焦点解决模式对胚胎植入前遗传学诊断/筛查患者负性情绪及希望水平的影响

目的:研究焦点解决模式对胚胎植入前遗传学诊断/筛查患者负性情绪及希望水平的影响。方法:选取2019年11月至2020年11月在本院胚胎植入前拟行遗传学诊断/筛查的80例患者作为研究对象,按照随机抽签方式将其分为观察组和对照组,每组40例,对照组采取常规护理方案,观察组在对照组基础上采用焦点解决模式,比较两组护理满意度,比较两组护理前后负性情绪[焦虑自评量表(SAS)、抑郁自评量表(SDS)、心理弹性量表(CD-RISC)]、Herth希望量表(HHI)评分,另比较两组妊娠结局。结果:观察组护理满意度为92.50%,显著高于对照组的72.50%,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组护理后SAS、SDS评分显著低于护理前及对照组,CD-RISC水平显著高于护理前及对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组护理后积极行为、行为态度、亲密关系得分显著高于护理前及对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。比较两组妊娠成功率、流产率、活产率,观察组成功率、活产率比对照组高,观察组流产率比对照组低。结论:焦点解决模式对胚胎植入前遗传学诊断/筛查患者负性情绪及希望水平的改善有较高价值,建议后期加大样本数量,再行统计。

应用二代测序技术进行胚胎植入前遗传学筛查及诊断的基本原理

辅助生殖技术的发展已帮助越来越多不孕不育的夫妇解决生育难题,而胚胎植入前遗传学筛查(PGS)及胚胎植入前遗传学诊断(PGD)进一步排除了存在遗传缺陷的胚胎,并选择健康胚胎进行植入,从而极大降低了新生儿患遗传性疾病的概率。这两项技术最初采用基于分子杂交或聚合酶链式反应(PCR)的检测方法,随后微阵列技术也被应用其中。随着人类基因组计划的完成,DNA测序技术进入高速发展的阶段,二代测序(NGS)采用鸟枪法为基本测序策略,结合生物信息学工具,以高通量、较低成本、检测项目覆盖面广、自动化程度高、可检测未知片段等优势,正不断扩大在PGS/PGD中的应用,同时也对辅助生殖技术产生了深远的影响。

无创胚胎植入前非整倍体筛查的诊断有效性分析

【目的】探讨无创胚胎植入前非整倍体筛查(niPGT-A)的诊断有效性。【方法】收集并再次分析了2018年7月到2019年7月期间,在中山大学附属第六医院生殖医学中心因染色体相互易位,或罗氏易位经首次滋养层细胞(TE)活检(TE1)行植入前,遗传学检测被诊断为非整倍体或嵌合的患者捐献胚胎24枚。解冻捐赠胚胎行滋养层细胞活检(TE2)、内细胞团活检(ICM)并收集囊胚培养液/囊胚腔液(BCM/BF)通过高通量测序技术获得遗传信息。以ICM的结果为胚胎真实染色体结果,比较TE1、TE2及BCM/BF的核型一致性。【结果】TE1、TE2及BCM/BF与相应的ICM的核型一致性分别为66.7%,87.5%和79.2%(P>0.05),任意两组之间的差异没有统计学意义(P>0.05)。【结论】利用囊胚培养液/囊胚腔液中的游离DNA行无创胚胎植入前非整倍体筛查可以获得与同期活检的TE2和ICM相似的诊断有效性。

基于“医患共享决策”的护理干预在胚胎植入前遗传学诊断/筛查患者中的应用

目的探讨基于“医患共享决策(SDM)”的护理干预在胚胎植入前遗传学诊断/筛查(PGD/PGS)患者中的应用效果。方法回顾性选取2020年1月至2021年6月广东省中山市博爱医院收治的82例行PGD/PGS的患者作为研究对象,根据护理干预方法的不同分为对照组与研究组,每组各41例。对照组行常规护理干预,研究组行基于“SDM”护理干预。比较两组患者干预前、PGD/PGS结束时心理状况[采用抑郁自评量表(SDS)和焦虑自评量表(SAS)评估];比较两组决策参与满意度(采用医院自制决策参与满意度调查表评估)。结果干预前,两组的SDS、SAS评分比较,差异无统计学意义(P>0.05);PGD/PGS结束时研究组SDS、SAS评分低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组决策参与满意度调查表评分高于对照组,差异有统计学意义(t=7.020,P<0.001)。结论基于“SDM”的护理干预可有效改善PGD/PGS患者心理状况,提高其决策参与满意度。

