转NGF基因雪旺细胞和胚胎脊髓细胞悬液移植治疗脊髓损伤的实验研究

目的 :探讨胚胎脊髓细胞悬液 (FSCS)、雪旺细胞 (SC)和神经生长因子 (NGF)修复脊髓损伤的疗效。方法 :用改良Allen法制成4组脊髓损伤动物模型(80只) ,1周后分别行空白对照组 (DMEM ) ,FSCS ,FSCS +SC和FSCS +NGFSC移植入脊髓损伤部位 ,脊髓移植1个月和3个月后分别采用免疫组化染色法观察神经丝蛋白(NF)、髓基质蛋白 (MBP)、5羟色胺(5_HT)的表达情况 ,并根据图像分析各实验组脊髓移植物的免疫阳性反应变化 ;通过改良的Tarlov评分方法观察行为变化。结果 :FSCS +NGFSC联合移植治疗脊髓损伤能够明显促进脊髓再生和修复 ,改善脊髓功能 ,4组疗效之间有显著性差异 (P<0.01)。结论 :转NGF基因雪旺细胞和胚胎脊髓细胞悬液移植治疗脊髓损伤时NGF基因修饰的SC局部释放的NGF能够刺激受损轴突再生 ,促进FSCS移植物与受损脊髓的整合 。

胚胎脊髓细胞悬液在大鼠损伤脊髓中的突触发育过程

目的 观察分析胚胎脊髓细胞悬液在损伤脊髓移植区中的突触发育过程。 方法 对 4 2只 Wistar成年大鼠以改良 Allen法 (10 g× 5 cm)打击脊髓 ,3天后将孕 14天 (E14 ) 5只胚胎脊髓细胞悬液 (FSCS) 2 0 μl植入损伤空腔 ,移植后 2、4、6、8、10和 12周 ,以组织学、免疫组织化学观察移植物成活、分化及其与宿主之间关系。 结果 移植区成神经细胞最先展示了胞质突起 ,随之出现了低电子密度的突触前后膜 ,突触前、后膜电子密度逐渐增高形成良好的致密突起。突触小泡数量和种类逐渐增多 ,突触小泡有圆形清亮小泡、椭圆形小泡、颗粒状小泡和扁平小泡 - f型。突触的连接方式由单个的胞体 -树突突触 ,出现多个的胞体 -树突和树突 -树突突触。同时 ,移植成神经细胞、成少突胶质细胞及成星形细胞的细胞器日渐完善 ,细胞功能活跃。血脑屏障也随之出现。移植区可见神经微丝 (NF)、组织胺 (5 - HT)、降钙素基因相关肽 (CGRP)、胶原纤维酸性蛋白 (GFAP)阳性纤维。 结论 胚胎脊髓细胞悬液在成年大鼠损伤脊髓内可发育为成熟的突触 ,显示了 FSCS与宿主脊髓重建突触方式的信息交换的潜在可行性。

胚胎干细胞移植修复脊髓损伤的实验研究

目的观察胚胎干细胞（embryonic stem cell,ES）诱导的神经前体细胞移植,对小鼠脊髓损伤神经功能恢复的影响。方法取由上海市发育生物学重点实验室提供的ES进行细胞培养和体外诱导,收集ES衍生细胞。并进行RT-PCR检测。将50只C57/BL6J小鼠制备为T9、10脊髓半横断模型,将存活的28只小鼠随机分为三组。假手术组（A组）：9只,未作任何处理;手术/细胞组（B组）：10只,于距损伤区域以远约1cm的椎管内注射2~3μl制备的ES衍生细胞,总细胞数为9×105个;手术/DMEM组（C组）：9只,按B组方法注射2~3μl DMEM。术后1、2、4、6和8周采用BBB后肢功能评分观察小鼠神经功能恢复情况,取损伤脊髓进行X-gal染色和免疫组织化学染色观察。结果ES经体外诱导培养,呈圆形或椭圆形小集落生长,有1个或多个核仁。RT-PCR检测,ES细胞诱导后表达巢蛋白及微管相关蛋白,但未表达胶质纤维酸性蛋白。小鼠实验,BBB后肢功能评分显示术后各时间点A组与B、C组比较,差异均有统计学意义（P〈0.01）。B组与C组比较,1、2和4周时,差异有统计学意义（P〈0.01）;6、8周时,组间差异无统计学意义（P〉0.05）。X-gal染色观察,B组呈阳性染色,A、C组均为阴性。免疫组织化学染色观察,B组在损伤脊髓部位,表达兔抗神经微丝蛋白,未表达胶质纤维酸性蛋白。结论将ES培养诱导分化为神经前体细胞移植后,能够存活、迁移,并分化为神经元,但未明显改善神经功能。

