分化。为了进一步了解Wnt信号在P19神经分化过程中行使功能的时间，我们以Wnt信号通路关键成员β-catenin是否定位在细胞核中作为考察Wnt信号是否能传递到细胞核内调控下游基因活性的指标，分析了Wnt信号在P19细胞神经分化过程中的活性。我们观察到，β-catenin在RA诱导的P19细胞分化的第2到第4天存在核定位。在此期间，Wnt下游基因En－2的表达量也有明显增加。因此，在P19神经分化过程中，Wnt活性可能发生在这一阶段。同时，在神经突的形成、伸长及神经纤维集束过程中，β-catenin在神经突起及神经纤维上也存在特异性分布，提示在此过程中β-atenin可能也行使了功能。

维生素A酸诱导小鼠胚胎性癌细胞分化过程中核仁形成区的变化

采用一步银染技术,发现维生素A酸诱导小鼠F_9,F_(9-1)胚胎性癌细胞分化过程中,核仁形成区的数目有变化。F_9细胞Ag-NORs数目的增多发生在72-96小时;而F9-1细胞则发生在96小时。设计的撤药试验结果证明,分裂中期银染NOR的变化,反映的是前一个间期NOR的活性。

建立经优化的促P19鼠胚胎癌细胞神经分化模型

目的:建立P19胚胎癌细胞(embryonal carcinoma cells,EC)定向分化为神经样细胞体外模型,用于快速初步确定小分子化合物促神经发生活性。方法:采用单因素变量法进行培养条件探索,考察全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,RA)浓度、悬浮天数、贴壁细胞密度和贴壁后培养液选择对分化的影响。4 d后形成的拟胚体经胰蛋白酶消化为单细胞,并建立分阶段确定评价指标,适用于不同时相评价。光镜观察细胞表型,神经元特异蛋白β-tubulinⅢ免疫荧光染色加以确认。结果:P19细胞悬浮培养4 d,加入RA(终浓度1μmol/L)。以单细胞悬液在1.2×106/ml密度贴壁培养为最佳条件。光镜观察在第8天即有神经元样细胞表型,在第16天可形成神经元样网状结构,两个评价时间点免疫荧光染色均呈β-tubulinⅢ阳性,并与光镜表型相一致。结论:P19细胞分化为神经元样表型,为小分子促神经分化初级筛选提供模型。

环六亚甲基双乙酰胺体外诱导胚胎性癌B7—2细胞分化对MS3基因表达的影响

MScDNA是多潜能胚胎性癌细胞专一的顺序,HMBA可诱导B 7—2细胞分化为原始内胚层样细胞。用定量细胞质RNA点印迹杂交法分析了MS基因在小鼠胚胎性癌B 7—2细胞经HMBA诱导前和诱导后的表达水平。小鼠成纤维细胞NIH3T3被用作阴性对照,MS基因的表达水平在B 7—2细胞经HMBA诱导5天后下降了86%。鉴于HMBA对B 7—2细胞的诱导效率约为90%,这一实验结果表明在HMBA诱导分化中,MS基因的表达被抑制。

胚胎癌F9细胞中Oct4在miRNA302启动子上的募集

目的检测胚胎癌F9细胞中Oct4是否能在miR302启动子上募集。方法采用荧光半定量Real-time PCR检测F9细胞中Oct4RNA干扰后Oct4及miR302表达量的变化,采用染色质免疫沉淀技术(CHIP)检测F9细胞中Oct4在miR302启动子上募集的情况。结果 (1)Oct4 RNA干扰后Oct4表达下降了56%,miR302的表达下降了38%,两者具有相似的表达趋势。(2)Oct4能在miR302启动子上募集。结论 F9细胞中Oct4及miR302的表达具有相关性,miR302启动子上有Oct4募集,Oct4对miR302启动子具有调节作用,miR302可能是Oct4的靶基因之一。

低氧促进P19细胞向多巴胺能神经元分化

目的观察低氧对P19细胞神经分化的影响,针对其向多巴胺能神经元分化的现象及机制进行探讨。方法实验分为常氧组(20%O2)和低氧组(3%O2,每天低氧10 m in)。对诱导分化的神经元采用免疫细胞化学染色方法鉴定。用流式细胞术及W estern b lot检测多巴胺能神经元,高效液相色谱法测定分泌的多巴胺。用RT-PCR技术检测低氧诱导因子HIF-1αmRNA水平。结果①在分化的P19细胞中,低氧组神经元含量高于常氧组(P<0.05),低氧组多巴胺能神经元含量及所分泌的多巴胺显著高于常氧组(P<0.001);②低氧组诱导期HIF-1αmRNA表达水平明显高于常氧组。结论低氧可以促进P19细胞的神经分化,尤其促进P19细胞向多巴胺能神经元分化,HIF-1α可能在其中起了一定作用。

卵巢肿瘤

973753 低恶性度卵巢肿瘤术后的体外受精、胚胎移植[日]/都筑浩雄∥日不妊志.-1995,40(4).-196 冀医情9737504 卵巢癌 nm23基因突变1nm23位点杂合性丢失和 K-ras 突变与肿瘤进展和 nm23基因表达的关系/Mandai M∥Br J Cancer.-1995,72(3).-691～695津医情9737505 Paclitaxel(紫杉酚 Taxal)治疗复发和难治性卵巢癌:英国和爱尔兰的经验/Gore M E∥Br J Cancer.-1995,72(4)