胚胎植入前非整倍体筛查的研究进展

胚胎植入前非整倍体筛查是选择染色体数目正常的胚胎用于体外受精/单精子卵胞浆内显微注射周期的移植,目前采用荧光原位杂交方法可以分析5条或9条染色体。本文主要概述胚胎植入前非整倍体筛查在高龄待孕妇女、早期不明原因习惯性流产、反复植入失败者中应用,在这些情况中发生非整倍体的概率较高,正常胚胎鉴定和非整倍体的排除有利于提高体外受精-胚胎移植的胚胎植入率和妊娠率。其外简明介绍其他的新方法在胚胎植入前非整倍体筛查中研究进展。

胚胎植入前遗传学筛查在复发性流产及高龄患者中的应用

目的探讨胚胎植入前遗传学筛查(PGS)在高龄和复发性流产(RSA)患者中的应用价值。方法选择91例行PGS治疗的高龄和RSA患者作为研究对象,用单细胞全基因组扩增(WGA)结合二代测序技术(NGS)对胚胎23对染色体进行筛查,选择染色体正常的胚胎进行移植,观察其临床结局。结果行PGS检测的526枚胚胎,染色体异常率为67. 49%(355/526),其中RSA患者染色体异常率为65. 96%(217/329),临床妊娠率(CPR)为56. 00%(28/50);高龄患者染色体异常率为72. 84%(177/243),CPR为57. 14%(16/28)。结论高龄和RSA患者胚胎异常率较高,通过PGS可改善其妊娠结局。

植入前胚胎遗传学筛查对复发性流产患者妊娠结局的影响

目的:探讨胚胎植入前遗传学筛查技术对复发性流产患者妊娠结局的影响。方法:对复发性流产患者随机分组,对照组进行常规的体外受精胚胎移植,筛查组进行胚胎植入前遗传学筛查,比较两组妊娠结局。结果:筛查组40个治疗周期共活检212枚胚胎,其中整倍体胚胎115枚(54.2%),非整倍体胚胎97枚(45.8%);筛查组胚胎种植率和临床妊娠率(68.6%、35.3%)高于对照组(68.6%、52.8%),早期流产率(12.5%)低于对照组(26.3%)(P<0.05)。结论:对复发性流产患者行胚胎植入前遗传学筛查,选择整倍体胚胎移植,可提高种植率和临床妊娠率,降低早期流产率。

胚胎植入前遗传学诊断/筛查的应用研究进展

胚胎植入前遗传学诊断(PGD)/筛查(PGS)是目前临床上较为常用的新型胚胎植入前遗传学检查方法。PGD主要用于在胚胎移植前检测特定的突变以及非平衡染色体异常是否传递到卵子或胚胎。PGS主要用于检测胚胎染色体的非整倍性。本文主要综述PGD和PGS目前在临床上的应用情况,为胚胎植入前遗传学检查方法的选取提供理论依据。