胚胎神经干细胞移植及胶质细胞源性神经营养因子对大鼠脊髓损伤的修复作用

将胚胎神经干细胞 (neuralstemcells,NSCs)移植至成年大鼠损伤的脊髓 ,观察移植后NSCs的存活、迁移以及损伤后的功能恢复。实验结果显示 :动物NSCs移植 4周后 ,斜板实验平均角度和运动评分结果比对照组均有明显增高 (P <0 0 5 ) ,而脊髓损伤 (spinalcordinjury,SCI)处的空洞面积显著减小 (P <0 0 5 ) ;在NSCs中加入胶质细胞源性的神经营养因子 (glialcellline derivedneurotrophicfactor,GDNF)后 ,上述改变更加显著。移植后的NSCs不仅能存活 ,而且向损伤的头端和尾端迁移达 3mm之远。这些结果表明 ,移植的NSCs不仅可以存活、迁移 ,还可减小SCI空洞面积 ,促进动物神经功能的恢复 ;此外 。

胚胎干细胞移植治疗脊髓损伤的研究进展

胚胎干细胞移植具有为损伤的脊髓提供营养,或分化成少突胶质细胞使脱髓鞘的神经再髓鞘化,或分化成神经元并与宿主神经元建立突触连接等作用,从而修复受损的神经功能,在脊髓损伤的治疗中具有良好的应用前景。

白癜风外科治疗新进展——毛囊外根鞘细胞悬液移植

白癜风是一种皮肤色素异常性疾病,表现为慢性局限性的皮肤色素脱失斑,表皮黑素细胞功能进行性丢失,如果出现毛发变白则提示预后较差。白癜风的外科疗法即手术治疗,适用于对光疗或药物治疗无效的稳定期白癜风患者,对非手术疗法不敏感的皮损,如唇部、手足、手指及生殖器等部位也可采用外科疗法。除了常见的自体表皮移植和自体黑素细胞移植,近年来采用毛囊单位提取法获取毛囊外毛根鞘细胞悬液移植作为一种新的外科手段,逐渐显现出其在白癜风治疗中的优势。该文就该方法在白癜风中的应用作一综述。

人胚胎嗅鞘细胞移植修复大鼠脊髓全横断损伤

[目的]探索人胚胎嗅鞘细胞（hOECs）移植修复大鼠脊髓全横断损伤的可行性。[方法]分离、培养并鉴定人胚嗅鞘细胞，24只Wistar大鼠，随机分为实验组和对照组，均行T10节段脊髓全横断。术后第9～10d，实验组、对照组分别移植Hoechst33342标记的hOECs 5μl（2．5×10^5个细胞）、DMEM—F12培养基5μl。移植术后第1、2、4、6、8、10周进行BBB运动功能评分，取材行荧光化学（Hoechsd3342）和免疫组织化学染色（P75、NF-200、Synaptophysin）。双盲条件下进行数据统计。[结果]移植的hOECs可以在损伤脊髓内存活10周以上，可向损伤脊髓头尾两端迁移；术后4～10周实验组的BBB运动功能评分明显高于对照组（P〈0．01）；P75染色实验组呈阳性反应；NF-200和Synaptophysin免疫组化染色，实验组神经纤维、突触数目和密度都较对照组高。[结论]hOECs移植对脊髓全横断损伤大鼠运动功能恢复具有促进作用。

