胚胎质量对冻融周期中生化妊娠和胚胎早期停止发育的影响

目的·探讨在体外受精-胚胎移植冻融周期中,胚胎的质量是否会影响临床结局导致生化妊娠或早期胚胎停止发育。方法·回顾性分析2015年1月至2016年6月在上海交通大学医学院附属瑞金医院生殖中心行冻融胚胎移植治疗后生化妊娠的115个周期、早期胚胎停止发育的64个周期、继续妊娠的871个周期的临床资料,比较移植后第3天(D3)胚胎质量及评分和囊胚发育速度、囊胚级别在3组之间的差异。结果·在男女双方年龄、不孕年限、排卵日子宫内膜厚度、移植日雌二醇和孕酮水平等方面3组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。多数D3冻融胚的评分为6~8分,且各分值所占比例在3组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。3组中移植的D5囊胚所占的比例均高于D6囊胚所占的比例,但3组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。评级为A、B的囊胚内细胞团比例和评级为C的囊胚内细胞团比例在3组中分别比较,差异均无统计学意义;但在胚胎停止发育组中,评级为C的囊胚滋养层所占的比例为52.2%,明显高于生化妊娠组(35%)和继续妊娠组(29.3%)中相应的比例,且差异均有统计学意义(P<0.05)。结论·胚胎质量与生化妊娠没有必然关系,而囊胚滋养层的评级可能是胚胎早期停止发育的主要原因之一。

鸡与鹌鹑属间杂交种胚胎早期死亡可能机制的分析

动物的远缘杂交会产生杂交不育问题,主要表现在胚胎早期死亡、异种生殖细胞不易受精、杂种不育、种间和属间杂交种出现极端不平衡的性别比例。已有学者从组织形态学、生殖生理学、组织化学和染色体遗传学等不同角度进行过研究,多数学者认为远缘杂交染色体及基因结构的变异是导致杂交不育的主要原因。鸡与鹌鹑的杂交是典型的远缘杂交,其不育主要表现在胚胎早期出现大量死亡,在出壳前雌性全部死亡,出壳的全部为雄性但其睾丸不发育而无法正常繁育。本文从胚胎早期死亡的表现、染色体异型配对、胚胎死亡引起的蛋白表达异常、器官分化及相关基因表达异常对胚胎死亡的影响等方面进行了研究与分析。

以囊胚双重染色方法检验果糖对牛胚胎早期发育效果的影响

作为葡萄糖同分异构体的果糖同样可以作为胚胎早期发育的代谢底物,而且可能在桑椹胚发育阶段之前就为胚胎发育所利用,有利于早期胚胎的体外发育。本实验结合囊胚细胞双重染色方法研究了在SOFaaci培养基中,果糖代替葡萄糖对牛早期胚胎体外发育效果的影响。结果表明：对第8天囊胚双重染色时,以Triton X-100处理60-69 s为宜,内细胞团（TCM）细胞数和囊胚细胞总数分别为48.2±12.4和142.5±30.1,二者之比约为0.33;果糖组与葡萄糖组卵裂率（62.2±3.87 vs 60.7±2.89）、囊胚率（32.0±1.73 vs 29.7±4.16）,TCM细胞数（43.6±14.5 vs 40.2±11.3）和滋养层（TE）细胞数（99.3±26.7 vs 89.9±24.8）差异也不显著（P〉0.05）。但是数据显示,果糖组囊胚细胞总数要高于葡萄糖组（142.3±21 vs 136.2±35）（P〉0.05）,说明果糖可以代替葡萄糖作为早期胚胎体外培养的能量代谢底物,而且可以提高囊胚质量。

