米非司酮混悬液灌胃制备小鼠不完全型胚胎着床障碍模型的适宜剂量选择

目的选择米非司酮混悬液制备小鼠不完全型胚胎着床障碍(EID)模型的适宜剂量。方法将32只昆明雌性小鼠随机分为4组,每组8只,低剂量组、中剂量组、高剂量组于妊娠第4天分别灌胃给予0.12、0.14、0.16 mL米非司酮混悬液(1 mg/mL)制备不完全型EID模型,对照组给予适量生理盐水,于妊娠第8天处死小鼠,采用ELLSA法检测血清雌二醇(E_(2))、孕酮(P),肉眼观察子宫形态,计算妊娠率及胚胎着床数,HE染色观察子宫内膜组织,免疫组化法检测子宫内膜组织孕激素受体(PR)。结果各组血清E_(2)、P水平比较,P均>0.05。对照组全部妊娠,双侧子宫均匀增大,子宫血供丰富,胚胎着床点分布紧密且无出血点,胚胎发育良好;低剂量组全部妊娠,双侧子宫外观形态及胚胎发育无异常,子宫血供较对照组差;中剂量组全部妊娠,两侧子宫胚胎着床点分布不规则,部分胚胎着床处有积血,胚胎体积小,未着床处的子宫较细,颜色苍白,血供不佳;高剂量组仅有1只妊娠,双侧子宫形态规则,颜色苍白,血供较差,双侧子宫弹性差。高剂量组妊娠率低于其他3组,P均<0.05。与低剂量组、对照组比较,中剂量组、高剂量组胚胎着床数少(P均<0.05);与中剂量组,高剂量组胚胎着床数少(P<0.05)。对照组子宫内膜间质广泛蜕膜化反应,腺体数量多,腺腔面积大,腺腔内含有分泌物,小血管增生;低剂量组子宫内膜间质蜕膜明显,腺体数量多;中剂量组子宫内膜有蜕膜化改变,间质较致密,腺体较少而小,血管扩张不明显;高剂量组子宫内膜间质区蜕膜化不完全,腺体小而少,分泌不足,内膜间质致密,仍呈增生期样改变,发育明显滞后。与对照组和低剂量组比较,中剂量组、高剂量组PR AOD减少(P均<0.05);与中剂量组比较,高剂量组PR AOD减少(P<0.05)。结论米非司酮制备小鼠不完全型EID模型稳定可靠,适宜剂量为0.16 mL/只(1 mg/mL)。

调经促孕方对胚胎着床障碍性不孕症小鼠子宫内膜容受性及AREG/EGFR/HIF-1α信号通路的影响

目的观察调经促孕方对胚胎着床障碍(EID)性不孕症小鼠子宫内膜容受性及AREG/EGFR/HIF-1α信号通路的影响,探讨其改善子宫内膜容受性的可能机制。方法80只昆明小鼠于妊娠第1日随机分为正常组、模型组、黄体酮组和调经促孕方组,每组20只,黄体酮组和调经促孕方组分别予相应药物灌胃。妊娠第4日,除正常组外,其余各组小鼠皮下注射米非司酮溶液(2.3 mg/kg)建立EID性不孕症模型,正常组皮下注射等体积丙二醇。妊娠第5日,每组随机取10只小鼠,剖腹取子宫,HE染色、Masson染色观察子宫内膜组织形态,扫描电镜观察子宫内膜胞饮突形态及数量,ELISA检测子宫内膜组织双调蛋白(AREG)含量,Western blot和免疫荧光检测子宫内膜组织表皮生长因子受体(EGFR)、p-EGFR、缺氧诱导因子(HIF)-1α表达。其余小鼠灌胃至妊娠第8日取材,记录平均胚胎着床点数。结果与正常组比较,模型组小鼠平均胚胎着床点数显著减少(P<0.01),子宫内膜腺体发育不良,胶原纤维增加,血管及胞饮突数量减少,子宫内膜组织AREG含量显著降低(P<0.01),p-EGFR、HIF-1α蛋白表达显著降低(P<0.05);与模型组比较,调经促孕方组小鼠平均胚胎着床点数显著增加(P<0.05),子宫内膜胶原纤维增生减少,间质内腺体、血管及胞饮突数量均明显增加,胞饮突发育饱满、均匀,子宫内膜组织AREG含量显著升高(P<0.01),p-EGFR、HIF-1α蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01),免疫荧光检测结果与Western blot一致。结论调经促孕方能促进子宫内膜腺体和血管发育,增加胞饮突数量,改善EID性不孕症小鼠子宫内膜容受性,利于胚胎黏附及植入,从而提高妊娠率,其机制可能与激活AREG/EGFR/HIF-1α信号通路,改善子宫内膜血流灌注,恢复子宫内膜相对缺氧环境有关。

