胚胎来源巨噬细胞的起源及其在肝脏中功能的研究进展

胚胎来源巨噬细胞(embryonicstem cell-derived macrophages,EDMs)是一种来源于胚胎祖细胞的巨噬细胞亚群,在胚胎时期就进入特定的组织。在正常肝脏中,EDMs通过自我更新维持数量,在稳态期间很少需要骨髓单核细胞分化补充。肝脏发生炎症反应时,肝组织中的EDMs由M1型转为M2型,并募集骨髓单核细胞,平衡Ⅰ型与Ⅱ型炎症反应,进而发挥免疫监视、损伤修复、维持稳态的功能,有效避免肝脏慢性炎症的发生和恶变。其位于肝血窦内,具有吞噬循环肿瘤细胞的功能。而在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的后期发展阶段,EDMs和骨髓来源单核细胞系相互作用,参与构成肿瘤免疫抑制的微环境。本文就巨噬细胞的起源及EDMs在肝脏中维持稳态、介导炎症等方面的作用作一综述。

建立植入前遗传学检测人胚胎来源的无动物源性干细胞系

【目的】在无动物源性的干细胞培养体系中建立植入前遗传学检测(PGT)胚胎来源的人胚胎干细胞系,为医学研究提供疾病模型。【方法】在我们的研究中,对无动物源性的人类包皮成纤维细胞饲养层(XF-HFF)与成分确定的培养基(CDM)构建的无动物源性培养体系进行了评估。在该培养体系中,利用染色体平衡易位患者PGT来源的废弃胚胎建立一个新的人胚干细胞(hESC)细胞系。【结果】新建立的人胚胎干细胞系在无动物源性培养系统中可长期培养传代(>45个代次)。核型分析显示,在传代45代次后,新建立的人胚胎干细胞仍保持一致的核型。XF-HFF/CDM中的hESC仍保持多能性。通过荧光免疫染色检测到SSEA-3、SSEA-4、SSEA-1、TRA-1-60、TRA-1-81等多能标志物的表达;RT-PCR分析显示,在XF-HFF/CDM培养体系上生长的hESC中存在干细胞标记。小鼠体内实验也证实了hESC在体内维持其多能性。【结论】本研究建立了PGT来源的人胚胎干细胞系,为进一步建立携带遗传疾病基因的hESC系并为临床研究和治疗提供疾病模型打下了基础。

人胚胎来源细胞在生物医药领域的应用历史及研究和监管进展

自20世纪60年代人类首次利用流产胎儿组织建立人二倍体细胞系(HDCs)以来,人胚胎来源的细胞就被广泛应用于生物医学研究领域,为提高人类健康水平作出了重大贡献。近年来,包括人胚干细胞在内的人多能干细胞在再生医学领域展现出巨大的治疗潜力,并受到各国政府和社会公众的高度关注。同时,由于历史文化、宗教信仰、伦理道德等多方面的因素,人胚胎来源细胞的研究和应用一直存在较大争议。文章通过介绍人胚胎来源细胞在生物医药领域研究应用的历史和进展,探究不同国家监管制度的演进,以期为完善我国对该领域的监管框架和技术要求提供有益参考。

0PN来源胚胎形成的影响因素及其利用价值分析

目的探讨常规体外受精(IVF)后的未见原核(0PN)受精卵发生的影响因素及对其发育潜能影响。方法对2019年1月至2021年12月期间在保定市妇幼保健院生殖医学科1597个常规IVF周期及596个冻融胚胎移植(FET)周期进行回顾分析。将常规IVF-ET周期分为A1组(无0PN来源胚胎,n=731)、A2组(0<0PN来源胚胎率≤20%,n=495)和A3组(0PN来源胚胎率>20%,n=371)三组,比较三组的患者基本情况、新鲜周期临床治疗情况和实验室指标。依据行囊胚培养的D3卵裂胚来源不同分为B1组(0PN来源,n=2409)和B2组(2PN来源,n=6602)两组,比较两组囊胚形成率、可利用囊胚形成率。依据囊胚来源将囊胚FET周期分为C1组(0PN来源冻融囊胚,n=85)和C2组(2PN来源冻融囊胚,n=511),比较两组的妊娠率、着床率、流产率、活产率、胎儿畸形率等指标。结果(1)与A1组比较,A2、A3组的年龄更小、基础FSH水平更低、抗苗勒管激素(AMH)水平更高(P<0.05),而组间不孕年限、体质量指数(BMI)无显著差异(P>0.05)。A2、A3组两组患者用药天数、长方案占比、获卵数显著高于A1组(P<0.05),其中A2组拮抗剂方案占比最低,获卵数最高。(2)B1、B2两组的囊胚形成率无显著差异(P>0.05),B1组的可利用囊胚形成率显著高于B2组(P<0.05)。(3)FET周期中,C1、C2组患者间年龄、不孕年限、BMI、优质囊胚比例、D5囊胚占比均无显著差异(P>0.05),C2组的移植胚胎数显著高于C1组(P<0.05)。囊胚移植后,两组间种植率、妊娠率、孕周、早产率、新生儿体重、新生儿体长比较均无显著差异(P>0.05),C1组流产率显著高于C2组、活产率显著低于C2组(P<0.05)。结论接受常规IVF-ET治疗的患者卵巢储备情况可能会对0PN来源胚胎的形成有一定影响;0PN来源囊胚移植流产率高于2PN来源囊胚,而活产率低于2PN来源囊胚,但在患者无2PN来源胚胎可移植的情况下,0PN来源囊胚移植提高了胚胎利用率,降低了患者诊疗费用,减少了患者精神及身体上的痛苦,有很大利用价值。