卵泡液中白细胞介素2、白细胞介素12、白细胞介素18与体外受精-胚胎移植妊娠结局的相关性

目的探讨卵泡液中细胞因子白细胞介素2(IL-2)、IL-12、IL-18与体外受精-胚胎移植妊娠结局的关系。方法接受体外受精-胚胎移植助孕治疗的妇女117例,其中妊娠妇女59例,未妊娠妇女58例,应用酶联免疫吸附试验检测卵泡液中IL-2、IL-12、IL-18的浓度。结果妊娠组卵泡液中IL-2的浓度为(36.73±18.53)pg/ml、IL-12的浓度为(0.52±0.88)pg/ml、IL-18的浓度为(76.10±69.06)pg/ml;未妊娠组卵泡液中IL-2的浓度为(40.89±22.83)pg/ml、IL-12的浓度为(1.59±1.58)pg/ml、IL-18的浓度为(131.80±162.35)pg/ml。未妊娠组IL-12和IL-18浓度均明显高于妊娠组(P<0.05),未妊娠组IL-2浓度虽较妊娠组升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 IL-12、IL-18在接受体外受精-胚胎移植助孕治疗的非妊娠妇女中明显升高,考虑与体外受精-胚胎移植妊娠结局负相关。

人胚胎神经干细胞移植治疗大鼠脊髓完全横断损伤

目的:探讨利用人胚胎神经干细胞(hNSC)移植治疗大鼠脊髓完全横断损伤的效果。方法:分离、培养和鉴定hNSC。将培养的hNSC植入脊髓完全横断的Wistar大鼠损伤局部,并设DMEM-F12培养液注射组(对照组)。移植术后第1、2、4、6、8、10周对两组大鼠进行BBB运动功能评分,观察脊髓功能恢复情况;并取损伤处脊髓组织行免疫组织化学染色,了解双苯亚甲胺(Hoechst)标记的移植细胞在体内存活和分化情况。结果:体外细胞培养可获得大量hNSC;细胞移植4周后,实验组的BBB运动功能评分较对照组明显提高(P<0.01);第4周、第10周免疫组化结果示移植的hNSC在损伤脊髓内存活、分化形成神经元和神经胶质细胞,并向损伤脊髓头尾两侧迁徙。结论:hNSC移植后仍保持其多向分化能力;hNSC移植可改善脊髓全横断损伤大鼠的运动功能。

人胚嗅鞘细胞与胚胎脊髓组织联合移植对大鼠脊髓损伤的治疗作用

目的探讨人胚嗅鞘细胞(OECS)和大鼠胚胎脊髓组织(ESC)联合移植在促进大鼠横断脊髓轴索再生方面有无协同作用。方法将体外培养纯化的OECS及新鲜获取的胎鼠脊髓组织用作治疗大鼠脊髓半切洞损伤模型的移植物,通过对动物定期进行行为学评定,结合病理学观察,并通过辣根过氧化物酶-四甲基联苯胺(HRP-TMB)逆行示踪技术,评价OECS和ESC对神经元存活、纤维再生的影响。结果OECS和ESC联合移植对损伤脊髓具有明显保护作用并能促进宿主脊髓轴突再生,ESC不能帮助再生轴索返回宿主组织;而OECS除能帮助再生轴索突破胶质屏障外更能使再生轴突髓鞘化,并具有一定的迁移能力。结论OECS和ESC联合移植在促进大鼠脊髓功能恢复中起到了互补和协同的作用。