大鲵胚胎早期发育特征和受精率计算方法

探讨了大鲵（Andrias davidianus）胚胎发育过程中受精率的评判标准和计算受精率的最佳时间。对大鲵胚胎发育观察表明：发育到二细胞的胚胎均能发育到神经胚期,因此可以将二细胞胚胎期作为受精的标志;孵化温度在17-20℃时,温度对大鲵的孵化率没有影响;胚胎发育经过24 h后,有90%-95%的受精卵可发育到二细胞期。因此可以以受精后24 h的二细胞分裂数作为计算大鲵胚胎受精率的基础数据。研究结果有利于对大鲵人工繁育效果提前判断和对孵化条件及时调控处理。

取卵日卵泡大小对体外受精后胚胎早期发育影响的护理研究

目的 探讨护理人员取卵日监测卵泡大小对体外受精-胚胎移植（IVF-ET）中卵子成熟及胚胎早期发育的影响.方法 以2012年3月～ 2013年12月来山东省枣庄市妇幼保健院生殖中心行IVF-ET的87个患者为研究对象,研究方法以HCG注射日辅助生殖专职护士进行健康支持教育,取卵日经过专职培训的手术室护士监测观察卵泡直径为依据,对取卵日卵泡大小进行监测、评估、测量液体量,按照卵泡大小将其分大卵泡组、中卵泡组和小卵泡组.取卵手术过程中详细告知实验室人员取出卵泡的大小、取出的液体量.结果 取卵日直径大于15 mm的卵泡获得的卵母细胞成熟度较高（P＜0.01）;（2）大卵泡组卵泡优胚率高于中卵泡组,中卵泡组高于小卵泡组,差异极显著（P＜0.01）.结论 在IVF-ET中,手术室护士通过严密观察、监测卵泡的大小,对实验室人员的详细告知,实验室人员将获得的卵子严格按照大、中、小分类培养,对优质胚胎的获得提供了良好的条件,有利于提高卵子的成熟、受精和早期胚胎发育;有利于提高体外受精-胚胎移植成功率.

胚胎早期发育过程中核仁前体的研究进展

核仁前体存在于卵母细胞及早期胚胎中,由于核仁前体在卵母细胞中的含量较少且结构致密,目前,只有少数核仁前体组分得到了鉴定.核仁前体结构的完整组成尚未被详细解析,明确核仁前体在胚胎早期发育过程中发挥的作用及其机制尚存挑战.早期的观点认为:核仁前体虽不具备加工rRNA及生成核糖体的功能,但该结构为纤维颗粒状核仁的生成提供了物质基础,从而使发育后期胚胎重获核糖体生成能力.近期,这一观点逐步得到了修正.基于显微操作技术的核仁前体转移实验证实:母源核仁前体在胚胎早期发育过程中发挥关键作用,且发挥作用的时间窗口限定在受精至原核期之间.核仁前体可参与染色质重塑过程并维持着丝粒稳定,进而影响胚胎早期发育.本文主要综述了核仁前体的结构功能特点及发挥作用的潜在机制,从核仁前体的角度为拯救早期胚胎的发育潜能提供新思路.

巢蛋白及神经元素3在胚胎早期发育中的表达与分布

目的：比较巢蛋白（Nestin）与神经元素3（Ngn3）在胚胎早期发育各组织中的表达与分布。方法：采用免疫组织化学SABC法对30例5-10周人胚胎发育中各器官组织中Nestin与Ngn3的表达与分布进行定位研究。结果：5周时，肝造血干细胞Nestin、Ngn3阳性，胰芽原始导管上皮细胞、皮肤上皮细胞也呈Ngn3阳性反应；8周后，胚胎皮肤、椎间盘及肾上腺组织Nestin阳性，而Ngn3表达为阴性。结论：Nestin、Ngn3在胚胎早期发育不同组织细胞的表达有不同的时空性，确切意义及机制有待进一步研究。

