胚胎致死异常视觉蛋白A与卵巢上皮性癌

卵巢癌是常见的妇科恶性肿瘤,其死亡率在妇科恶性肿瘤占居首位,因70%的患者就诊时已属晚期,其预后极差。因此,卵巢癌的早期诊断和治疗尤为重要。胚胎致死异常视觉蛋白A(HuR)是一种RNA结合蛋白,能与腺嘌呤/尿嘧啶富集元件(ARE)相结合,ARE参与细胞的生长、分化及免疫应答。HuR在恶性肿瘤中高表达,其胞质HuR的表达与肿瘤的临床期别及患者的预后直接相关。众多研究提示,环氧合酶2(COX-2)可能成为一项独立的判断卵巢癌预后的分子及生化指标,而HuR的表达与COX-2蛋白表达增加呈正相关。

沉默环状RNA_胚胎致死异常视觉样蛋白2(circELAVL2)抑制小鼠睾丸TM4支持细胞增殖并促进其凋亡

目的观测沉默环状RNA_胚胎致死异常视觉样蛋白2(circELAVL2)对小鼠睾丸TM4支持细胞增殖和凋亡的影响,并探索潜在机制。方法应用小干扰RNA技术沉默小鼠睾丸TM4细胞circELAVL2的表达,沉默circELAVL2后,采用CCK-8法和5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷染色评估TM4细胞增殖能力,流式细胞术和脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测TM4细胞的凋亡。生物信息学方法预测微小RNA-382-3p(miR-382-3p)与circELAVL2的结合位点,荧光素酶报告实验检测circELAVL2与miR-382-3p的结合能力。实时定量PCR检测circEALVL2和miR-382-3p表达水平。结果沉默circELAVL2的表达后,TM4细胞增殖速度和EdU阳性细胞比例降低,凋亡细胞比例增加。机制研究结果显示circELAVL2可结合并下调miR-382-3p表达。结论circELAVL2可通过结合并抑制miR-382-3p表达促进小鼠TM4支持细胞增殖能力并抑制其凋亡。

转化生长因子-β受体Ⅱ环状RNA通过调节核糖核酸结合蛋白2/胚胎致死性异常视觉样蛋白1促进前列腺癌发生发展

目的探讨前列腺癌细胞中转化生长因子-β受体Ⅱ环状RNA(circTGFBR2)调节核糖核酸结合蛋白2(PTBP2)/胚胎致死性异常视觉样蛋白1(ELAVL1)激活SMAD2信号途径促进前列腺癌发生发展。方法利用生物信息学方法, 寻找与circTGFBR2结合microRNA以及其他相关蛋白结合位点, 以及与PTBP2存在相互作用的RNA结合蛋白。PC3转染pcDNA3.1-circTGFBR2后, 实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测circTGFBR2的表达。PC3细胞过表达circTGFBR2同时敲低微小RNA(microRNA, miR)-29b, 蛋白质印迹法(Western blot)检测ALK5、SMAD2及p-SMAD2表达。PC3分别转染pcDNA3.1-circTGFBR2及对照质粒后, 利用circTGFBR2特异性探针进行pulldown, 检测PTBP2与circTGFBR2的相互作用。过表达circTGFBR2与ELAVL1, 检测细胞上皮-间充质转化(EMT)的标志基因E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及ZMYM1表达, 以及Transwell检测细胞迁移。组间比较应用单因素方差分析。结果分析结果显示circTGFBR2存在多个miR-29b结合的位点, ALK5(又名TGFBR1)mRNA 3’端非编码区(3’UTR)同样存在miR-29b的结合位点, 并证实PTBP2与另一个RNA结合蛋白ELAVL1存在相互作用。用转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激PC3细胞发现, circTGFBR2的表达高于对照组(1.83±0.02比1.03±0.02, F=2 832.200, P<0.01)。PC3分别转染pcDNA3.1-circTGFBR2及对照质粒后, RT-qPCR检测circTGFBR2的表达, 可见circTGFBR2组高于对照组(176.41±1.21比1.04±0.02, F=63 426.15, P<0.01)。应用miR-29b抑制剂或circTGFBR2处理细胞后ALK5的蛋白水平明显高于对照组, 应用miR-29b抑制剂同时过表达circTGFBR2后进一步增加ALK5的表达(分别为0.15±0.01、0.48±0.02、0.55±0.01、0.74±0.01, F=1268.314, P<0.01), 并且SMAD2(分别为1.14±0.02、1.28±0.02、1.42±0.01、1.5±0.25, F=4.852, P<0.01)和p-SMAD2(分别为0.18±0.02、0.36±0.01、0.65±0.01、0.94±0.02, F=1663.667, P<0.01)的磷酸化水平也呈相同趋势。Pulldown-MS实验, 多个蛋白质能与circTGFBR2结合, 并证实PTBP2与circTGFBR2相互作用。与对照组比较, 敲低前列腺癌细胞PTBP2或过表达circTGFBR2时, 间质标志基因Vimentin表达高于对照组, 而上皮样标志基因E-cadherin表达低于对照组, 当同时过表达circTGFBR2并敲低PTBP2会逆转上述结果(Vimentin分别为0.22±0.02、0.87±0.02、0.85±0.02、0.6±0.01, F=1319.52, P<0.01;E-cadherin分别为0.80±0.01、0.45±0.03、0.36±0.02、0.9±0.02, F=614.919, P<0.01)。当过表达circTGFBR2或高表达ELAVL1时, PTBP2与ELAVL1的相互作用减弱, 细胞EMT的标志基因E-cadherin表达低于对照组, Vimentin及ZMYM1表达高于对照组, Transwell检测细胞迁移高于对照组, 而当同时高表达ELAVL1及circTGFBR2时, 上述趋势会进一步增强(Vimentin分别为0.22±0.02、0.87±0.02、0.85±0.02、0.6±0.01, F=1 319.52, P<0.01;E-cadherin分别为0.93±0.02、0.76±0.02、0.43±0.02、0.27±0.01, F=1 108.46, P<0.01;ZMYM1分别为0.24±0.01、0.53±0.02、0.32±0.01、1.04±0.02, F=2 023.794, P<0.01)。结论 circTGFBR2通过调节PTBP2/ELAVL1激活SMAD2信号途径促进前列腺癌发生发展。

