人胚胎滋养细胞独立合成并分泌孕酮时间的探讨

目的 由于卵巢黄体和胚胎滋养细胞分泌孕酮的混合性,人胚胎滋养细胞在妊娠期何时开始独立合成和分泌孕激素尚不清楚。本研究旨在探讨胚胎滋养细胞独立分泌的孕激素在人血液中的动态变化,以及何时开始起到黄体支持的作用。方法 对2019年在广西壮族自治区生殖医院行冻融胚胎移植的患者进行前瞻性队列研究,患者年龄20~40岁,月经周期规律。根据子宫内膜准备情况分为自然周期(NC)组和人工周期(HRT)组。采用罗氏电化学发光免疫分析法(Elecsys ECLIA)动态监测移植后血清孕酮和β-人绒毛膜促性腺激素(hCG)水平。结果 HRT组孕酮水平呈显著增长趋势(P<0.05)。胚胎滋养细胞在移植后14~21 d开始分泌少量孕酮,移植后28 d分泌较多量的孕激素。NC组移植后7 d、14 d、21 d、28 d、35 d血清孕酮平均水平无明显变化。且NC组孕酮水平明显高于HRT组(P<0.05)。结论 胚胎移植后14~21 d血液中可检测到胚胎滋养细胞分泌的少量孕激素,在移植后28 d孕激素的分泌明显增加。因此,建议胚胎移植后28 d,可考虑外源性黄体支持的调整用量。

布鲁氏菌分泌蛋白BspA和BspB真核表达载体的构建及在胚胎滋养层细胞中的表达

为研究布鲁氏菌分泌蛋白BspA和BspB的作用,以布鲁氏菌S2308基因组为模板,根据GenBank登录的BspA和BspB基因序列设计引物,利用PCR扩增BspA和BspB基因片段,并将其克隆至pEGFP-N1载体,获得真核表达载体pEGFP-BspA和pEGFP-BspB。真核表达载体经酶切和测序分析鉴定后,利用Lipofectamine2000脂质体转染至胚胎滋养层细胞(HPT-8),采用Western blot(WB)检测BspA和BspB蛋白的表达,应用ELISA试剂盒检测细胞因子的分泌水平,利用乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性检测试剂盒检测细胞毒性水平。结果显示,BspA基因大小为576 bp,BspB基因大小为564 bp,真核表达质粒经限制性内切酶Eco RⅠ和XbaⅠ酶切验证正确,酶切产物经测序分析,显示与GenBank公布序列的同源性为100%;WB检测结果显示,pEGFP-BspA和pEGFP-BspB转染组分别在70 ku和68 ku处出现条带,与预期结果相符,表明BspA和BspB蛋白能在HPT-8细胞中表达;细胞因子检测结果显示,BspA和BspB蛋白可诱导HPT-8细胞分泌IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-5;细胞毒性检测结果显示,BspA和BspB蛋白对细胞无毒性。综上,成功构建了真核表达载体pEGFP-BspA和pEGFP-BspB,证实其能在HPT-8细胞中表达,并能诱导细胞因子分泌。

协和妇产科推进耐药性滋养细胞肿瘤的治愈率提升25%

滋养细胞肿瘤（gestational trophoblastic neoplasms,GTN）是一系列发生于生育年龄妇女,主要与妊娠相关的恶性肿瘤,因来源于胚胎滋养细胞而得名,其中以绒癌恶性程度最高,在有效化疗药物问世前,其死亡率曾高达90%。自20世纪50年代以来,