以囊胚双重染色方法检测果糖对胚胎早期发育效果的影响

本试验结合囊胚细胞(TCM/TE)双重染色方法研究了果糖代替葡萄糖后对牛早期胚胎体外发育效果的影响。结果显示,对第8d囊胚双重染色时,以TritonX-100处理60-69s为宜,TCM细胞数和囊胚细胞总数分别为48.2±12.4和142.5±30.1,二者之比约为0.33;果糖组与葡萄糖组卵裂率(62.2%±3.87vs61.7%±2.89)、囊胚率(32.1%±1.73vs29.7%±4.16)差异均不显著(P>0.05),而且,TCM细胞数(43.6±14.5vs40.2±11.3)和TE细胞数(99.3±26.7vs89.9±24.8)差异也不显著(P>0.05)。但是数据显示,囊胚细胞总数果糖组要高于葡萄糖组(142.3±21vs136.2±35,P>0.05),说明果糖可以代替葡萄糖作为早期胚胎体外培养的能量代谢底物,而且可以提高囊胚质量。

家蚕己糖激酶基因进化分析及其多转录本在胚胎早期发育过程中的表达特性

【目的】明确家蚕(Bombyx mori)二化性品系胚胎早期发育过程中己糖激酶基因(BmHK)不同转录本的表达特性,为深入探究BmHK基因各转录本的生物学功能及揭示其在家蚕胚胎早期发育中的作用机制提供理论依据。【方法】从NCBI检索并下载家蚕等12种昆虫的HK氨基酸序列,采用MEGA 7.0的邻接法(NJ)构建基于HK氨基酸序列相似性的系统发育进化树。以家蚕二化性品系秋丰活化越年蚕卵(丙2胚胎)为材料,分别制备非滞育命运卵(ND)、滞育命运卵(DD)和即时浸酸卵(IA),采用实时荧光定量PCR检测BmHK基因各转录本在家蚕二化性品系胚胎早期发育过程中的表达特性。【结果】BmHK基因属于HSP70-actin家族,存在4个不同的转录本,其长度分别为4610、4608、2818和1520 bp,依次命名为BmHK-a、BmHK-b、BmHK-c和BmHK-d。BmHK-a在3种蚕卵胚胎早期发育过程中整体上呈先升高后降低的变化趋势,且各时间点均表现为IA蚕卵>ND蚕卵>DD蚕卵,IA蚕卵中的BmHK-a相对表达量于发育2 h达峰值,在ND蚕卵和DD蚕卵中于发育48 h达峰值,此后其表达快速下调,至发育96 h均处于较低水平;BmHK-b在3种蚕卵中的表达水平整体上表现为IA蚕卵>ND蚕卵>DD蚕卵,3种蚕卵中的BmHK-b相对表达量变化趋势基本一致,均随发育时间推移呈逐渐上升趋势;BmHK-c在3种蚕卵中的表达差异明显,初产蚕卵中已有较高的表达水平,受精后迅速升高,至发育72 h后BmHK-c在3种蚕卵中的相对表达量再次升高;BmHK-d在3种蚕卵中的相对表达量整体上呈先升高后降低的变化趋势,且各时间点均表现为ND蚕卵>IA蚕卵>DD蚕卵,但IA蚕卵中BmHK-d表达峰值出现的时间早于DD蚕卵和ND蚕卵。【结论】BmHK-a和BmHK-d主要在家蚕胚胎早期发育(产卵或浸酸后3 d)过程中发挥重要作用;BmHK-b虽然也参与家蚕胚胎早期发育过程,但不是主要的糖代谢相关酶;BmHK-c与家蚕胚胎早期发育关系密切,通过糖酵解为胚胎发育提供能量。