高龄、复发性流产和反复种植失败患者胚胎植入前遗传学筛查结果分析

目的探讨胚胎植入前遗传学非整倍体检测(PGT-A)技术是否能改善女方高龄、复发性流产及反复种植失败患者的临床结局。方法通过二代测序(NGS)平台检测不同指征下患者胚胎染色体非整倍体情况,选择基因组拷贝数正常胚胎进行解冻移植,比较各组人群妊娠率和活产率的差异。结果共纳入PGT-A移植周期311个,其中高龄组18个周期,复发性流产组108个周期,反复种植失败组24个周期及对照组161个周期[均为地中海贫血PGT-M周期患者,平均年龄(32.1±4.3)岁]。另外还纳入同一时间段内1508个周期未做PGT-A的女方高龄患者进行比较分析。高龄组、复发性流产组、反复种植失败组及对照组临床妊娠率分别为50.0%、55.6%、58.3%、66.5%,差异无统计学意义(P>0.05),各组间活产率比较差异无统计学意义(P>0.05)。PGT-A高龄组中临床妊娠率为50.0%,高于女方高龄且未做PGT-A人群的28.4%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PGT-A可避免染色体非整倍体的胚胎植入,改善高龄、复发性流产和反复种植失败患者的临床结局,特别是对高龄女性可以有效提高临床妊娠率。

单细胞微阵列比较基因组杂交技术在胚胎植入前遗传学筛查中的应用

目的建立利用单细胞微阵列比较基因组杂交(array CGH,aCGH)技术进行胚胎植入前遗传学筛查(PGS)技术平台,并应用aCGH技术进行PGS获得持续妊娠。方法采集废弃胚胎来源卵裂球10个,核型正常男性(46,XY)淋巴细胞3个,通过单细胞全基因组扩增后,利用aCGH技术进行染色体非整倍体分析;在此基础上,将aCGH技术应用于临床一例反复流产患者。结果 3个淋巴细胞及9个废胚来源卵裂球的全基因组扩增成功,1个废胚来源卵裂球扩增失败,扩增成功的样本通过aCGH检测后均获得明确的诊断,3个淋巴细胞分析结果与已知核型一致;临床病例5个胚胎活检的单卵裂球均得到明确诊断,移植1枚正常整倍体胚胎后获得临床持续妊娠。结论在胚胎植入前遗传学筛查中,单细胞aCGH技术能全面地评估胚胎染色体组情况,可应用于临床PGS。

不同指征患者胚胎植入前遗传学筛查结果分析

目的通过对高龄、复发性流产及反复种植失败患者进行胚胎植入前非整倍体遗传学检测,分析各指征下胚胎染色体情况。方法收集2018年1月至2019年12月间在柳州市妇幼保健院生殖中心行胚胎植入前遗传学筛查患者131例,胚胎培养至囊胚期进行活检。根据女方年龄将胚胎分为高龄组(≥38岁,n=69)和非高龄组(<38岁,n=62),按患者不同指征分为复发性流产组(n=86)和反复种植失败组(n=22)。通过二代测序平台分析,比较不同年龄段和不同指征下患者胚胎染色体非整倍体情况。结果女方年龄<38岁组胚胎染色体非整倍体率(63.78%)显著低于女方年龄≥38岁组(79.55%),差异具有统计学意义(χ^(2)=20.237,P<0.001)。在不同指征下,复发性流产和反复种植失败患者胚胎染色体非整倍体率分别为67.49%和73.55%,两组间胚胎异常率比较差异无统计学意义(χ^(2)=1.657,P=0.198)。胚胎的异常染色体数目(1条染色体异常、2条染色体异常和≥3条染色体异常)在复发性流产组中频率(40.85%、20.12%和39.02%)与反复种植失败组(37.08%、21.35%和41.57%)比较差异无统计学意义(χ^(2)=7.185,P=0.126)。将染色体异常的类型分为单体、三体、微缺失微重复和嵌合四种,反复种植失败组染色体单体比率(38.05%)显著高于复发性流产组(24.79%),差异具有统计学意义(χ^(2)=7.504,P=0.006)。结论高龄、复发性流产及反复种植失败的女性,胚胎染色体异常具有较高的比例,应用PGT-A可有效地避免染色体非整倍体的胚胎植入,改善临床结局。