基于糖尿病骨质疏松细胞模型探究ELAVL1对破骨细胞铁死亡的调控作用

目的探究胚胎致死性异常视觉样蛋白1(ELAVL1)是否通过破骨细胞死亡调控糖尿病骨质疏松症(DOP)。方法选取2021年1月—2023年2月长沙市中心医院就诊的50例DOP患者和50例糖尿病但不伴随骨质疏松的患者作为研究对象,分别作为DOP组和对照组。比较两组患者血清ELAVL1、GPX4、Nrf2、ACSL4水平差异,分析ELAVL1与铁死亡相关基因(GPX4、Nrf2、ACSL4)的相关性。采用50 ng/mL RANKL孵育小鼠骨髓源性巨噬细胞RAW264.7以诱导破骨分化。对DOP组进行亚分组,以患者血清ELAVL1含量的平均值(14.94 ng/mL)为标准,分为ELAVL1低表达组(血清ELAVL1<14.94 ng/mL,28例)及ELAVL1高表达组(血清ELAVL1>14.94 ng/mL,22例)。将破骨细胞分为对照组、高糖组、高糖+sh-NC组、高糖+sh-ELAVL1组,比较各组ELAVL1、GPX4、核因子红细胞系2相关因子2(Nrf2)、酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(ACSL4)、活性氧、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、总铁含量、铁离子(Fe^(2+))表达量、线粒体膜电位。结果ELAVL1高表达组与ELAVL1低表达组性别构成、年龄、糖尿病病程、BMI比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。ELAVL1高表达组T-score值低于ELAVL1低表达组(P<0.05),血清β-CTX、血清PINP高于ELAVL1低表达组(P<0.05)。DOP组血清GPX4、Nrf2比对照组低(P<0.05),ACSL4比对照组高(P<0.05)。经Pearson相关性分析结果表明,DOP患者血清ELAVL1表达与ACSL4呈正相关(r=0.689,P<0.05),与GPX4、Nrf2呈负相关(r=-0.312和-0.447,均P<0.05),血清ELAVL1与ACSL4呈正相关(r=0.689,P<0.05),血清ELAVL1与GPX4呈负相关(r=-0.559,P<0.05),血清ELAVL1与Nrf2呈负相关(r=-0.669,P<0.05)。高糖组GPX4、Nrf2 mRNA较对照组降低(P<0.05),ELAVL1、ACSL3 mRNA较对照组升高(P<0.05),高糖+sh-ELAVL1组GPX4、Nrf2 mRNA较高糖+sh-NC组升高(P<0.05),ELAVL1、ACSL3 mRNA较高糖+sh-NC组降低(P<0.05)。高糖组GPX4、Nrf2蛋白较对照组降低,ELAVL1、ACSL4蛋白较对照组升高(P<0.05),高糖+sh-ELAVL1组GPX4、Nrf2蛋白较高糖+sh-NC组升高(P<0.05),ELAVL1、ACSL4蛋白较高糖+sh-NC组降低(P<0.05)。高糖组总铁含量及Fe2+表达量较对照组升高(P<0.05),高糖+sh-ELAVL1组较高糖+shNC组降低(P<0.05)。高糖组MDA较对照组高(P<0.05),GSH较对照组低(P<0.05),高糖+sh-ELAVL1组MDA较高糖+sh-NC组低,GSH较高糖+sh-NC组高(P<0.05)。结论高糖条件诱导破骨细胞铁死亡,ELAVL1与DOP铁死亡有关,敲低ELAVL1可抑制高糖诱导的破骨细胞铁死亡。