大学教学规律在人体胚胎早期发育教学中的应用

笔者通过10多年的教学，认为在人体胚胎早期发育教学中应用大学教学规律，能使学生的专业知识得到丰富，世界观得到升华，业务和政治素质得到提高。

牦牛卵母细胞及体外受精胚胎早期发育基因差异表达的研究

旨在了解牦牛卵母细胞、早期胚胎不同发育阶段相关基因mRNA表达规律,为早期胚胎发育基因表达的调控机制提供分子依据。应用mRNA差异显示技术选取表达量存在差异的基因条带,进行测序和同源性分析,并利用RT-PCR技术检测差异基因在卵母细胞、2-细胞、8-细胞和囊胚中的相对表达水平。结果表明:4条差异条带中,除桑椹胚期1个基因在GenBank中未检测到同源性外,其余3个基因分别与锌指MYND11(ZMYND11)、核小体组装蛋白1样1(NAP1L1)、核糖体蛋白L27(RPL27A)高度同源。ZMYND11基因在成熟卵母细胞、2-细胞、8-细胞、囊胚阶段其表达量呈上升趋势,但无显著性差异。NAP1L1基因在成熟卵母细胞、2-细胞、囊胚阶段其表达量相对较低,而在8-细胞表达量急剧升高(P<0.05)。RPL27A基因从成熟卵母细胞经2-细胞到8-细胞随胚胎发育进程表达量逐渐降低,到囊胚期表达量显著升高(P<0.05)。基因ZMYND11、RPL27A和NAP1L1在牦牛卵母细胞和早期胚胎发育过程中mRNA表达量存在时间性差异,可能与早期胚胎的正常发育及不同的生理活动有关。

瘦素对牛体外胚胎早期发育阻滞的克服

旨在研究瘦素(Leptin)对于牛早期体外胚胎发育阻滞的影响。本研究采用:(1)卵母细胞受精后在不含血清情况下加入不同浓度的Leptin(0、1、10、100ng·L-1 Leptin并以血清组为对照),观察胚胎的发育能力;(2)用RT-PCR方法对正常发育胚胎及阻滞胚胎的Leptin mRNA表达量进行检测;(3)用RT-PCR方法对添加外源性Leptin胚胎的L-R、STAT3mRNA表达量进行检测。结果表明:(1)在卵母细胞受精后加入10或100ng·L-1Leptin胚胎的卵裂率及囊胚率显著高于对照组(P<0.05);(2)正常发育胚胎的Leptin mRNA的表达量显著高于阻滞组(P<0.05);(3)添加外源性Leptin胚胎L-R、STAT3mRNA表达量显著高于对照组(P<0.05)。综上表明:Leptin在牛早期胚胎发育过程中起到重要作用,Leptin和L-R表达量降低预示着胚胎发育停止,并通过JAK/STAT3途径发挥作用。

奶牛胚胎早期死亡的转录组初探

为了探讨奶牛胚胎早期死亡的分子机理,通过对奶牛8-细胞期和桑葚胚期死亡和正常的胚胎样本进行基因转录组测序,联合分析不同时期胚胎之间的差异表达基因,挖掘奶牛胚胎早期死亡的关键基因。本研究首先对单个卵裂球的mRNA进行了提取和反转录,其次成功建立了cDNA文库,并用Illumina高通量测序系统完成胚胎的测序,最后分析了不同时期胚胎的表达差异基因。得到如下结果:①成功利用单细胞RNA提取体系建立并扩增了不同时期胚胎的cDNA文库;②对8-细胞期差异表达基因进行分析,获得2倍以上差异基因157个,其中上调基因6个,下调基因151个;对桑葚胚期差异基因进行分析,获得2倍以上差异基因269个,其中上调基因10个,下调基因259个;③通过GO富集分析发现,正常胚胎和死亡胚胎的差异基因表现在细胞、繁殖过程和结合等方面;④通过KEGG分析,8-细胞期和桑葚胚期正常胚胎与死亡胚胎的差异基因主要表现在细胞凋亡信号通路和内质网蛋白合成通路上。