耳聋基因的胚胎植入前诊断

耳聋是人类最常见的遗传疾病之一,世界不同国家地区报告新生儿耳聋的发病率在1~3‰。在我国大概有2780万聋人,每年有3万多先天性耳聋的新生儿出生,之前有调查显示耳聋新生儿中有54.93%是由遗传因素造成。如此庞大的耳聋及突变基因携带者家庭很大一部分具有强烈的生育正常听力下一代的意愿。目前对于阻断耳聋向子代遗传,产前诊断技术是唯一的预防手段。但由于其有创、可能面临大月份引产等带来一定的伦理争议。对于耳聋这种非致死性遗传病,胚胎植入前诊断(preimplantation genetic diagnosis,PGD)是目前国际上主流的预防手段。因此我们亟需建立一种针对中国人群耳聋遗传病特点的,简便易行、可靠性高、成功率高的胚胎植入前诊断方法。成为耳聋三级预防体系的第一道关卡。本文系统回顾了单基因遗传病尤其是遗传性耳聋胚胎植入前诊断方法的发展历史和最新进展,阐述了胚胎活检、全基因组扩增、连锁分析、染色体扫描四个胚胎植入前诊断关键技术步骤的方法及新进展。

下一代测序技术在胚胎植入前遗传学检测中的应用

以下一代测序技术(next-generation sequencing,NGS)为代表的基因组学技术的迅猛发展给全面深度的染色体筛查和基因诊断提供了机会。NGS也迅速应用于胚胎植入前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis,PGD)和胚胎植入前遗传学筛查(preimplantation genetic screening,PGS)临床检测中,成为常规检测技术,经济与可靠使其具有更广阔的应用前景。单细胞全基因组扩增(whole genome amplification,WGA)技术的进步使得NGS在PGD和PGS的临床应用中能够更加全面了解植入前胚胎的遗传学信息,可以检测到更加细微的差异;基于NGS技术的PGS和PGD将给移植成功率和试管婴儿(in-vitro fertilization,IVF)出生率带来明显提升。本文主要介绍PGD/PGS的定义、传统的PGD/PGS检测技术,单细胞全基因组扩增技术以及NGS在PGD/PGS中的应用。

胚胎植入前染色体非整倍体检测试剂盒评价

目的 使用胚胎植入前染色体非整倍体国家参考品,评价胚胎植入前染色体非整倍体检测试剂盒(半导体测序法)的性能。方法 取国家参考品进行细胞裂解及片段化,制备文库,进行文库的扩增和单细胞扩增后纯化。将纯化的单细胞扩增DNA片段化和纯化后,进行末端修复、加上接头以及PCR扩增等步骤,构建文库。将文库纯化后进行定量。使用基因测序仪BioelectronSeq 4000进行测序。使用试剂盒配套的全自动分析软件对测序数据进行信息分析,报告样本的染色体异常情况。结果 对于65个异常片段大于4 Mb的国家阳性参考品,试剂盒均能检出对应的染色体异常,检出率为100%;国家阳性参考品19-del(7)-25.3 M在7号染色体100.5 Mb-125.8 Mb位置存在片段大小约25.3 Mb的拷贝数缺失,Z-score为-28.6,其他国家阳性参考品的相应异常区域对应的染色体Z-score均>3或<-3。对于15个异常片段小于等于4 Mb的国家阳性参考品,对应的染色体异常检出率为86.7%(13/15);国家阳性参考品22-del(7)-1.5 M在7号染色体72.1 Mb-73.6 Mb位置存在片段大小约1.5 Mb的拷贝数缺失,其Z-score为-8.1。国家阳性参考品30-dup(17)-1.9M的17号染色体Z-score为2.0,未检测到相应异常区域,国家阳性参考品100-NC4-dup(Xq12)-1.4M的X染色体Z-score为1.1,未检测到相应异常区域,其他13个国家阳性参考品的相应异常区域对应的染色体Z-score均>3或<-3。10个国家阴性参考品均未检出试剂盒范围内的染色体异常,其Z-score均小于3且大于0,显著性水平P-value>0.0001;如国家阴性参考品97-NC1在1-22号染色体和性染色体区域内均未检测出异常区域。对30%嵌合的嵌合体样本检出率为50%(3/6),相对应的70%嵌合体样本检出率为83.3%(5/6);国家嵌合体参考品110-0.3-del(4)-37.7M中,30%嵌合比例细胞在4号染色体153.1 Mb-190.8 Mb位置存在大小约37.7 Mb拷贝数缺失,其Z-score为-16.5;70%嵌合比例细胞的在15号染色体23.6 Mb-28.5 Mb位置存在大小约4.9 Mb拷贝数缺失,其Z-score为-10.5,结果显示30%嵌合和70%嵌合的细胞均正确检出。结论 胚胎植入前染色体非整倍体检测试剂盒能够符合胚胎植入前染色体非整倍体国家参考品的要求。