类胚胎致死性异常视觉基因1表达与卵巢浆液性癌化疗耐药及预后关系研究

目的探讨类胚胎致死性异常视觉基因1(ELAV1)在卵巢浆液性肿瘤组织中的表达与卵巢浆液性癌化疗耐药及预后的关系。方法采用免疫组化法对2010年1月至2013年2月中国医科大学附属盛京医院收治的40例卵巢浆液性癌(化疗耐药20例和化疗敏感20例)、15例卵巢交界性浆液性瘤、20例卵巢良性浆液性瘤及15例正常卵巢组织中的ELAV1蛋白表达进行检测,并对ELAV1表达与患者临床病理资料及生存率的关系进行分析。结果 (1)ELAV1蛋白胞浆在卵巢浆液性癌中的阳性表达率明显高于卵巢交界性浆液性瘤、卵巢良性浆液性瘤和正常卵巢组织(P<0.05),且在卵巢癌化疗耐药组织中明显高于化疗敏感组织(P<0.05)。(2)ELAV1蛋白胞核阳性表达率在卵巢浆液性癌、卵巢交界性浆液性瘤、卵巢良性浆液性瘤及正常卵巢组织中差异无统计学意义(P>0.05)。(3)胞浆ELAV1的表达与卵巢浆液性癌FIGO病理分期及淋巴结转移情况相关(P<0.05),与患者年龄、是否绝经及分化程度无关(P>0.05)。(4)Kaplan-Meier生存分析提示:ELAV1蛋白胞浆阳性和化疗耐药患者生存时间短。结论 ELAV1可能与卵巢浆液性癌的发生发展相关,可作为预测卵巢浆液性癌化疗耐药及预后的指标。

胞质HuR在卵巢上皮性癌的表达及意义

目的检测HuR在卵巢上皮性癌中的表达及与临床病理参数的关系,寻求卵巢癌的预后因素。方法采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接(SP)法和逆转录RT-PCR技术,检测胞质和胞核HuR在正常、交界性、恶性卵巢组织中的表达;分析胞质HuR的表达与预后的关系。结果胞质和胞核HuR在恶性卵巢肿瘤组织的表达明显高于交界性卵巢肿瘤和正常卵巢组织,胞质和胞核HuR在交界性卵巢肿瘤的表达与正常卵巢组织比较无显着性差异;胞质HuR的表达随组织学分级、临床分期增高,阳性表达率逐渐增高,胞核HuR的表达与临床病理参数无关。结论 HuR的过表达可能在卵巢癌的发生发展中起重要作用,检测胞质HuR在卵巢癌中的表达可预测该肿瘤生物学行为特征,可作为独立的预后指标。

HuR蛋白在胸腺瘤组织中的表达及意义

目的:检测HuR蛋白在胸腺瘤组织中的表达,分析其与胸腺瘤是否发生侵袭邻近器官及组织学分型的关系及意义。方法:采用免疫组织化学方法检测HuR在50例胸腺瘤组织中的表达。结果:HuR的表达与胸腺瘤是否发生侵袭相关(P<0.05),无侵袭及有侵袭阳性率分别为40.91%及78.57%。HuR的表达与胸腺瘤的组织学分型相关(P<0.05)。结论:HuR在胸腺瘤细胞核中高表达可能参与了胸腺瘤的发生发展过程,有望影响胸腺瘤的术后治疗。