虹鳟胚胎组织单细胞悬液制备方法的研究

采用0.01MPBS等渗液配制的浓度为70%的乙醇固定液对虹鳟活体胚胎进行固定,并以蒸馏水配制的浓度为70%乙醇固定液作为对照,探讨用于流式细胞术分析的胚胎组织单细胞悬液制备方法。实验结果表明:PBS-乙醇和蒸馏水-乙醇固定液均可获得分散良好的单细胞悬液,但蒸馏水-乙醇固定液制备的胚胎细胞悬液中细胞数量相对较少,细胞碎片明显增多,流式细胞仪检测G0/G1峰较宽。而PBS-乙醇固定液制备的细胞悬液,细胞形态完整、背景较干净,细胞粘连少,几乎没有细胞碎片,流式上机检测各参数值较理想;以PBS-乙醇固定液制备2n虹鳟胚胎单细胞悬液作为材料检测,其结果与以红细胞为对照的样品检测DNA相对含量结果相一致,均为50AU。本研究表明利用PBS-乙醇固定液制备鱼类胚胎组织单细胞悬液方法是可行的。

胚胎嗅鞘细胞移植治疗脊髓炎后遗症：32例应用ASIA评分自身对照(英文)

背景:动物实验研究已证实,采用细胞移植、神经营养因子注入或移植等方法可改变损伤脊髓局部环境,促使损伤脊髓恢复部分功能。目的:开展嗅鞘细胞移植治疗脊髓炎后遗症的临床实验,观察其对脊髓损伤的恢复作用。设计:非随机自身对照。单位:山东省泰安荣军医院外二科病房。对象:选择2004-06/2007-07来源于全国各地的陈旧性脊髓炎患者32例,伤后时间为0.5～7年。患者经各种传统治疗及肢体功能锻炼后神经功能无明显改善,并遗留各种感觉运动及植物神经功能障碍。男21例,女11例,年龄5～48岁,急性病毒性脊髓炎18例,急性化脓性脊髓炎8例,结核性脊髓炎6例,发病后均曾给予大剂量甲基强地松龙、地塞米松、抗炎、抗免疫及各种神经营养药物治疗。26例临床表现均为完全性损伤。6例为不完全性损伤,患者对治疗知情同意,治疗方案经过医院伦理委员会批准。胚胎嗅球来自流产胚胎,由患者或家属自愿捐献。方法:取胚胎嗅球,经细胞分离、培养、纯化7～14 d,最后消化成单细胞混悬液,然后在手术显微镜下移植到患者损伤脊髓区域的上下方。术后2周～2个月,采用2000年美国脊髓损伤学会制定的ASIA评分标准进行术后评定,并进行手术前后对比。主要观察指标:①感觉功能变化。②运动功能变化。结果:嗅鞘细胞移植术后0.5-2年,32例患者感觉和运动功能均有明显改善(运动功能:51.53±13.41,55.72±10.50;轻触觉:63.06±15.98,69.53±11.68;疼痛觉:64.03±15.01,69.50±12.20,P均<0.01)。结论:嗅鞘细胞移植能够有助于脊髓炎后遗症患者的神经功能恢复,但长期疗效有待于进一步观察。

玻璃化冻存对胚胎神经细胞活性及脊髓移植的影响

采用玻璃化冻存技术对大鼠胚胎神经细胞进行深低温保存，在冻存１ｄ、１０ｄ、２０ｄ和４０ｄ后，３８℃水浴快速复温，离心洗脱冷冻保护剂，检测胚胎神经细胞的活性与功能，并移植于脊髓损伤大鼠．实验结果表明：玻璃化冻存４０ｄ的胚胎神经细胞，存活率为７６．４±８．３％，膜完整性为冻存前的６９．４±７．８％．细胞活力虽有下降，但仍可维持较高水平．培养１周的部分神经元建立突触联系。

来源于胚胎干细胞的神经前体细胞移植修复脊髓损伤(英文)