血府逐瘀胶囊通过Notch通路抑制滋养层细胞的增殖、迁移、侵袭的实验研究

目的:探讨血府逐瘀胶囊对滋养层细胞增殖、迁移及侵袭的影响,并分析可能的作用机制。方法:体外分离、培养、鉴定输卵管绒毛滋养细胞,分为空白对照组、血府逐瘀胶囊低、中、高(10,30,100μg·ml^(-1))剂量组、甲氨蝶呤组(0.08 ng·L^(-1))。采用MTT法检测细胞增殖能力;划痕实验、Transwell实验分别检测细胞迁移、侵袭能力;蛋白质印迹法检测侵袭、迁移相关蛋白基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、E-钙黏附蛋白(E-cadherin)、N-钙黏附蛋白(N-Cadherin)及Notch通路相关蛋白Notch1、Jagged1、Hey1表达情况。结果:与空白对照组同时间点比较,24和48 h时血府逐瘀胶囊低、中、高剂量组绒毛滋养细胞增殖抑制率均显著升高(P<0.05);与同组不同时间点比较,随着培养时间的延长,血府逐瘀胶囊低、中、高剂量组绒毛滋养细胞增殖抑制率均显著升高(P<0.05)。与空白对照组比较,血府逐瘀胶囊低、中、高剂量组绒毛滋养细胞迁移率、侵袭细胞数、MMP-9、N-Cadherin、Notch1、Jagged1、Hes1蛋白表达均显著降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著升高(P<0.05),均呈剂量依赖性(P<0.05)。结论:血府逐瘀胶囊能抑制绒毛滋养细胞增殖、侵袭及迁移,进而治疗异位妊娠,机制可能与抑制Notch信号通路活化有关。

ROS/TXNIP/NLRP3信号通路在高糖诱导人胚胎滋养层细胞焦亡过程中的作用

目的探究活性氧(ROS)/硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)信号通路在高糖诱导下人胚胎滋养层细胞焦亡变化情况。方法体外培养人胚胎滋养层细胞,建立高糖损伤模型,分为对照组、高糖(HG)组、HG+ROS抑制剂N-乙酰-L-半胱氨酸(HG+NAC)组。噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞存活率变化情况;二氢乙啶-ROS荧光探针法检测各组细胞的ROS水平;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测转染后各组细胞TXNIP和NLRP3 mRNA表达情况;蛋白免疫印迹分析法检测各组细胞TXNIP、NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-1和白细胞介素(IL)-1β及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、GSDMD蛋白表达水平;流式细胞术检测各组细胞焦亡情况。结果高糖诱导人胚胎滋养层细胞损伤的最佳D-葡萄糖浓度为30 mmol/L;与对照组(96.27±3.10)%相比,HG组(55.44±2.15)%人胚胎滋养层细胞存活率显著降低(P<0.05),7’二氯荧光素(DCF)荧光强度(ROS水平)、TXNIP、NLRP3蛋白表达水平、细胞焦亡数目、Caspase-1、GSDMD、IL-1β和TNF-α蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与HG组相比,HG+NAC组(84.75±2.33)%人胚胎滋养层细胞存活率显著升高(P<0.05),DCF荧光强度(ROS水平)、TXNIP、NLRP3蛋白表达水平、细胞焦亡数目、Caspase-1、GSDMD、IL-1β和TNF-α蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论抑制高糖诱导下人胚胎滋养层细胞内ROS水平,可能通过抑制TXNIP/NLRP3信号通路,促进细胞增殖,并减少焦亡的发生。