不同方案和不同来源胚胎的临床妊娠结局及子代差异性分析

目的 探讨超长方案和拮抗剂方案不同来源胚胎临床妊娠结局及子代差异性。方法 回顾性分析2018年1月至2022年6月赣州市妇幼保健院生殖与遗传科控制性超促排卵(controlled ovarian hyperstimulation,COH)助孕患者的随访数据,包括超长方案1000例周期,拮抗剂方案1000例周期,通过产妇姓名、年龄、胚胎情况等关键数据在赣州市妇幼保健院生殖与遗传科的体外受精(in vitro fertilization,IVF)系统中进一步筛选出在本科室助孕并怀孕的孕产妇,筛查出500例纳入本研究。其中超长方案组258例,拮抗剂方案组242例;根据移植胚胎性质分为囊胚组258例,卵裂胚组242例;根据移植周期方式分为新鲜周期组224例,解冻周期组276例。分析比较两组患者的一般情况、种植率、临床妊娠率、早期流产率,并检测两组外周血中hCG日窦状卵泡数(human chorionic gonadotrophin antral follicle count,hCGAFC)、hCG前日雌二醇(hCG pre-day estradiol,PhCGE_(2))、hCG日雌二醇(hCG daily estradiol,hCGE_(2))、hCG日孕酮(hCG daily progesterone,hCGP)、hCG日黄体生成素(hCG daily luteinizing hormone,hCGLH)水平。记录两组卵巢过度刺激综合征(orian hyperstimulation syndrome,OHSS)发生率及新生儿并发症情况。结果 超长方案组的平均获卵数、囊胚形成率、优质囊胚率比较,差异均无统计学意义(P>0.05);超长方案组Gn总用量与用药时长均高于拮抗剂组,差异有统计学意义(P<0.05);两组患者hCGP比较,差异无统计学意义(P>0.05),但超长方案组PhCGE_(2)、hCGE_(2)及hCGAFC均较拮抗剂方案组明显升高,而hCGLH则明显降低(P<0.05)。此外,超长方案组OHSS发生率和临床妊娠率均更高(P<0.05);超长方案和拮抗剂方案来源的胚胎,无论囊胚或卵裂期胚胎,无论采用新鲜周期或解冻周期移植,两组新生儿分娩孕周、出生体重、新生儿性别、出生缺陷比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 超长方案和拮抗剂方案来源胚胎的子代差异性较小,但超长方案的新鲜临床妊娠率更高,更适合卵巢储备正常反应患者,采用新鲜周期移植;而拮抗剂方案有助于降低OHSS的发生风险,安全性更好,更适合卵巢储备高反应患者,采用解冻周期移植。

人类胚胎干细胞的来源与伦理思考

人类胚胎干细胞研究的伦理问题较多 ,因此要思考胚胎干细胞的伦理问题。胚胎干细胞来源有四种 :选择性流产的人类胚胎组织 ;治疗不孕症夫妇不需要的由体外受精产生的人类胚胎 ;由捐献者专门为研究所捐献的配子由体外受精产生的人类胚胎 ;由体细胞核移植技术将人体细胞核移植入人或动物的卵泡内产生人类胚胎或嵌合体胚胎。用不同胚胎来源研究干细胞产生的伦理问题不同 。