背景:在一定条件下,胚胎干细胞可诱导分化成为神经前体细胞,当移植到健全或损伤的中枢神经系统后,可以与宿主细胞有效整合,修复重建损伤的神经组织。目的:观察胚胎干细胞诱导的神经前体细胞移植对小鼠脊髓损伤神经功能恢复的影响。设计:随机对照动物实验。单位:上海第二医科大学发育生物学研究中心。材料:选用28只6～8周龄C57/BL6J小鼠,雌雄不限。小鼠胚胎干细胞株S8及携带LacZ标记基因由上海市发育生物学研究中心提供。高糖DMEM、2-巯基乙醇、小鼠白血病抑制因子、丝裂霉素C均来自GIBCO贴壁诱导培养液由上海市发育生物学研究中心提供。方法:实验于2003-04/2004-04在上海第二医科大学发育生物学研究中心实验室完成。采用贴壁诱导法将ES细胞培养诱导分化为神经前体细胞,将小鼠麻醉,在T9～10椎骨平面制成脊髓半横断模型,随机摸球法将大鼠分为3组,假手术组(n=9):仅剪除T9-10棘突和椎板后,逐层缝合。干细胞移植组(n=10):脊髓半横断后,行距损伤区域以远约1cm的椎管内注射细胞。模型组(n=9):脊髓半横断后在损伤邻近区注射DMEM。各组分别于实验后第1,2,4,6,8周采用BBB评分观察各组小鼠神经功能恢复情况,实验后第8周(BBB评分后)利用x-gal染色观察各组脊髓损伤区胚胎干细胞存活和分化情况。X-gal染色干细胞移植组阳性的损伤脊髓部位切片进行荧光免疫组化检测。主要观察指标:①各组小鼠神经功能恢复情况。②各组脊髓损伤区胚胎干细胞存活和分化情况。③荧光免疫组化检测结果。结果:①干细胞移植组第1,2,4周BBB得分,高于模型组(P<0.01)。②脊髓损伤区胚胎干细胞存活和分化情况:干细胞移植组中小鼠的脊髓损伤处组织切片可以发现x-gal染色阳性的细胞,胞浆呈现蓝色,即胚胎干细胞来源的衍生细胞,而假手术组和模型组的脊髓均未见该现象。干细胞移植组损伤脊髓部位植入的胚胎干细胞来源的衍生细胞分布损伤区周围并与周围组织整合,与周边细胞在形态上类似。③干细胞移植组损伤脊髓部位,X-gal染色阳性细胞可表达神经元特异性标志NF,但没有表达GFAP标志。结论:将ES细胞的培养诱导分化为神经前体细胞移植后,能够存活、迁移、并分化为神经元,但改善神经功能情况不明显。

应用胚胎干细胞移植治疗老年重症肌萎缩脊髓侧索硬化症的护理

肌萎缩性脊髓侧索硬化症是一个渐进和致命的神经退行性疾病。临床表现为四肢肌肉逐渐萎缩、无力,直至瘫痪。晚期患者容易发生呼吸衰竭和吞咽困难,最终因肺部感染,病情迅速恶化,全身肌肉极度萎缩,痛苦而终。目前,该病国际上尚无有效的治疗方法,以对症治疗为主。

卵泡液细胞因子与体外受精-胚胎移植的关系

细胞因子是一类具有广泛生物学活性的激素样多肽,其在生殖过程中的作用日益受到人们的认识和关注,已成为一个崭新的研究领域。卵泡液作为卵子生长的微环境,包含了对卵母细胞生长发育有重要影响的细胞因子,如白血病抑制因子和白细胞介素-1等,它们之间形成复杂的网络体系,协同发挥生物活性功能,影响着卵母细胞的发育、成熟、受精、着床以及胚胎形成。该文综述了近几年来卵泡液细胞因子与体外受精-胚胎移植妊娠结局关系的研究状况。