妊娠高血压疾病与血管细胞粘附因子相关性的研究

目的探讨妊娠高血压疾病与血管细胞粘附因子的相关性。方法选取自2012年10月至2014年10月收治的48例妊娠高血压疾病的患者(妊高症组),并随机选取正常妊娠妇女30例(正常妊娠组)及正常非妊娠妇女30例(正常非妊娠组)作为两个对照组。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组妇女血清中血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)和白细胞介素6(IL-6)的浓度,并采用免疫组织化学染色法检测30例妊高症患者,20例正常妊娠妇女的胎盘组织中VCAM-1的表达。对比各组妇女血清中VCAM-1和IL-6的浓度,以及妊高症组和正常妊娠组胎盘组织中VCAM-1的表达情况。结果妊高症组血清VCAM-1浓度、IL-6含量均明显高于正常妊娠组和正常非妊娠组,组间对比差异有显著性(P<0.01)。VCAM-1和IL-6的浓度水平呈正相关(r=0.62,P<0.01)。VCAM-1在妊高症组胚胎滋养叶细胞的表达明显低于正常妊娠组(23.33%vs.65.00%),差异有显著性(χ2=10.85,P<0.005);妊高症组的毛细血管内皮细胞阳性率高于正常晚期妊娠组(43.33%vs.30.00%),但差异无显著性(χ2=0.95,P>0.05)。结论血清中VCAM-1的升高参与了妊高症组血管内皮损伤过程,IL-6可诱导VCAM-1的表达;VCAM-1在妊高症组患者的胚胎滋养细胞呈低表达,表明妊高症患者缺乏血管内皮表型,VCAM-1在妊高症的病理变化中起一定的作用。

冻融囊胚移植中囊胚形态学评分对妊娠结局和新生儿出生结局的影响

目的探讨囊胚形态学评分在冻融囊胚移植(frozen-thawed embryo,FET)周期中对妊娠结局及新生儿出生结局产生的影响,为评估囊胚移植手术临床安全性和有效性提供参考依据。方法2017年5月至2021年12月于我院行FET的患者共计2576个周期进行回顾性分析。以囊胚内细胞团(ICM)及滋养细胞层(TE)评分为标准进行分组:A组(移植≥4AA级别囊胚)108周期,B组(移植4-6AB,4-6BA级别囊胚)370个周期,C组(移植4-6BB,4-6CA级别囊胚)1170个周期,D组(4-6BC,4-6CB,4-6CC级别囊胚)共928个周期,对不同组别患者的妊娠结局和新生儿出生结局进行分析比较。结果四组患者的女方年龄、BMI、不孕年限、卵巢基础储备功能、子宫内膜容受性、超促排周期促性腺激素总量及天数差异无统计学意义(P>0.05)。四组冻融囊胚移植手术后妊娠结局比较:A组冻融囊胚移植后的临床妊娠率高于B、C、D组,B组高于C组和D组(P<0.05),A组和B组间临床妊娠率比较差异无统计学意义(P>0.05);四组着床率比较差异有统计学意义(P<0.05),且随着ICM和TE评分的下降,着床率也下降(P<0.05);四组异位妊娠率、早孕流产率和中孕流产率、多胎妊娠率比较差异无统计学意义(P>0.05);A组与B组、A组与C组、C组与D组间双胎妊娠率比较差异无统计学意义(P>0.5)。四组新生儿出生性别、出生体重比较差异无统计学意义(P>0.05),但A组男婴出生率高于D组,出生体重低于D组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,ICM和TE评分是临床妊娠率和活产率的独立影响因素(P<0.05)。结论ICM及TE评分可作为FET周期中预测移植后妊娠结局和新生儿出生结局的一个重要参数。

布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白BMEI0339基因的原核表达及免疫反应性分析

本研究对布鲁氏菌分泌蛋白BMEI0339进行了表达纯化、免疫反应性分析,并研究了该蛋白对胚胎滋养层细胞(HPT-8)的细胞因子表达的影响。首先从羊种布鲁氏菌(B.melitensis)标准株16M的基因组中克隆BMEI0339基因片段,亚克隆至融合表达载体p ET-28a,构建表达重组质粒p ET-28a-BMEI0339,并利用大肠杆菌进行表达。Western blotting方法检测其免疫学特性;用纯化的重组蛋白感染细胞,并检测IL-1、IL-10和TNF-α表达量。结果显示:成功构建了p ET-28a-BMEI0339原核表达载体,并在大肠杆菌中成功表达了BMEI0339蛋白,Western blotting检测其具有免疫反应性,该蛋白作用细胞后发现TNF-α的表达量低于BSA对照组,差异极显著(P<0.01);IL-1和IL-10的表达量差异不显著(P>0.05)。本研究成功表达了布鲁氏菌分泌蛋白BMEI0339,证实其具有一定的免疫原性,表明该蛋白影响了胚胎滋养层细胞TNF-α的表达。本研究为研究布鲁氏菌感染宿主细胞的致病机理提供理论基础。