卵泡期长效长方案与高孕激素下促排卵方案来源囊胚在冻融胚胎移植中应用促性腺激素释放激素激动剂降调节-激素替代治疗内膜准备方案的临床效果

目的探讨卵泡期长效长方案和高孕激素下促排卵(PPOS)方案来源的囊胚在冻融胚胎移植(FET)中应用促性腺激素释放激素激动剂(GnRHa)降调节-激素替代治疗(HRT)内膜准备方案的临床效果。方法选取2018年1月1日至2018年12月31日十堰市人民医院(湖北医药学院附属人民医院)生殖医学中心收治的741例行FET治疗的不孕症患者作为研究对象。对其进行回顾性分析。根据囊胚来源方案分为两组,卵泡期长效长方案为A组(n=361),PPOS方案为B组(n=380),A组、B组根据年龄分为不同的亚组,即a组<30岁,b组30~35岁,c组>35岁,比较A组、B组的基线资料种植率、临床妊娠率、流产率、多胎率、异位妊娠率、活产率和不同年龄亚组的妊娠结局。结果A组和B组的年龄、种植率、临床妊娠率及活产率比较,差异具有统计学意义(P<0.05);A组和B组不孕年限、体重指数(BMI)、雌激素水平、子宫内膜厚度、胚胎移植个数、多胎率、流产率及异位妊娠率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论与PPOS方案相比,卵泡期长效长方案来源的囊胚在FET中应用GnRHa降调节-HRT内膜准备方案,可提高种植率、临床妊娠率及活产率,但不同年龄段患者平均活产率无明显差异。

对不同来源的人类胚胎干细胞研究的伦理论争

人类胚胎干细胞（HESC）研究是当代生物科学技术中的热点问题之一，该研究产生的伦理问题已引起各国政府、学术界乃至广大公众的广泛争议。争论的焦点主要集中在两方面：第一是胚胎的道德地位之争，即如何看待胚胎——胚胎是不是人？第二是胚胎干细胞来源之争，即人胚胎干细胞的来源是否合乎法律及道德，应用过程中所产生的伦理及法律问题该如何处理。受精卵／胚胎／胎儿是具有潜力的位格人，应该赋予其完全的位格人的道德地位。基于该立场，对四种不同来源的眦SC研究的伦理争论进行了深入的探讨。

短时体外受精新鲜移植周期中未见原核与单原核来源胚胎的临床价值

目的 分析短时体外受精新鲜移植周期中未见原核(0PN)和单原核(1PN)来源胚胎的临床妊娠情况,探讨这部分胚胎的临床应用价值。方法 回顾性分析2016年1月至2020年1月在海军军医大学(第二军医大学)第一附属医院生殖医学中心接受短时体外受精-胚胎移植治疗的524例不孕症患者共524个新鲜移植周期的实验室资料。按胚胎来源将移植周期分为A组和B组,A组均为0PN或1PN来源胚胎,B组均为双原核(2PN)来源胚胎。将胚胎移植个数为单胚胎者分为A1组和B1组,A1组为0PN或1PN来源胚胎,B1组为2PN来源胚胎;将胚胎移植个数为双胚胎者分为A2组和B2组,A2组为0PN+0PN、1PN+1PN或1PN+0PN来源胚胎,B2组为2PN+2PN来源胚胎。分别比较A组与B组、A1组与B1组、A2组与B2组的临床、实验室数据及妊娠结局。结果 B组的周期获卵数大于A组,B2组的周期获卵数大于A2组,差异均有统计学意义(P均<0.01);A1组与B1组周期获卵数差异无统计学意义(P>0.05)。A组与B组、A1组与B1组及A2组与B2组的种植率、临床妊娠率、流产率及活产率差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 在短时体外受精新鲜移植周期中,周期获卵数较多的周期获得2PN来源胚胎的可能性较大。0PN或1PN来源胚胎与2PN来源胚胎在短时体外受精新鲜移植周期中的妊娠结局无明显差异,可以在患者知情同意后移植0PN或1PN来源的胚胎。