昼夜节律紊乱与胚胎着床失败关系的研究进展

胚胎着床失败可能与昼夜节律紊乱有关。人体的生理功能和代谢活动受昼夜节律的调控,昼夜节律紊乱可能对生殖系统功能产生负面影响。昼夜节律紊乱会导致激素分泌异常、免疫功能紊乱及细胞周期调控失衡,这些因素可能影响子宫内膜的状态和胚胎着床过程。因此,维持良好的昼夜节律对于胚胎着床的成功至关重要。该综述旨在探讨昼夜节律与胚胎着床失败的关系,以此为基础进行调护,为隐性流产患者提供更有效的治疗策略,从而提高胚胎植入成功的机会。

综合护理干预对反复胚胎着床失败患者的效果评价

目的观察综合护理干预对反复胚胎着床失败(repeated implantation failure,RIF)患者生活质量、用药依从性、心理情绪、服务满意度的影响。方法随机选取2020年2月—2023年1月淄博市妇幼保健院收治的100例胚胎移植失败次数≥2次未妊娠的患者作为研究对象,根据不同护理方法分为对照组和观察组,各50例。对照组采用常规护理干预,观察组采用综合护理干预,对比两组患者护理前后心理情绪评分、生活质量评分、用药依从性和护理满意情况。结果护理后,观察组世界卫生组织生存质量测定量表(World Health Or⁃ganization Quality of Life-100,WHOQOL-100)评分高于对照组,汉密尔顿焦虑量表(Hamilton Anxiety Scale,HAMA)和汉密尔顿抑郁量表(Hamilton Depression Scale,HAMD)评分均低于对照组,差异有统计学意义(P均<0.05)。观察组护理满意率[94.00%(47/50)]高于对照组[72.00%(36/50)],差异有统计学意义(χ^(2)=8.576,P<0.05)。结论针对反复胚胎着床失败的患者采用综合护理干预措施能够改善患者的生活质量、用药依从性以及焦虑抑郁情绪,提高护理满意率。

非编码RNA在胚胎着床中作用的研究进展

非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)指不具备编码蛋白质潜力的RNA,根据不同的生物学特性主要分为微RNA(microRNA,miRNA)、长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)及环状RNA(circular RNA,circRNA),它们在多种生命活动中发挥调节作用。妊娠是一个非常复杂的生理过程,成功的妊娠需要多个步骤协调推进,胚胎着床作为其中的关键步骤,其过程受到多种因素的调控,调控范围包括胚胎发育、子宫内膜状态的改变及母体-胚胎“通信”的进行,多种调控机制的存在保障了胚胎的定位、黏附、侵入,最终顺利着床。MiRNA、lncRNA及circRNA是目前研究较为广泛的ncRNA,通过靶向调节多个细胞因子、基因的表达在胚胎着床的生理和病理过程中发挥重要的调控作用。随着分子生物学技术的发展,有望从分子角度为临床上预测及改善妊娠结局提供思路和方法。

子宫内膜葡萄糖转运体在胚胎着床中作用的研究进展

葡萄糖转运体是介导葡萄糖跨细胞膜转运的重要载体,分为易化扩散葡萄糖转运体(GLUTs)和钠-葡萄糖协同转运体(SGLTs)以及尚待深入研究的一类葡萄糖转运体SWEETS。胚胎着床过程中子宫内膜上皮细胞葡萄糖的摄取与利用可保障与着床相关功能活动得以正常运行。本文就葡萄糖转运体在胚胎着床中的作用进行阐述,旨在揭示胚胎着床的机制,为着床失败导致的女性不孕及早期流产的诊断治疗提供新的思路。