布鲁菌铁转录调控因子rirA基因突变株的构建与鉴定

为了构建牛布鲁菌S2308(简称S2308)的铁转录调控因子rirA基因突变株(S2308ΔrirA),探讨该基因对自身生长的影响以及其对不同类型细胞黏附侵袭和胞内繁殖的作用。利用同源重组和抗性替换的方法,以卡那抗性基因替换rirA基因,获得突变株S2308ΔrirA。将亲本株S2308、疫苗株RB51和突变株S2308ΔrirA在相同营养条件下培养,观察其振荡培养时的生长变化趋势和静置培养时的聚集状态。将各菌株侵染人胚胎滋养层细胞(HPT-8)和小鼠巨噬细胞(RAW264.7),分别检测其黏附侵袭能力和胞内生存能力。结果显示,成功获得了布鲁菌rirA基因突变株且10代内未发生回复性突变;与亲本株相比,S2308ΔrirA在相同体外培养条件下其生长趋势未发生明显改变,且其凝集状态与亲本株类似;黏附侵袭试验显示,S2308ΔrirA对HPT-8细胞的黏附侵袭能力显著强于亲本株,而其对RAW264.7的黏附侵袭能力在一定程度上弱于亲本株;布鲁菌胞内生存试验发现,布鲁菌侵染HPT-8细胞24h后,其胞内细菌数量显著升高,而侵染巨噬细胞24h后,S2308ΔrirA的繁殖能力明显低于亲本株。这些结果表明,铁转录调控因子rirA基因参与了布鲁菌胞内寄生的过程,并与菌株的毒力强弱存在密切联系。

布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白BMEI1069基因的原核表达与分析

为构建布鲁氏菌分泌蛋白BMEI1069基因的原核表达载体,进行分析,分析该蛋白对胚胎滋养层细胞(HPT-8)细胞因子表达量的影响,本研究从羊种布鲁氏菌(B.melitensis)标准株16M的基因组中克隆BMEI1069基因片段,亚克隆到p MD19-T载体中并测序,构建表达重组质粒p ET-28a-BMEI1069。转染大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,采用Western-Blot方法检测其免疫学特性,用纯化的重组蛋白感染细胞,并检测细胞因子含量。结果表明,获得了p ET-28a-BMEI1069原核表达载体,在大肠杆菌中表达了BMEI1069蛋白,经过SDS-PAGE检测,重组蛋白的分子量大约是58 k Da,western blotting检测显示具有免疫特性,细胞加入BMEI1069重组蛋白后细胞因子IL-1、IL-10和TNF-α的表达均高于PBS对照组,差异显著(P<0.05)。本试验成功表达了布鲁氏菌分泌蛋白BMEI1069,证实其有一定的免疫特性,并且重组蛋白可以影响细胞因子的表达。这将为研究分泌蛋白在免疫逃逸和维持持续性感染的机制方面奠定基础。

孕母血中抗胎儿细胞IgG类抗体酶联免疫检测法的建立

人绒毛滋养细胞表面存在特异性胎儿细胞抗原位点，针对这些抗原位点的免疫应答，有可能诱发原因不明性流产等病理性妊娠的出现。然而，由于缺乏相应的检测手段，国内外尚无有效、特异的免疫性流产诊断方法。因此，我们利用纯化的滋养细胞表面抗原，建立了孕母血中抗胎儿细...

葡萄胎基因印迹的研究进展

妊娠滋养细胞疾病（gestational trophoblastic disease,GTD）是一组来源于胚胎滋养细胞的疾病,一般包括葡萄胎（（hydatidiform mole,HM）,侵蚀性葡萄胎（invasive mole）,