血管内皮生长因子对胚胎干细胞来源神经干细胞增殖的促进

目的:观察血管内皮生长因子对胚胎干细胞来源的神经干细胞增殖的促进作用,为临床治疗提供实验依据。方法:实验于2003-10/2005-05在北京大学医学部干细胞研究中心完成。小鼠胚胎干细胞在不含有白细胞抑制因子的条件下形成类胚体,经过7d选择性培养得到神经干细胞,利用免疫荧光的方法检测神经干细胞标志物nestin以及sox-2的表达情况;将神经干细胞与血管内皮生长因子共培养,通过氚标记的胸腺嘧啶核苷掺入的方法测定细胞的增殖速度;在外源性血管内皮生长因子存在的情况下,利用受体2中和抗体或者血管内皮生长因子受体2特异性抑制剂阻断血管内皮生长因子受体,观察外源性血管内皮生长因子对神经干细胞的增殖作用。结果:经鉴定胚胎干细胞来源的神经干细胞(95±3)%以上表达神经干细胞标志物nestin以及sox-2,该细胞在体外可以传代。与血管内皮生长因子共培养后,发现随着血管内皮生长因子浓度的升高神经干细胞增殖速度明显加快。通过中和抗体或者血管内皮生长因子受体2特异性抑制剂阻断血管内皮生长因子受体2可以阻断外源性血管内皮生长因子对神经干细胞的增殖作用。结论:实验中诱导小鼠胚胎干细胞得到了高纯度的神经干细胞,血管内皮生长因子能够通过血管内皮生长因子受体2促进神经干细胞增殖。

人胚胎干细胞来源畸胎瘤形成的无创分子影像

畸胎瘤的形成严重限制了人胚胎干细胞移植的应用和临床治疗。无创分子成像技术是一种新型有效的技术方法，可以准确监测人胚胎干细胞治疗过程中的致瘤性。本研究中，我们对源于人胚胎干细胞的畸胎瘤的血管生成过程进行了分子影像观察，首次报道通过使用^64Cu标记的RGD四聚体^64Cu—DOTA—RGD4显示畸胎瘤内整合素αvβ3的表达，从而得到畸胎瘤形成过程的正电子发射断层扫描影像。

移植非正常受精来源的胚胎对临床妊娠结局的影响

目的探析非正常受精来源的胚胎移植对临床妊娠结局的影响。方法回顾性分析玉林市妇幼保健院2014年7月至2019年5月常规体外受精-胚胎移植(IVF-ET)收治就诊的5012个IVF周期的临床资料,将含0PN/1PN与不含0PN/1PN胚胎周期患者资料和妊娠结局比较。结果含0PN与不含0PN胚胎周期、含1PN与不含1PN胚胎周期在年龄、基础FSH、2PN率、获卵数等差异显著;1PN移植患者的年龄高于1PN+2PN、2PN移植患者,0PN移植者年龄高于0PN+2PN、2PN移植患者在获卵数、平均移植胚胎数、临床妊娠率、植入率、活产率方面1PN移植患者低于1PN+2PN、2PN移植者,2PN移植患者低于0PN+2PN、2PN移植者;流产率方面,1PN流产率明显低于1PN+2PN、2PN移植者,2PN移植者低于1PN+2PN移植者。结论在取得患同意后也可应用0PN/1PN来源胚胎进行移植。

改良三维条件下人胚胎干细胞向内皮细胞的分化及功能

目的建立一种改良的三维分化无血清方法,对人胚胎干细胞(hESCs)向内皮细胞进行分化,并对这种方法得到的人胚胎干细胞来源内皮细胞(hESC-ECs)进行功能检测。方法在低附着培养皿中培养未分化的H9 hESCs12 d,使其形成类胚体(EBs),12 d后将已形成的EBs收集起来,用浓度为1.5 mg/ml的Ⅰ型鼠尾胶原重悬,加入六孔板中,在37℃待胶原凝固后加入EGM-2培养基培养3 d,获得出芽类胚体后用0.25%胶原酶Ⅰ和0.56 U/ml LiberaseBlendzyme消化芽生类胚体各20 min,采用流式技术分选出其中CD31阳性的细胞,并用乙酰化低密度脂蛋白(ac-LDL)摄取实验和成管实验验证这部分细胞的内皮细胞功能。结果建立了一种基于胶原培养环境的三维分化方法,采用这种方法能够将hESCs向内皮细胞分化的效率提高到18%,最终获得的hESC-ECs具有和人脐带静脉内皮细胞(HU-VECs)相似的细胞表面标志物,并在乙酰化LDL吞噬实验和血管新生实验中表现出良好的内皮细胞功能。结论建立的改良三维分化方法能够明显提高hESCs向内皮细胞的分化效率,是一种简单高效的分化方法,同时无血清培养方法为将来hESC-ECs的临床应用提供了可能。

