胚胎脊髓细胞悬液在大鼠损伤脊髓中的突触发育过程

目的 观察分析胚胎脊髓细胞悬液在损伤脊髓移植区中的突触发育过程。 方法 对 4 2只 Wistar成年大鼠以改良 Allen法 (10 g× 5 cm)打击脊髓 ,3天后将孕 14天 (E14 ) 5只胚胎脊髓细胞悬液 (FSCS) 2 0 μl植入损伤空腔 ,移植后 2、4、6、8、10和 12周 ,以组织学、免疫组织化学观察移植物成活、分化及其与宿主之间关系。 结果 移植区成神经细胞最先展示了胞质突起 ,随之出现了低电子密度的突触前后膜 ,突触前、后膜电子密度逐渐增高形成良好的致密突起。突触小泡数量和种类逐渐增多 ,突触小泡有圆形清亮小泡、椭圆形小泡、颗粒状小泡和扁平小泡 - f型。突触的连接方式由单个的胞体 -树突突触 ,出现多个的胞体 -树突和树突 -树突突触。同时 ,移植成神经细胞、成少突胶质细胞及成星形细胞的细胞器日渐完善 ,细胞功能活跃。血脑屏障也随之出现。移植区可见神经微丝 (NF)、组织胺 (5 - HT)、降钙素基因相关肽 (CGRP)、胶原纤维酸性蛋白 (GFAP)阳性纤维。 结论 胚胎脊髓细胞悬液在成年大鼠损伤脊髓内可发育为成熟的突触 ,显示了 FSCS与宿主脊髓重建突触方式的信息交换的潜在可行性。

转NGF基因雪旺细胞和胚胎脊髓细胞悬液移植治疗脊髓损伤的实验研究

目的 :探讨胚胎脊髓细胞悬液 (FSCS)、雪旺细胞 (SC)和神经生长因子 (NGF)修复脊髓损伤的疗效。方法 :用改良Allen法制成4组脊髓损伤动物模型(80只) ,1周后分别行空白对照组 (DMEM ) ,FSCS ,FSCS +SC和FSCS +NGFSC移植入脊髓损伤部位 ,脊髓移植1个月和3个月后分别采用免疫组化染色法观察神经丝蛋白(NF)、髓基质蛋白 (MBP)、5羟色胺(5_HT)的表达情况 ,并根据图像分析各实验组脊髓移植物的免疫阳性反应变化 ;通过改良的Tarlov评分方法观察行为变化。结果 :FSCS +NGFSC联合移植治疗脊髓损伤能够明显促进脊髓再生和修复 ,改善脊髓功能 ,4组疗效之间有显著性差异 (P<0.01)。结论 :转NGF基因雪旺细胞和胚胎脊髓细胞悬液移植治疗脊髓损伤时NGF基因修饰的SC局部释放的NGF能够刺激受损轴突再生 ,促进FSCS移植物与受损脊髓的整合 。

低温保存对大鼠胚胎脊髓细胞的影响

本实验目的是研究低温保存对大鼠胚胎脊髓细胞的影响。选用胎龄１４天的Ｗｉｓｔａｒ大鼠，分离胚胎脊髓，剪成１ｍｍ３的小块。放入冻存液，逐步降温，最后置于液氮中保存。１５天后取出，快速复温、冲洗，并植入正常大鼠脊髓内，同时对死亡和存活细胞计数和涂片，经计算机图像处理，算出细胞存活率和核质比例。实验结果显示：经低温保存的胚胎脊髓细胞存活率低于未经低温保存组；两组的存活细胞形态和核质比无明显改变。

神经生长因子和脑源性神经营养因子基因修饰的雪旺细胞和胚胎脊髓细胞悬液植入促进大鼠脊髓损伤修复的研究

目的从转基因角度探讨治疗脊髓损伤的有效性。方法用改良Allen打击法制作脊髓损伤动物模型,1周后将神经生长因子nervegrowthfactorNGF和脑源性神经营养因子brainderivedneurotrophicfactorBDNF基因修饰的雪旺细胞(Schwanncells,SCs)和胚胎脊髓细胞悬液(fetalspinalcordcellsuspension,FSCS)移植联合植入脊髓损伤部位,1个月和3个月后用免疫组化方法观察神经丝蛋白NF、胶质纤维酸性蛋白GFAP、髓基质蛋白MBP、5-羟色胺5HT、NGF和BDNF的变化,并根据图像分析各实验组的免疫阳性反应变化;通过光电镜观察脊髓组织形态学改变。结果将转NGF和BDNF基因的SCs与FSCS联合植入脊髓损伤部位有以下优点:1移植物能很好地与宿主融合和存活,2能发挥FSCS的“桥接”、“中介”作用,3SCs可以起到神经轴突的“导管”、“导向”作用,4神经营养因子(neurotrophicfactors,NTFs)NGF和BDNF可以刺激轴突的生长和挽救受损的神经元。结论将NGF和BDNF基因修饰的SCs和FSCS移植联合起来,让局部释放的NTFs不断刺激、引导宿主纤维和移植物的整合与联系,以促进脊髓损伤的修复。此方法为将来治疗脊髓损伤提供线索。