巨噬细胞移动抑制因子在牛胚胎早期发育中的表达模式及作用初探

巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)在生殖过程中发挥重要作用,但其在早期胚胎发育中的作用尚未阐明。本研究通过RT-PCR、Western-blot和显微注射的方法对MIF在牛胚胎早期发育中的表达模式和功能进行初探。研究结果显示:MIF基因和MIF蛋白在牛体外受精(in vitro fertilization,IVF)胚胎和体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)胚胎早期发育过程中持续性表达,MIF基因表达量较低,在SCNT胚胎2细胞、4细胞、8细胞和囊胚期的表达显著高于IVF胚胎,但MIF蛋白在SCNT胚胎中的表达量显著低于IVF胚胎;干扰MIF的表达后,胚胎8细胞期的阻滞率(51.2%vs.29.5%,P<0.05)显著升高,囊胚率(17.3%vs.36.5%,P<0.05)和囊胚细胞数(85.6±9.3 vs.110.2±10.5,P<0.05)显著降低,2细胞期和4细胞期胚胎的还原型谷胱甘肽(reduced glutathione,GSH)水平也显著降低,提高MIF干扰组胚胎GSH水平可以显著改善胚胎的囊胚率和囊胚细胞数(16.9%vs.32.9%,P<0.05;85.4±8.6 vs.102.2±10.4,P<0.05)。研究结果初步表明,MIF蛋白在牛胚胎早期发育中发挥重要作用,可能通过调控胚胎GSH水平影响胚胎早期发育率及囊胚质量。

小鼠早期胚胎细胞膜电位的测定及胚胎早期分化诱因的探讨

目的:调查早期胚胎细胞分化的诱因。方法:使用Patch clamp7型膜电位测定仪,测定ICR小鼠4、8、16、32细胞期胚胎的细胞膜电位。结果:①细胞位置无差异时,胚胎细胞的膜电位差异不显著;②早期胚胎的细胞膜电位存在个体差异;③早期胚胎的细胞在不同发育阶段具有不同的膜电位,且其膜电位值显著下降;④同—胚胎的周边细胞与内部细胞之间,细胞膜电位存在显著性差异。结论:早期胚胎分化的诱因是不同位置的细胞受到"胚胎场"的影响不同,"胚胎场"是指构成胚胎的细胞,因其具有的膜电位因素在相互之间形成的影响力。

银狐胚胎早期发育不同阶段的超微结构观察

在银狐繁殖期 ,母狐自然交配后不同时间处死 ,从输卵管或子宫角内冲取的胚胎 ,通过透射电镜观察 ,对胚胎发育过程中的细胞器变化、细胞核变化等超微结构进行了较为系统的观察 。

早孕因子作为屡配不孕动物胚胎早期消失的标志

早孕因子作为屡配不孕动物胚胎早期消失的标志张美佳摘译王建辰校早孕因子（ＥＰＦ）首先由Ｍｏｒｔｏｎ等用改良玫瑰花环抑制试验所证实。玫瑰花环抑制值（ＲＩＴ）是指抗淋巴细胞血清（ＡＬＳ）抑制淋巴细胞和异种红细胞之间形成玫瑰花环的能力，其抑制结果低于无ＡＬＳ...

导致妊娠母牛胚胎早期死亡的三大原因

早期胚胎死亡主要是指胚胎在附植前后发生的死亡,为屡配不孕的主要原因之一。奶牛的受精率一般能够达到90%,受精后胚胎损失可达29%-39%,占牛繁殖失败的5%-10%。胚胎损失发生的主要时间段在受精后43 d以内,大多数早期胚胎死亡发生在配种后8-19 d,占胚胎损失的25%-30%。

妊娠母牛胚胎早期死亡或流产的病因分析及防控措施

牛的孕体死亡或支持胎儿发育的子宫内环境发生问题可造成妊娠提前终止,导致母牛流产的发生。妊娠母牛孕胎发育异常可导致其流产或产下的犊牛在出生后不久很快死亡。实践证明,牛的多数流产病例大多并未被及时确诊。正在任何一个繁殖牛群中,不论其表现得多么正常,都会出现一定数量的胚胎死亡。养牛工作者可以做到的是要充分了解牛胚胎死亡、流产或胎儿发育异常的常见原因,以便拿出切实有效的措施,将损失降到最小。