胚胎脊髓提取液对神经干细胞分化发育的影响

目的观察胚胎脊髓提取液(fetal spinal cord extracts,FE)对神经干细胞(neural stem cells,NSC)分化的影响并探讨其机制。方法制备FE加入NSC培养体系中诱导分化,分别于分化后第3、7天进行免疫荧光细胞化学鉴定,观察分化细胞表型并计算神经元样细胞所占的比例。结果两组均可观察到神经元,实验组所占比例较高,可达23.39%,明显多于对照组(P<0.01)。两组GFAP阳性星形胶质细胞分化已经比较成熟,也可检测出MBP阳性少突胶质细胞。结论FE通过提供胚胎脊髓源性神经营养因子、各种细胞因子和细胞外基质,支持NSC成活并诱导其分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞,且神经元的分化比例达到23.39%。

同种异体胚胎神经干细胞移植修复脊髓损伤的时效性观察

目的:观察同种异体胚胎神经干细胞移植对脊髓损伤大鼠双后肢运动功能的修复作用,并分析其移植时效性。方法:实验于2003-07/08在大连医科大学分子生物学实验室和大连理工大学环境与生命学院生物医学实验室完成。①取孕14￣16d的大白鼠1只,引颈处死,剖腹,取出胎鼠,钳取大脑皮质及皮质下脑室旁的脑组织,体外培养大鼠胚胎神经干细胞。②将30只成年SD大鼠按随机数字表法分为3组,即损伤对照组、早期移植组和延期移植组,每组10只。3组大鼠均制作脊髓横断损伤模型,造成大鼠下肢瘫痪,早期移植组、延期移植组大鼠分别在伤后3d及3周移植胎鼠脑组织神经干细胞。观察移植后大鼠双后肢的运动功能恢复情况,通过胶质原纤维酸性蛋白及神经元特异性烯醇化酶免疫组化染色法观察各组大鼠的脊髓组织形态学变化,胶质原纤维酸性蛋白是星形胶质细胞特异性标志蛋白,神经元特异性烯醇化酶是神经元特异性蛋白。结果:脊髓损伤建模实验纳入大鼠30只,全部进入结果分析,无脱失。①各组大鼠神经干细胞移植后双后肢的功能恢复情况:早期移植组和延期移植组大鼠双后肢的运动功能均有明显改善,但早期移植组表现尤为显著。早期移植组和延期移植组细胞移植后五六天即可见瘫痪大鼠的后肢肌力开始恢复,二三周后可出现爬行,4周后后肢活动活跃;损伤对照组大鼠的瘫痪肢体无任何恢复。②移植4周后早期移植组大鼠移植区脊髓组织的形态学变化:脊髓移植区肉眼可见有增生的组织充填,镜下有大量新生的细胞,表现为神经元和神经胶质细胞阳性染色(胶质原纤维酸性蛋白(+),神经元特异性烯醇化酶(+))。结论:神经干细胞移植对脊髓横断大鼠运动功能恢复有促进作用,早期移植疗效更好。

大鼠胚胎小脑提取液对培养脊髓神经细胞的作用

目的：探讨不同胎龄大鼠小脑提取液（ＣＥ）对体外培养脊髓神经细胞的影响。方法：制备不同蛋白浓度的１４，１６，１８，２０ ｄ 胎鼠（Ｅ１４、Ｅ１６、Ｅ１８、Ｅ２０）ＣＥ，加入原代培养的Ｅ１８ 胎鼠脊髓神经细胞中，２４ ｈ 后以微量快速自动比色法检测细胞活性。结果：实验组各胎龄ＣＥ均能促进培养脊髓神经元的存活，并有蛋白浓度依赖关系，与对照组及其它各实验组相比有极显著性差异（Ｐ＜ ０．００１），Ｅ１４ 和Ｅ１８ ＣＥ分别在蛋白浓度为０．２０ 和０．４０ ｍ ｇ／ｍ ｌ时有最大神经营养活性。