丙烯腈对鼠胚胎脊髓神经细胞增殖分化的影响

目的研究丙烯腈(ACN)对大鼠胚胎脊髓神经细胞增殖分化的影响。方法16 d的大鼠胚胎脊髓组织经取材、分离、消化后作原代细胞培养,加入不同浓度的ACN 0.01,0.1,1.0,10.0,50.0,100.0,200.0μg/ml,从细胞形态学及细胞计数角度观察细胞生长与分化过程,同时测定蛋白质含量、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性并与对照组进行比较。结果各组ACN明显抑制胚胎脊髓神经细胞的增殖和分化,集落形成率明显减少,细胞体积小;其半数分化抑制剂量(ICD50)为29μg/ml,半数存活抑制剂量(ICV50)为42μg/ml,均显示剂量-效应关系。结论ACN能抑制胚胎脊髓神经细胞增殖和分化,可能与其能抑制蛋白质合成,并引起脂质过氧化有关。

丙烯酰胺对胚胎脊髓神经细胞增殖分化影响

目的研究丙烯酰胺(ACR)对胚胎脊髓神经细胞增殖分化的影响。方法利用大鼠胚胎脊髓神经细胞进行原代培养,从细胞形态学及细胞计数学角度观察不同浓度ACR对细胞生长与分化的影响;同时测定蛋白质含量、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,并与对照组进行比较。结果150,300μg/ml的ACR对大鼠胚胎脊髓神经细胞无抑制增殖和分化作用,当ACR浓度达到450,600,750μg/ml时作用才显现,并随着浓度的加大,其抑制作用增强。结论ACR能抑制胚胎脊髓神经细胞增殖和分化,可能与其能抑制蛋白质合成、DNA有关。

神经营养因子修饰胚胎脊髓神经干细胞移植后脊髓损伤大鼠的功能恢复和损伤局部基因表达

目的探究神经营养因子修饰胚胎脊髓神经干细胞移植后脊髓损伤大鼠的功能恢复与损伤局部基因表达。方法于2016年8月从孕18 d的30只大鼠胚胎脑部皮质中提取适量的脊髓神经干细胞,对其进行体外培养,然后采用巢蛋白免疫荧光染色方法进行鉴定,将鉴定后的胚胎脊髓神经干细胞植入成年的大鼠损伤脊髓,并将其分为3组,对照组10只、神经干细胞组10只、神经干细胞加胚胎细胞衍生的神经因子移植10只,对胚胎神经干细胞的存活进行观察分析,并对大鼠的损伤后的功能恢复情况以及局部基因表达进行比较分析。结果经过胚胎神经干细胞移植后,7、21 d大鼠的运动功功能评分分别为(26.37±4.62)分、(39.55±2.42)分,对照组7、21 d的运动功能评分分别为(25.62±2.523)分、(32.43±2.46)分,差异有统计学意义(P<0.05),脊髓损伤局部空洞面积也得到了减小(P<0.05),在胚胎神经干细胞中加入修饰胚胎脊髓的神经营养因子后,大鼠的运动功能恢复与局部损伤基因状况改善更加明显,神经干细胞不仅存活,而且能够向损伤头尾处迁移4 mm。结论采用神经营养因子修饰胚胎脊髓神经干细胞移植后,不仅能够使神经细胞存活,迁移,而且能促进大鼠功能的有效恢复。

胚胎脊髓移植联合应用bFGF对脊髓神经组织损伤的早期保护作用

目的探讨脊髓损伤后,联合应用胚胎脊髓(FSC)移植和外源性碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对损伤脊髓组织早期Ca2+、Mg2+的影响。方法利用Wistar大鼠建立脊髓损伤模型;造模后,A组经蛛网膜下腔导管注入5ml FSC细胞悬液;B组注入20μl bFGF与FSC细胞悬液;C组(对照组)不做处理。术后6h、24h取A组、B组和C组动物损伤区脊髓组织测定水和Ca2+、Mg2+含量;术后5d取损伤脊髓组织电镜下观察结构变化。结果C组损伤区脊髓组织水含量增多,Ca2+水平升高,Mg2+水平下降,白质内髓鞘结构紊乱,囊性变严重;A组和B组上述变化均较C组改善。结论脊髓损伤后应用FSC移植和bFGF可减轻离子失衡,从而对继发性损害有抑制作用。