人胚胎脑组织蛋白提取物诱导人胎盘间充质干细胞向神经细胞的分化

背景:选择合适的诱导方法诱导人胎盘间充质干细胞分化为神经元样细胞是临床治疗神经损伤的关键。目的:在人胎盘间充质干细胞中加入商品化的人胚胎脑组织蛋白提取物,观察其诱导分化为神经元样细胞的可行性。方法:采用酶消化法分离培养人胎盘间充质干细胞,传至第3代,将人早期胚胎脑组织蛋白提取物加入诱导培养基培养6 d,加入浓度为20 nmol/L全反式维甲酸和500μg/L音猬因子培养3 d,换新的培养液,包含体积分数为10%胎牛血清,10μg/L脑源性神经营养因子,20μg/L神经胶质细胞源性神经营养因子,50μg/L胰岛素样生长因子Ⅱ型继续培养3 d。结果与结论:胎盘组织经酶消化后获得贴壁细胞,传至第2代细胞形态为梭形,成漩涡样生长,传至第3代细胞形态较均一。诱导后细胞经免疫细胞化学法检测均表达神经元特异性烯醇化酶、巢蛋白、胶质纤维酸性蛋白、神经丝蛋白、神经生长相关蛋白43;ELISA法检测细胞培养上清脑源性神经营养因子、神经营养因子3、神经营养因子4为阳性表达;RT-PCR检测细胞微管相关蛋白、神经元特异性烯醇化酶、神经丝蛋白、神经生长相关蛋白43均为阳性表达。结果表明人胚胎脑组织蛋白提取物使人胎盘间充质干细胞诱导分化为神经元样细胞。

胚胎脑组织的冷冻保存

实验对１３天～１５天胎龄的Ｗｉｓｔｅｒ大鼠胚胎脑组织进行深低温（－１９６℃）冷冻保存研究。根据冷冻保护剂二甲基亚砜的浓度不同分０．７Ｍ、１．５Ｍ、２．１Ｍ和２．８Ｍ四组，又根据冷冻速度分慢速和快速两种。结果随着二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）的浓度升高冷冻存活率增高，到２．１Ｍ时为９０．１９％，但再增高时冷冻存活率提高不明显。慢速冷冻比快速存活率高。结果提示以慢速冷冻ＤＭＳＯ为２．

小鼠胚胎脑组织移植块中选择性荧光标记神经元的发育和投射

目的:建立选择性荧光标记小鼠胚胎脑组织移植块移植模型并观察选择性荧光标记的神经元在成体脑组织中的存活、发育和投射。方法:将孕龄14～15 d选择性荧光标记的胎鼠脑组织块移植到受损的普通小鼠大脑皮层中,2个月后用荧光显微镜和共聚焦显微镜结合Nissl染色的方法观察胚胎脑组织移植块内选择性荧光标记的神经元在受体大脑中的生长发育情况。结果:在胚胎脑组织移植块内观察到只有少部分神经元被标记,这些类似于Golgi染色模式的选择性荧光标记的神经元有大量的神经纤维投射到受体鼠的不同脑区。通过Nissl染色和共聚焦成像发现胚胎脑组织移植块内神经元能分化并形成典型的突触结构-树突棘和突触终扣。结论:胚胎脑组织移植块内选择性荧光标记的神经元在受体脑内能够存活并特异性地表达荧光,这些标记的神经元具有正常的形态结构,可以投射到各个脑区并参与神经回路的重建。

胚胎脑组织移植长期存活的观察

大鼠胚胎小脑组织移植，移植物能够成活并逐渐生长。普肯野细胞胞体面积移植后５ｄ为３７．０９μｍ２，移植后２０ｄ增至２４７．０１μｍ２。移植后３０ｄ普肯野细胞胞体面积、分子层厚度均明显少于移植后２０ｄ，差异有显著性，（Ｐ＜０．０１）。移植后４０ｄ移植物周围可见巨噬细胞或淋巴细胞聚集，移植后６０ｄ，移植物变小，普肯野细胞缩小为１６６．３２μｍ２。普肯野细胞层和颗粒层可见固缩碎解的细胞核。移植后９０ｄ，移植物中仅见散在的普肯野细胞和巨噬细胞。提示胚胎小脑组织移植，移植物在宿主脑内存活时间比在其它部位长。

胚胎脑组织制备(磁场+冷冻处理)脊髓移植试验观察

目的 探讨脊髓损伤后、组织移植的可行性。方法 同种动物胚胎脑组织,为增强生理后性磁场处理,保存在低温环境中,最后移植异体脊髓中。结果 移植后的组织成活部分功能恢复。

一种脑组织移植的方法

自1980年Thompson报道猫、狗的脑组织移植研究至今已有一百年了。在这一百年中,脑组织移植的研究大致可分三个方面,即成年动物之间脑组织移植;以新生动物为供体的脑组织移植;和以胚胎为供体的脑组织移植。最近十几年内,在胚胎脑组织移植方面取得了一些令人振奋的进步^(5)。这些进展激励着人们去探索治疗神经系某些疾患的新途径^(1,2,7)。