卵巢浆液性肿瘤组织中ELAV1、HCCR、MCM4表达水平及其临床意义

目的观察卵巢浆液性肿瘤组织中类胚胎致死性异常视觉基因1(ELAV1)、HCCR、MCM4表达情况,并分析其临床意义。方法选取接受治疗的卵巢浆液性肿瘤患者为研究对象,并根据其病理类型分为良性肿瘤组和恶性肿瘤组。观察两组患者ELAV1、HCCR、MCM4表达情况,比较不同临床病理类型卵巢浆液性恶性肿瘤患者ELAV1、HCCR、MCM4表达的差异,分析影响卵巢浆液性恶性肿瘤患者ELAV1、HCCR、MCM4表达的因素。结果卵巢浆液性恶性肿瘤组患者的ELAV1、HCCR、MCM4阳性表达率分别为60.00%、70.00%、80.00%,高于对照组的12.00%、8.00%、5.00%(P<0.001);临床分期为Ⅲ+Ⅳ期、组织学分级为中、低分化、有淋巴结转移的卵巢浆液性恶性肿瘤患者ELAV1、HCCR、MCM4蛋白阳性表达水平较高,不同年龄的卵巢浆液性恶性肿瘤患者ELAV1、HCCR、MCM4水平无明显差别;将单因素分析有意义的因素作为自变量,将ELAV1、HCCR、MCM4蛋白水平作为因变量进行多因素分析,结果显示,组织学分级是影响卵巢浆液性恶性肿瘤患者ELAV1、HCCR、MCM4蛋白水平的因素。结论卵巢浆液性肿瘤患者的ELAV1、HCCR、MCM4阳性表达率较高,且受患者组织学分级的影响。

RNA结合蛋白ELAVL1与肿瘤进展的关系研究

胚胎致死性异常视觉样蛋白1(ELAVL1/HuR)是一种RNA结合蛋白,通过与特定的mRNA结合参与转录后调控,从而影响细胞增殖、凋亡、分化等生物学行为。近年来研究表明,ELAVL1与肿瘤细胞的增殖、血管生成、侵袭、转移及耐药性明显相关。本文就ELAVL1蛋白与肿瘤进展关系展开综述。

钩藤碱对甲基苯丙胺依赖SH-SY5Y细胞模型及miR-375-3p/Elavl4表达的影响

目的探讨钩藤碱对甲基苯丙胺依赖人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)模型及微小RNA-375-3p(miR-375-3p)/胚胎致死异常视觉-样4蛋白(Elavl4)表达的影响。方法用最大安全剂量诱导法建立甲基苯丙胺依赖细胞模型。将细胞分成正常组(完全培养液)、对照组(完全培养液+400μmol·L^(-1)钩藤碱孵育48 h)、模型组(完全培养液+100μmol·L^(-1)甲基苯丙胺孵育48 h)、实验组(完全培养液+400μmol·L^(-1)的钩藤碱孵育15 min后,再加入100μmol·L^(-1)甲基苯丙胺孵育48 h)。以酶联免疫吸附法检测细胞环腺苷酸(cAMP)、5-羟色胺(5-HT)水平;以实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞miR-375-3p表达情况;以蛋白质印迹法检测Elavl4蛋白表达情况。结果正常组、对照组、模型组和实验组cAMP表达水平分别为(6.33±0.93)、(6.57±1.12)、(10.89±1.03)和(7.81±1.32)pmol·mg^(-1);5-HT分别为(682.46±17.32)、(690.31±15.09)、(510.11±27.67)和(649.99±21.42)pg·mL^(-1);miR-375-3p表达水平分别为1.00±0.13、1.13±0.24、3.48±0.18和1.58±0.19;Elavl4表达水平分别为1.00±0.05、0.89±0.10、0.50±0.09和0.90±0.11。模型组上述指标与正常组比较,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05);实验组上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论本研究建立甲基苯丙胺依赖细胞模型,同时发现钩藤碱可能调控miR-375-3p/Elavl4表达拮抗甲基苯丙胺成瘾。

HuR蛋白在胃癌组织中的表达及其意义

目的检测HuR蛋白在正常胃黏膜、癌前病变及胃癌中的表达,分析并探讨其与胃癌临床病理因素的关系及意义。方法采用组织芯片和免疫组化PV-9000二步法检测HuR在235例胃癌及其癌前病变和部分配对正常胃黏膜在上述组织中的表达。结果 HuR在胃癌组织、肠上皮化生和异型增生中的表达(分别为43.83%、40.00%和40.74%)均显著高于正常胃黏膜(1.60%),均P<0.001;胃癌中HuR表达与组织分化程度、Lauren分型、Borrmann分型有关(P<0.05)。结论 HuR在胃癌胞质中高表达可能参与了胃癌的发生发展过程,为胃癌形成的早期事件之一;有望用于胃癌的诊断和治疗。