本刊干细胞研究栏目组稿重点：胚胎干细胞培养分化相关文章

小鼠胚胎干细胞来源平滑肌细胞的鉴定及其功能分析

首批备案胚胎干细胞临床研究项目启动

日前，国家卫生计生委和国家食品药品监督管理总局首批备案的干细胞临床研究项目“人胚胎干细胞来源的神经前体细胞治疗帕金森病”和“人胚胎干细胞来源的视网膜色素上皮细胞治疗干性年龄相关性黄斑变性”在郑州大学第一附属医院正式启动。

Necdin对大鼠牙胚外胚间充质干细胞成牙分化和矿化的影响

目的探讨胚胎癌细胞来源分化神经元特异蛋白(neurally differentiated EC-cell-derived protein,Necdin)对大鼠牙胚外胚间充质干细胞(ectomesenchymal stem cells,EMSCs)成牙分化和矿化的调控作用。方法利用免疫荧光染色检测Necdin在E13.5d、E19.5d大鼠牙胚中的表达分布情况。分离培养E19.5d大鼠牙胚EMSCs,流式细胞术鉴定细胞表型,构建Necdin沉默慢病毒感染EMSCs,分为阴性对照组(sh-NC)和沉默组(sh-Necdin)。流式细胞术检测EMSCs凋亡情况,CCK-8法检测EMSCs增殖能力,划痕实验检测EMSCs迁移能力,矿化诱导后通过碱性磷酸酶染色、茜素红染色、RT-PCR和Western blot观察Necdin对EMSCs成牙分化和矿化的调控作用。结果免疫荧光显示Necdin在内、外釉上皮和上皮与间充质接触区域呈强阳性表达;牙胚组织来源的EMSCs沉默Necdin后,sh-Necdin组EMSCs凋亡率较sh-NC组增多(P<0.01),与sh-NC组相比,sh-Necdin组EMSCs的增殖能力更强(P<0.01),但迁移能力变弱(P<0.01);与sh-NC组相比,sh-Necdin组碱性磷酸酶染色更浅且矿化结节形成更少;sh-Necdin组EMSCs成牙分化和矿化相关的基因与蛋白表达量明显低于sh-NC组(P<0.05)。结论Necdin在大鼠牙胚未来成牙分化和矿化区域呈特异性表达,沉默Necdin促进EMSCs凋亡和增殖,但抑制EMSCs迁移以及成牙分化和矿化,Necdin可能在牙发育矿化过程中发挥重要作用。

巨噬细胞亚群在母胎免疫耐受中的作用

母胎界面主由胎盘、子宫内膜（或蜕膜）和肌层3部分组成,其中胎盘起源于胚胎,子宫蜕膜和肌层属于母体。子宫蜕膜组织免疫细胞与同种半异体胚胎来源的抗原和滋养层细胞直接接触,却不对其产生免疫排斥,这种特殊的免疫耐受是胚胎正常发育的前提[1]。研究表明,正常情况下,巨噬细胞普遍存在于母胎界面,在妊娠的各个阶段,

胚胎干细胞来源的树突细胞制备骨髓瘤疫苗的研究

树突细胞（DC）是体内功能最强大的专职抗原呈递细胞，由于其具有激活初始T淋巴细胞的能力，因而被认为是机体免疫的始动者，在抗肿瘤免疫方面发挥着重要作用。DC的免疫治疗亦被认为是最具前景的抗肿瘤治疗方法之一。我们利用胚胎干细胞（ESC）的全能性在体外诱导出具有正常表型及功能的DC用以制备骨髓瘤疫苗，并检测其抗肿瘤活性。

诱导多能干细胞修复脊髓损伤的机制研究与应用进展

目前，脊髓损伤（SCI）的治疗存在很多困难，其面临的主要问题是中枢神经系统的再生能力有限，其丢失的神经元无法替代，轴突损伤无法弥补。通过移植来自胎儿的中枢神经系统组织或胚胎干细胞，可分化成神经元和神经胶质细胞，具有形成功能性神经突触的潜力，并在脊髓损伤节段的治疗过程中起重要作用。然而，胚胎或胚胎干细胞来源的神经干细胞，可能会引发伦理问题。诱导多能干细胞（iPSC）可以产生神经前体细胞，并且可以分化成神经干细胞，在SCI的治疗中实用性较强，而且提供了一个符合医学伦理的来源。应用自体细胞作为转化来源，避免了免疫排斥反应的问题。在前期研究中涌现的体细胞直接转化技术又进一步缩短诱导周期，提高治疗效率。本文对成体细胞重编程技术治疗SCI的方法更新、机制研究的发展，未来前景等作一综述。