胚脑组织提取液神经营养活性成分的分析

目的通过对胚脑组织的分离纯化,分析不同组份中的神经营养物质对神经细胞的营养作用。方法:采用超滤器超滤,透析袋透析以及Sephadex S-200凝胶层析方法将胚胎脑组织提取液分离纯化。得到9种不同分子量组分的脑活性因子(BCF),分别加入原代培养的新生SD大鼠大脑皮层神经细胞悬液中,培养24 h和15 d后以MTT微量快速自动比色法检测细胞活性。结果发现培养24 h后,有5种组分具有促进培养的大脑皮层神经元的存活的作用,与对照组相比有显著性差异(P<0.05);培养15 d后,有4种组分具有促进培养的大脑皮层神经元的存活的作用,与对照组相比有显著性差异(P<0.05)。结论胚脑组织提取液可促进培养的大脑皮层神经元的成活、成熟和分化。不同的组分蛋白对神经元的作用不一样。

胚脑神经肽Y的免疫组织化学研究

通过免疫组织化学方法观察胚胎大鼠脑组织神经肽Ｙ的分布与含量变化。结果：大脑皮质在胚胎第２０天出现神经肽Ｙ，丘脑和下丘脑在胚胎第１４天开始出现神经肽Ｙ，并随着胎龄增加而显著增加，脑干从胚胎第１４天开始出现神经肽Ｙ，并在胚胎第１８天达到最高峰，胚胎小脑未见神经肽Ｙ阳性反应。

叩开生命的禁区──谈小脑移植术

叩开生命的禁区──谈小脑移植术文／白怡，梦婕白玉琴，山西省临汾县一位普普通通的农村妇女，年仅四十，就因四肢无力，行走不稳，双手颤抖，视物模糊，大小便失禁等症状，日常生活完全无法自理，在丈夫的陪同下，住进了西安医科大学第一附属医院神经外科病房。患者的期...

神经干细胞——神经系统的种子细胞

神经干细胞(neural stem cell,NSC)既具有增殖能力,又具有向多细胞系(神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞等)分化的能力,在神经移植中既可作为替代治疗的种子细胞,又可作为基因治疗的载体细胞,具有很大的应用价值。在过去相当长时间里人们认为,NSC只存在于胚胎脑组织中,1992年Reynolds和Weiss首次从成年小鼠纹状体分离得到了NSC。近年来不但完善了从胚胎和成体脑组织培养NSC的方法,而且建立了从胚胎干细胞培养NSC的方法,并发现骨髓基质细胞(bone marrow stromal cell)具有发育成NSC的能力。本文就几个来源的NSC进行综述。

神经生长因子在胎脑组织保存和移植中的应用

大鼠胚胎脑组织放入神经生长因子（ＮＧＦ）溶液或ＤＭＥＭ培养液中保存１～６天，观察不同时间细胞存活率，ＮＧＦ组均高于ＤＭＥＭ组。将这两种液体中保存５天的组织分别植入两组成年大鼠脑内，６～８周后组织学观察发现，ＮＧＦ组移植成活４／１０，对照组移植物成活３／９．尽管两组移植物成活率比较差别不显著（Ｐ＞０．０５），但是移植物生存质量ＮＧＦ组明显优于对照组。

硬膜外腔电脉冲刺激用于脊髓损伤的治疗

脊髓损伤后的功能康复一直是人们探索的难题,为寻求各种有效的治疗方法进行了多方面的尝试,其中有人用胚胎脑组织脊髓内移植但效果不甚理想,目前仍是早期的椎管内减压以及脊髓切开减压,各种神经营养药物的应用,后期的针灸等各种理疗方法的应用。

脑内移植治疗顽固性癫痫的临床研究

目的：寻找提高治疗癫痫的疗效方法。方法：本组采用癫痫灶切除和脑移植结合，治疗此类病人６２例。结果：显示总有效率达９５％，而常规治疗组为９２％，与常规治疗组比有显著差异（Ｐ＜００１）。

EGF、bFGF、NGF、RA对小鼠神经干细胞定向分化的调控

目的观察EGF、bFGF、NGF、RA对小鼠神经干细胞(NSCs)增殖及定向分化的影响。方法用无血清培养与单细胞克隆技术对小鼠胚胎脑组织进行分离、培养,随后分别加入EGF、bFGF、NGF、RA等因子观察其对NSCs定向分化的影响。结果EGF培养的小鼠NSCs,2d后见细胞集落形成(典型克隆球);克隆球中的细胞成圆形,形态规则,未见细胞突起,呈桑椹状聚集;经血清诱导分化后,则主要为星形胶质细胞,仅有个别的神经元。而bFGF培养的NSCs,生长良好,但克隆球数目较EGF组少,克隆球体积略小。3bFGF与EGF共同培养的NSCs,除诱导分化后,分化的细胞性质与EGF组的不同外,其余同EGF组。NGF对神经球的形成无明显的影响。RA组的克隆球数目量很少,形态以球形为主,部分细胞贴壁并出现突起。结论EGF,bFGF对NSCs的增殖及分化种类均有一定的影响。而NGF与RA则主要影响其细胞的分化,且两者的共同点都是促使其向神经元方向分化。