早孕小鼠子宫内膜上皮葡萄糖转运体3表达对胚胎着床的作用

目的探讨早孕小鼠子宫内膜上皮葡萄糖转运体3(GLUT3)的表达对胚胎着床的影响。方法(1)免疫组化及Western-blot法检测孕2 d、孕4 d和孕6 d小鼠子宫内膜上皮GLUT3表达情况。(2)采用RNA干扰技术低表达GLUT3,研究其对胚胎着床的影响:取孕2 d小鼠,一侧子宫角注射25μl特异性GLUT3-siRNA以低表达上皮GLUT3,另一侧子宫角注射等量无义siRNA为对照;然后于孕4 d冲洗小鼠宫腔收集囊胚,同时收集子宫组织,采用免疫组化、免疫荧光和Western-blot法检测孕4 d小鼠子宫内膜接受态标志分子白血病抑制因子(LIF)和整合素ανβ3蛋白的表达,孕6 d检测胚胎着床情况。结果(1)免疫组化结果显示,GLUT3主要在子宫内膜上皮表达,孕2 d上皮GLUT3表达呈强阳性,而基质表达弱;孕4 d和孕6 d上皮和基质都有表达。Western-blot结果显示,随着孕天数增加GLUT3蛋白表达水平也随之升高(P<0.05),且孕6 d着床区GLUT3表达显著高于非着床区(P<0.01)。(2)孕2 d宫腔内注射GLUT3-siRNA低表达上皮GLUT3后,未显著影响小鼠孕4 d囊胚发育(P>0.05),但孕4 d子宫内膜接受态标志分子LIF和整合素ανβ3蛋白表达显著下降(P<0.05),孕6 d胚胎着床数也显著下降(P<0.001)。结论低表达上皮GLUT3使子宫内膜接受态受损,进而影响胚胎着床。

补肾助孕方对大鼠胚胎着床期子宫内膜ER、PR及整合素α_5、β_3蛋白表达的影响

目的观察补肾助孕方对大鼠胚胎着床期子宫内膜细胞雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)及整合素α5、β3蛋白表达的影响,以阐明该方改善黄体功能不全性不孕症的机制。方法将SD雌性大鼠随机分成空白组、模型组、西药组和中药补肾助孕方低、中、高剂量组,分别对各组大鼠由妊娠至胚胎着床期处死,取子宫中段组织(约1cm),采用Western blot技术分析各组大鼠胚胎着床期子宫内膜ER、PR及整合素α5、β3的蛋白表达等。结果模型组子宫内膜ER、PR的蛋白表达明显高于空白组,补肾助孕方低、中剂量组明显低于模型组(P<0.05);模型组子宫内膜整合素α5、β3的蛋白表达明显低于空白组,补肾助孕方中、高剂量组明显高于模型组(P<0.05)。结论补肾助孕方可下调胚胎着床期子宫内膜ER、PR的水平,提高整合素α5、β3水平的表达,改善黄体功能不全状态子宫内膜的容受性,从而创造了良好的受孕环境。

益气血补肝肾方对胚胎着床障碍小鼠子宫内膜整合素β3和胞饮突表达的影响

【目的】观察中药益气血补肝肾方对胚胎着床障碍小鼠子宫内膜整合素β3表达的影响,探讨其改善胚胎着床的分子基础。【方法】将90只雌鼠随机分为正常组、模型组和治疗组3组,每组30只,其中,治疗组小鼠予以中药益气血补肝肾方治疗(包括经后增殖方8 mg/kg和促黄体方8 mg/kg),在妊娠第4天(Pd4)上午8∶00采用米非司酮诱导模型组和治疗组小鼠胚胎着床障碍,12 h后处死小鼠(每组20只),剖腹取小鼠子宫,小心刮取子宫内膜,采用Real-time PCR和Western Blot的方法分别在m RNA和蛋白水平上检测整合素β3在各组小鼠子宫内膜中的表达情况。其余小鼠(每组10只)于Pd4剖腹取小鼠子宫,固定于体积分数2.5%戊二醛溶液中,行扫描电镜观察。【结果】Real-time RT-PCR和Western Blot结果显示:模型组整合素β3 m RNA与蛋白表达显著低于正常组(P<0.05);治疗组可显著升高整合素β3 m RNA与蛋白表达水平,与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。胞饮突在模型组中的表达少于治疗组和正常组,而胞饮突在治疗组和正常组的表达相似。【结论】中药益气血补肝肾方可上调子宫内膜中整合素β3的表达,对胞饮突在Pd4小鼠子宫内膜中的表达有正调节作用。