植入前遗传学筛查在高精子DNA碎片指数不育夫妇行ICSI中的应用

目的:探讨植入前遗传学筛查(PGS)对高精子DNA碎片指数(DFI)不育夫妇的辅助生殖妊娠结局的应用价值。方法:选取2015年4月至2016年10月精子DFI≥15%行ICSI治疗的男性不育患者60例作为病例组,其中行PGS-ICSI治疗的患者30例作为高DFI-PGS组,未行PGS检测的患者30例作为高DFI-ICSI组;另选取DFI<15%行ICSI治疗的30例患者作为低DFI-ICSI组。比较高DFI-ICSI组与低DFI-ICSI组正常受精率、优质胚胎率、囊胚形成率、胚胎种植率的差异;比较高DFI-PGS组与高DFI-ICSI组女方年龄,男方年龄、精子浓度、前向运动精子百分率、正常形态精子百分率、FSH、LH、T、精子DFI、核蛋白不成熟精子百分率,正常受精率、优质胚胎率、囊胚形成率、胚胎种植率差异。结果:高DFI-ICSI组与低DFI-ICSI组相比,正常受精率[(65.38±24.62)%vs(73.00±17.00)%]、优质胚胎率[(62.41±25.97)%vs(73.00±22.10%)]、囊胚形成率[(62.55±25.21)%vs(64.30±18.60)%]均无统计学差异(P均>0.05),胚胎种植率[31.25%vs 52.50%]有统计学差异(P<0.01)。高DFI-PGS组与高DFI-ICSI组相比,女方年龄,男方年龄、精子浓度、前向运动精子百分率、正常形态精子百分率、FSH、LH、T、精子DFI、核蛋白不成熟精子百分率,正常受精率[(69.76±15.82)%vs(65.38±24.62)%]、优质胚胎率[(64.42±30.75)%vs(62.41±25.97)%]、囊胚形成率[(67.53±19.24)%vs(62.55±25.21)%]均无统计学差异(P均>0.05),两组间胚胎种植率(60.97%vs 31.25%)差异有统计学意义(P<0.01)。结论:对于精子DFI≥15%的不育患者,行单纯ICSI治疗并不能提高其胚胎种植率;而行PGS可以显著提高患者胚胎种植率。

小鼠囊胚培养液用于染色体筛查的研究

目的:利用小鼠囊胚培养液探讨无创胚胎植入前非整倍体筛查(niPGT-A)的可行性,为优化和发展无创胚胎植入前遗传学筛查技术提供理论依据和数据支持。方法:本研究共收集11枚小鼠囊胚,同一囊胚分别取少量滋养外胚层细胞(TE)作为金标准、内细胞团(ICM)细胞作为阳性对照、胚胎培养液(BCM)作为待验证样本。所有胚胎样本基于全基因组测序数据进行染色体状态分析,并比较同一胚胎不同样本间染色体倍性一致性。结果:在11枚小鼠囊胚中,BCM、TE和ICM的PGT-A检出率分别为82.8%(9/11)、72.7%(8/11)和100%(11/11)。BCM与TE、BCM与ICM及TE与ICM的染色体一致性分别为85.7%(6/7),88.9%(8/9),87.5%(7/9),任意两组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在小鼠模型中,相比于同期活检的滋养外胚层细胞,利用囊胚培养液中的游离DNA行无创胚胎植入前非整倍体检测可获得更高的检出率和更为准确的染色体检测结果。

