无创胚胎植入前遗传学检测技术进展研究

胚胎植入前遗传学检测(PGT)是辅助生殖与遗传学检测技术相结合的一种胚胎诊断检测技术,在移植前筛查胚胎染色体以排除染色体异常的胚胎。但是由于目前该技术复杂昂贵,且有创操作可能存在安全风险,所以该技术在临床的应用受到一定限制。因此,人们开始探索利用囊胚腔液和胚胎培养液中发现的游离DNA进行无创PGT。作为更加安全和便捷的基因检测技术,目前无创PGT已经在胚胎染色体检测等方面取得了一定进展,但现有的研究结果之间差异较大,临床应用的有效性仍存在争议。本文就游离DNA的来源及产生机制、无创PGT的临床研究现状进行综述,为无创PGT应用于临床实践提供参考。

多次退火环状循环扩增联合高通量测序技术在体外受精胚胎无创检测非整倍体中的应用

为建立基于多次退火环状循环扩增联合高通量测序(multiple annealing and looping-based amplification cycles combined with next-generation sequencing,MALBAC-NGS)技术的体外授精胚胎非整倍体无创检测体系,本研究提前对非整倍体遗传缺陷胚胎进行筛查,收集在南宁市第二人民医院生殖中心接受体外受精-胚胎移植(In vitro fertilization embryo transfer,IVF-ET)的患者临床资料,比较了对照组(正常年龄)与观察组(高龄患者)的卵子数量、囊胚质量等数据,并分别运用MALBAC-NGS及传统胚胎植入前遗传学筛查(preimplantation genetic screening,PGS)技术对上述两组胚胎染色体进行筛查。研究结果表明,观察组获卵数、优质卵子比率及囊胚率显著低于对照组(P<0.05),两组间胚胎卵裂率无显著差异(P>0.05)。对照组及观察组间胚胎活检样本与培养液样本MLABAC扩增成功率无显著差异(P>0.05);经MALBAC-NGS检测,对照组及观察组组内胚胎活检样本与培养液样本染色体拷贝数检测结果无显著差异(P>0.05)。结果证实MALBAC-NGS技术可利用胚胎培养液进行染色体拷贝数检测,具备成为临床检测标准的潜力。

评估取样时间对非侵入性胚胎植入前非整倍体检测的影响

目的探讨囊胚培养液(spent culture medium,SCM)不同取样时间在非侵入性胚胎植入前遗传学检测(non-invasive preimplantation genetic testing for aneuploidy,niPGT-A)中的影响。方法采用前瞻性研究,对2021年3月至2022年12月行非整倍体的胚胎植入前遗传学检测(preimplantation genetic testing,PGT-A)患者85个周期的369个囊胚进行外滋养层细胞(trophectoderm,TE)活检,同时收集SCM。根据其收集起始时间分为第3天(D3)、第4天(D4)、第5天(D5)三组,比较三组取样方法扩增成功率、母源性污染比例以及niPGT-A的检测结果与PGT-A结果的符合率。结果369个囊胚中,D3收集65例,D4收集186例,D5收集118例。D3收集组母源性污染率明显高于D4、D5收集组,差异有统计学意义(P<0.05);D3收集组niPGT-A与PGT-A结果的一致率、特异性和曲线下面积(AUC),明显低于D4、D5收集组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论niPGT-A收集后期培养液与外滋养层细胞活检的一致性更高。

利用胚胎培养液中游离DNA进行无创植入前遗传学检测的研究进展

胚胎在体外生长过程中会向培养液中释放游离DNA(cell-free DNA,cfDNA)。cfDNA指游离于细胞外的DNA片段,是胚胎发育过程中细胞生理性凋亡的产物。利用cfDNA进行无创胚胎植入前遗传学检测(non-invasive preimplantation genetic testing,niPGT)具有无创、操作简便等优点,已在胚胎染色体非整倍体检测及单基因疾病诊断方面取得了初步进展。然而,目前niPGT临床应用的有效性、母源污染和cfDNA来源等问题仍存在争议。本文对niPGT在临床方面应用现状及cfDNA来源进行综述,并对其局限性及未来应用前景提出观点,为niPGT应用于临床实践提供参考。

“短时取样法”用于非侵入性胚胎植入前遗传学检测效能的前瞻性研究

目的探讨"短时取样法"在非侵入性胚胎植入前遗传学检测(non-invasive preimplantation genetic testing,ni-PGT)中的检测效能。方法采用前瞻性研究分析方法,对2021年3月至2022年6月期间就诊于湘潭市中心医院生殖中心行胚胎植入前非整倍体遗传学检测(preimplantation genetic testing for aneuploidy,PGT-A)患者的囊胚进行外滋养层细胞(trophectoderm,TE)活检,同时收集囊胚培养液(spent culture medium,SCM)。根据SCM收集方法的不同,分为直接收集法与"短时取样法",分析比较两种取样方法ni-PGT的检测结果与PGT-A结果的符合率。结果本研究收集36对夫妇的108个囊胚,均行TE活检及收集SCM,其中直接收集法59例、"短时取样法"49例。直接收集法诊断胚胎倍性的曲线下面积(area under curve,AUC,0.628)小于"短时取样法"(0.785)。结论"短时取样法"诊断胚胎倍性的效能相较于直接收集法更优。

无创PGT技术的临床应用及研究进展

胚胎植入前遗传学检测(preimplantation genetic testing,PGT)技术广泛应用于辅助生殖技术(assisted reproductive technology,ART)。PGT可以检测胚胎的单基因遗传病、染色体结构和数目变异,同时能改善胚胎植入效果、临床妊娠结局和活产率。但该技术涉及到的活检过程对胚胎具有一定的侵袭性,同时对设备和人员的要求颇高。而随着从囊胚液和胚胎培养液中发现了可以用于基因分析的游离DNA,无创PGT(noninvasive PGT,NiPGT)成为一种有潜力的检测方式,在辅助生殖领域有广阔的应用前景。现就目前NiPGT技术的应用及研究的有效性和局限性进行阐述,为临床应用提供依据。