子宫内膜巨噬细胞通过调控血管内皮生长因子A的表达影响胚胎着床

目的研究小鼠子宫内膜巨噬细胞(macrophages,Mφ)对血管内皮生长因子A(VEGFA)表达的影响,探讨其在胚胎着床过程中的作用。方法取第3.5(雌鼠交配后次日晨阴道见栓为第0.5)孕鼠30只,随机分为3组,实验组(E)、对照组(C)和空白组(B)。E组向左侧宫腔内注射消除巨噬细胞的药物:氯膦酸二钠脂质体(clodronate liposomes,CL),右侧注射磷酸缓冲盐脂质体(PBS liposomes,PL);C组向双侧宫腔内注射PL;B组向双侧宫腔内注射等体积灭菌PBS溶液。注射后48 h,获取第5.5小鼠子宫和卵巢,统计各单侧子宫的胚胎着床数。采用免疫组化技术检测子宫内膜、卵巢内Mφ数量,并观察着床位点和非着床位点VEGFA的表达变化。流式细胞学方法检测子宫F4/80+CD11b+Mφ相对百分比,观察注射CL对子宫Mφ的选择性抑制作用。结果流式细胞学和免疫组织化学方法均显示,E组左侧子宫注射氯膦酸二钠脂质体后,与E组右侧和C、B组比较,局部巨噬细胞被显著抑制(P<0.05),抑制率达74%。各组卵巢Mφ数量间则未见明显差异。E组左侧子宫的胚胎着床部位宫腔未闭合,平均胚胎着床数为2.20±1.81个,显著低于E组右侧5.10±1.91个(P<0.05)。在着床位点,伴随子宫Mφ受到抑制,子宫内膜的VEGFA蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论子宫内膜中的Mφ为胚胎着床所必需,其机制可能是通过调控VEGFA的表达,影响宫内膜容受性及胚胎着床。

针刺对胚胎着床障碍大鼠CD4^+ CD25^+ Foxp3^+调节性T细胞的影响

目的:观察针刺对胚胎着床障碍大鼠CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的影响。方法:144只孕鼠随机分为对照组(N)、米非司酮组(M)、米非司酮+针刺组(A)和米非司酮+黄体酮组(W),每组随机再分为6 d组、8 d组和10 d组。其中M组、A组和W组妊娠1 d给予米非司酮-麻油溶液造模,N组则给予等量麻油溶液。同时,每天下午A组固定并行针刺三阴交和后三里,N组和M组仅固定,W组肌肉注射黄体酮,直到处死当天结束。统计孕鼠胚胎着床数,用流式细胞术检测外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞和子宫内膜的CD4+Foxp3+Treg细胞的比例,Western blotting和real-time PCR测定着床点的子宫内膜Foxp3的表达。结果:与N组相比,M组的着床胚胎数、外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞和子宫内膜CD4+Foxp3+Treg细胞的比例、着床点子宫内膜Foxp3蛋白和mRNA的表达均明显下降(P<0.05);与M组相比,A组和W组的着床胚胎数、外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞和子宫内膜CD4+Foxp3+Treg细胞的比例以及着床点子宫内膜Foxp3蛋白和mRNA的表达均有不同程度地升高。结论:针刺改善胚胎着床障碍大鼠的胚胎着床可能与CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的调节密切相关。