反复胚胎种植失败行PGT-A妇女的临床特点分析

目的分析反复胚胎种植失败妇女行植入前遗传学筛查(PGT-A)技术的临床特点。方法选取498例体外受精-胚胎移植治疗的不孕症妇女,其中反复种植失败(RIF)行PGT-A妇女79例(RIF组),对照组419例。根据是否获得整倍体胚胎将79例RIF患者分为获得整倍体胚胎组51例(RIF-S)和未获得组28例(RIF-F)。观察其临床特点。结果RIF组年龄大于对照组,基础卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E_(2))水平均高于对照组,基础窦卵泡计数(AFC)少于对照组,外源性促性腺激素(Gn)用量、人绒毛膜促性腺激素(HCG)日E2水平、获卵数、MII卵数、2PN数均低于对照组(P<0.05)。RIF-S组年龄小于RIF-F组,活检胚胎数、D3优胚数、囊胚数、优囊数均多于RIF-F组(P<0.05)。结论高龄及卵巢储备功能差的女性容易发生RIF。

无创胚胎染色体筛查技术对军队不孕不育夫妇助孕结局的影响

目的探讨无创胚胎染色体筛查技术(NICS)对军队不孕不育夫妇辅助生殖结局的影响。方法选择自2017年5月至2020年10月接受辅助生殖技术治疗的455对官兵夫妇进行前瞻性观察研究,其中133对实施卵母细胞胞浆内单精子注射(ICSI)方案,根据患者夫妇意愿进行分组,愿意接受NICS治疗45例,拒绝NICS治疗88例。88例中取消鲜胚移植后行单囊胚解冻复苏移植者26例,比较该26例(ICSI组)与NICS检测后首次单囊胚冻胚复苏移植39例(NICS组)的官兵夫妇取卵周期特征及复苏周期临床结局。结果NICS组患者男方年龄、女方年龄均较ICSI组高[男方年龄(35.79±4.52)岁vs(31.69±3.10)岁,女方年龄(34.45±4.0)岁vs(29.65±2.04)岁,均P<0.001],NICS组较ICSI组抗苗勒管激素(AMH)[(3.39±2.59)ng/mL vs(5.23±3.27)ng/mL]、hCG日卵泡数(13.68±7.12 vs 17.77±8.88)、获卵数(12.37±6.72 vs 17.38±10.63)、成熟卵子数(10.95±6.21 vs 15.15±9.46)均显著降低(均P<0.05)。NICS组与ICSI组FET临床妊娠率相当(82.1%vs 80.8%)。结论军队不育夫妇实施ICSI治疗,胚胎植入前行NICS检测优选胚胎移植可改善临床结局。

植入前遗传学诊断新进展

植入前遗传学诊断是辅助生殖技术的一个重要方面,其发展日新月异。新方法、新技术不断出现并应用于临床植入前遗传学诊断中,如微阵列比较基因组杂交、微测序技术、多重置换扩增等。这些方法及两个或两个以上方法的综合应用大大增加了诊断的准确性,减小误诊风险。同时,也有一些关于植入前遗传学诊断的争议,如胚胎植入前遗传学筛查,以及对植入前遗传学诊断远期安全性的担忧。就该领域一些新方法及其原理和争议等进行综述。

不同年龄组女性胚胎的非整倍性分析

目的分析不同年龄组女性胚胎的非整倍性情况。方法收集沈阳市妇婴医院生殖中心患者捐赠用于科学研究的胚胎,根据女方年龄将胚胎分为高龄组(A组,年龄>35岁)和低龄组(C组,年龄≤35岁)。将胚胎培养至囊胚期,取囊胚滋养层细胞活检,检测胚胎的非整倍性。结果共收集捐赠胚胎149枚,其中A组胚胎82枚,C组胚胎67枚;A组活检胚胎48枚,染色体异常32例;C组活检胚胎50枚,染色体异常22例。结论高龄女性胚胎染色体异常率高于低龄女性,为获得健康胚胎,建议高龄女性在行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)时,结合植入前遗传学筛查(PGS),形态学不能作为胚胎筛选的唯一标准。