circ-WHSC1通过靶向作用于miR-338-3p/ELAVL1轴影响鼻咽癌细胞的生物学特征和放射敏感性

目的研究环状Wolf-Hirschhorn综合征候选基因1(circ-WHSC1)对鼻咽癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭和放射敏感性的影响及分子机制。方法收集2017年1月至2020年6月于郑州大学附属郑州中心医院手术治疗的23例鼻咽癌患者的癌组织和癌旁组织,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测circ-WHSC1、miR-338-3p、果蝇胚胎致死视力异常样蛋白1(ELAVL1)mRNA的表达水平,Western blot检测ELAVL1蛋白的表达水平。将鼻咽癌细胞5-8F、SUNE1分为si-NC组、si-circ-WHSC1组、pCD5-ciR组、circ-WHSC1组、anti-miR-NC组、anti-miR-338-3p组、miR-NC组、miR-338-3p组、si-circ-WHSC1+anti-miR-NC组、si-circ-WHSC1+anti-miR-338-3p组、miR-338-3p+pcDNA组、miR-338-3p+ELAVL1组,采用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞活性,克隆形成实验检测细胞克隆形成数及细胞放射敏感性,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot检测蛋白表达。采用双荧光素酶实验检测circ-WHSC1与miR-338-3p、miR-338-3p与ELAVL1的靶向关系。将稳定转染sh-circ-WHSC1的SUNE1细胞接种于裸鼠皮下,每隔3 d给予5 Gy红外线照射,23 d后测定移植瘤的体积和重量。结果鼻咽癌组织中circ-WHSC1和ELAVL1 mRNA的表达水平分别为3.78±1.18和3.36±0.77,高于癌旁组织(1.57±0.94和1.28±0.74,均P<0.001);miR-338-3p mRNA的表达水平为1.37±0.98,低于癌旁组织(3.13±0.96,P<0.001)。鼻咽癌细胞C666-1、6-10B、5-8F和SUNE1中circ-WHSC1 mRNA的表达水平分别为1.64±0.14、2.00±0.21、2.81±0.26和3.36±0.34,均高于鼻咽上皮细胞NP69(1.00±0.10,均P<0.05)。鼻咽癌细胞5-8F和SUNE1中miR-338-3p mRNA的表达水平分别为0.48±0.08和0.38±0.07,均低于鼻咽上皮细胞NP69(1.00±0.08,均P<0.001);ELAVL1蛋白的表达水平分别为2.51±0.19和3.27±0.27,均高于鼻咽上皮细胞NP69(1.00±0.08,均P<0.001)。与si-NC组比较,敲除circ-WHSC1后,鼻咽癌细胞的相对细胞活性降低[5-8F细胞:(51.33±8.62)%比(100.00±8.00)%;SUNE1细胞:(41.02±7.31)%比(100.00±10.10)%;均P<0.01],克隆形成数减少[5-8F细胞:(50.33±8.02)个比(101.00±8.54)个;SUNE1细胞:(42.33±10.01)个比(114.00±14.10)个;均P<0.01],细胞凋亡率升高[5-8F细胞:(18.3±1.01)%比(5.37±1.20)%;SUNE1细胞:(22.43±1.40)%比(6.50±1.18)%;均P<0.01],迁移数减少[5-8F细胞:(72.33±9.50)个比(136.00±13.00)个;SUNE1细胞:(62.67±11.50)个比(154.00±14.10)个;均P<0.01]、侵袭数减少[5-8F细胞:(60.67±9.07)个比(113.67±11.59)个;SUNE1细胞:(50.33±9.01)个比(124.33±15.57)个;均P<0.01];8 Gy射线照射后,细胞存活分数降低[5-8F细胞:0.06±0.01比0.23±0.04;SUNE1细胞:0.05±0.02比0.32±0.07;均P<0.05]。circ-WHSC1靶向负调控miR-338-3p的表达,抑制miR-338-3p可逆转敲除circ-WHSC1对鼻咽癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭和放射敏感性的影响。miR-338-3p靶向负调控ELAVL1的表达,ELAVL1过表达可逆转上调miR-338-3p对鼻咽癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭和放射敏感性的影响。裸鼠成瘤实验显示,与sh-NC组相比,细胞接种后23 d,sh-circ-WHSC1组小鼠肿瘤体积缩小[(487.33±76.51)mm^(3)比(884.67±95.63)mm^(3),P<0.001],肿瘤重量降低[(558.67±75.04)mg比(899.01±88.54)mg,P=0.002)];5 Gy红外线照射后,裸鼠肿瘤体积减小[(243.13±42.51)mm^(3)比(395.00±73.50)mm^(3),P<0.001],肿瘤重量降低[(211.09±57.51)mg比(452.33±67.30)mg,P=0.015]。结论鼻咽癌组织和细胞中circ-WHSC1高表达。circ-WHSC1通过靶向作用于miR-338-3p/ELAVL1轴影响鼻咽癌细胞的增殖、迁移、侵袭及放射敏感性。