反刍动物的胚胎着床与妊娠识别过程的研究进展

反刍动物的胚胎着床与妊娠识别是个复杂的生理过程,这一过程受多种细胞因子和生殖激素调控。文中叙述了各种细胞因子和生殖激素对妊娠建立和维持的调控作用。

肿瘤转移抑制因子CD82/KAI1在假孕小鼠子宫的表达及其对小鼠胚胎着床的影响

目的:研究CD82/KAI1mRNA及蛋白在假孕d1-8小鼠子宫中的表达规律,以及CD82/KAI1抗体对小鼠胚胎体外发育及着床的影响。方法:用RT-PCR及免疫组织化学技术观察CD82/KAI1mRNA及蛋白在假孕小鼠子宫的表达规律。将8-细胞小鼠胚胎培养于含不同浓度CD82/KAI1抗体的培养液中,观察囊胚形成及脱透明带的情况。妊娠d4小鼠宫角注射CD82/KAI1抗体,于妊娠d8观察小鼠胚胎植入数量。结果:①CD82/KAI1mRNA在假孕d1-8小鼠子宫中均有表达,于d4、d5表达最丰富。CD82/KAI1蛋白在假孕d1-8的子宫基质细胞及腺上皮细胞均有表达,假孕d1-4腔上皮细胞无表达,假孕d5子宫腔上皮细胞出现弱阳性表达,从d6开始子宫腔上皮细胞表达逐渐增强。②一定浓度的CD82/KAI1抗体可明显抑制囊胚的形成率(1∶400,P<0.05)和脱带率(1∶800,P<0.05)。③宫角注射一定量的CD82抗体可以显著提高小鼠胚胎的着床数(8.35±0.17vs4.52±0.24,P<0.05)。结论:CD82/KAI1在妊娠小鼠子宫的表达是非胚胎依赖性的。CD82/KAI1在小鼠胚胎发育和着床过程中发挥重要作用。

阿托西班在不同年龄胚胎着床失败患者冻融胚胎移植的妊娠结局分析

目的:探讨阿托西班对于胚胎着床失败患者进行冻融胚胎移植(FET)的影响。方法:回顾性分析388例着床失败且行FET患者的临床资料,比较<35岁和≥35岁着床失败患者在移植前使用阿托西班治疗组(n=193)和未使用阿托西班对照组(n=195)的胚胎情况及妊娠结局等。结果:对于着床失败1~2次的患者,无论<35岁还是≥35岁的患者中,阿托西班组和对照组的胚胎着床率、生化妊娠率和临床妊娠率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。在着床失败≥3次反复着床失败(RIF)的患者,年龄<35岁的患者中阿托西班组的胚胎着床率、生化妊娠率和临床妊娠率分别为33.06%、57.14%和52.38%,均显著高于对照组的22.46%、46.48%和32.39%(P<0.05);年龄≥35岁的患者中,阿托西班组和对照组的胚胎着床率、生化妊娠率和临床妊娠率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。移植前使用单剂量阿托西班治疗后,妊娠期并发症发生率、早产率、低出生体质量儿发生率及出生缺陷发生率与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:移植前使用单剂量阿托西班是安全的,对改善年龄<35岁RIF患者妊娠结局有积极作用。

AP-1蛋白在胚胎着床前后小鼠子宫内膜的表达

目的 :研究子宫内膜原癌基因AP 1蛋白在小鼠胚胎着床前后的动态变化 ,了解AP 1在胚泡着床中的作用。方法 :采用Immuno blot和Western blot方法检测AP 1蛋白的表达。结果 :AP 1蛋白的表达高峰出现在小鼠早孕的第 4天、第 5天 ,一直维持到妊娠第 7天 ,每毫克组织的积分光密度值分别为 6 0 .2± 4 .2 1,5 2 .6± 7.0 9,5 0 .2± 5 .89和 5 0 .0±3.6 1。结论 :AP 1蛋白参与了胚胎着床过程中的信号传导并可能与胚胎的早期分化有关。

胰岛素样生长因子-I调节胚胎着床的体外研究

目的 :观察胰岛素样生长因子 I (IGF I)对体外培养的滋养层细胞粘附到细胞外基质的影响 ,研究IGF I在胚胎着床过程中的调节作用。方法 :原代培养滋养层细胞 ,建立体外滋养层细胞粘附模型 ,IGF I按不同的时间和剂量处理细胞 ,用酶联免疫检测仪测定光密度值代表粘附细胞的相对数目。免疫细胞化学法检测粘着局部磷酸化粘着斑激酶 (pFAK)的表达。结果 :随IGF I浓度的增加 ,滋养层细胞的粘附数目明显增多 ,差异具有显著性意义 (P <0 0 5 ) ,10 0nM时粘附细胞数目最多 ,但与 10nM时相比 ,差异无显著性意义 (P >0 0 5 )。相同浓度的IGF I处理时 ,随时间的延长 ,粘附细胞数目也明显增多 ,差异具有显著性意义 (P <0 0 5 ) ,10nMIGF I培养 2h达最佳量效反应 (P <0 0 0 1)。加入抗整合素αvβ3 抗体能明显阻止其促粘附作用(P <0 0 0 1)。免疫组化染色显示 10nMIGF I处理后 ,粘着局部出现pFAK ,而对照组则无pFAK表达。结论 :IGF I能促进滋养层细胞粘附到纤维粘连蛋白 (FN) ,且这种粘附过程具有明显的时间和剂量依赖性 ,生理剂量的IGF I通过刺激整合素与配体结合 ,激活FAK ,进而激活整合素介导的信号传导通路 ,显著促进滋养层细胞粘附到细胞外基质。

LIF及其抗体对小鼠胚胎着床影响的体外研究

目的 :研究外源性白血病抑制因子 (LIF)及其抗体对小鼠胚胎着床的影响。方法 :将妊娠 4d的小鼠胚胎种植于已建立的子宫内膜体外模型上 ,观察不同浓度的LIF及其抗体对小鼠胚胎的粘附、植入及扩展情况。并用RT PCR法测定子宫内膜上皮细胞整合素β3的变化。结果 :不同浓度的LIF促进了胚胎的粘附 (P <0 .0 5 ) ,胚胎的扩展率降低。加入LIF抗体 (5 ,1 0 μg/ml)降低了胚胎的粘附率 (P <0 .0 5 ) ,同时LIF对整合素β3的表达有明显的促进作用 (P <0 .0 1 ) ,加入抗体后整合素β3的表达降低。结论

c-myc基因mRNA在小鼠胚胎着床期间的表达

目的 :研究 c-myc基因 m RNA在胚胎围着床前后的动态变化 ,了解 c-myc基因在胚胎着床及早期分化中的作用。方法 :48只昆明白小鼠 (1 0～ 1 2周 ,体重 2 5～ 30 g,购自上海医科大学动物房 ) ,雌雄 2∶ 1交配后随机分为 7组 ,分别为妊娠 d1、d2、d3、d4、d5、d6和 d7组(n=6 ) ,并以未交配小鼠作为对照组 (n=6 )。每天 1 0∶ 0 0处死小鼠 ,取子宫内膜 ,用 RT-PCR的方法检测内膜 c-myc m RNA的表达。结果 :未孕小鼠内膜及孕 1 d小鼠蜕膜组织 c-myc m RNA无表达 ;孕 d2开始小鼠蜕膜 c-myc表达明显升高 (与正常相比 P<0 .0 1 ) ;随后一直到 d5都维持在一定的水平 (各组相比 P>0 .0 5) ;d6、7又明显上升。结论 :c-myc基因参与了胚胎着床 。

应用正交设计探讨肾虚胚胎着床障碍小鼠病症结合模型制作中药物的最佳配比

目的探索羟基脲及米非司酮在肾虚胚胎着床障碍小鼠病症结合模型制作中的最佳配比。方法以羟基脲、米非司酮作为影响因素,选择L9(34)表安排实验,观察羟基脲及米非司酮不同剂量配比组合对小鼠肾虚胚胎着床障碍模型的影响。结果研究范围内,当羟基脲因素A取1水平、米非司酮因素B取1水平时(AⅠBⅠ),妊娠第5天、第8天时子宫内胚胎着床点数、子宫指数是最少的。在肾虚胚胎着床障碍小鼠模型的制作中,米非司酮的贡献度最大,羟基脲的贡献度次之,一定程度上,胚胎的着床点和子宫指数与羟基脲和米非司酮的用量成反比。结论综合多项指标,在研究范围内,AⅠBⅠ较为合适作为肾虚胚胎着床障碍小鼠模型用于药物干预研究。