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大肠杆菌胞内代谢物组学分析样品前处理条件优化 被引量:1
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作者 李阳 王继彤 +4 位作者 刘晓露 田静 贾铮 肖志明 樊霞 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1402-1410,I0005,I0006,共11页
建立了适用于大肠杆菌胞内代谢物组学分析的样品前处理条件。大肠杆菌菌体细胞采用冷冻盐水(0.85%NaCl,-80℃预冷15 min)进行猝灭,猝灭后的菌体细胞经过真空冷冻干燥,再通过液氮冷冻研磨结合超声裂解的方式通透细胞膜,最后采用冷甲醇-水... 建立了适用于大肠杆菌胞内代谢物组学分析的样品前处理条件。大肠杆菌菌体细胞采用冷冻盐水(0.85%NaCl,-80℃预冷15 min)进行猝灭,猝灭后的菌体细胞经过真空冷冻干燥,再通过液氮冷冻研磨结合超声裂解的方式通透细胞膜,最后采用冷甲醇-水(MeOH-H 2O,1∶1,V/V,4℃)提取胞内代谢物。分别采用流式细胞术检测和OD值回收率从单细胞水平和整体水平评价猝灭溶剂对大肠杆菌细胞膜损伤影响。结果表明,采用冷冻盐水猝灭大肠杆菌细胞损伤率小于5%。采用液相色谱-飞行时间质谱(T 3和Hilic 2种色谱分离结合ESI±扫描模式)检测结果中低碰撞能量提取出的峰数量和总离子强度评价了3种细胞通透方式和4种提取溶剂组合的胞内代谢物提取效果。结果表明,冷冻研磨结合超声裂解通透细胞膜、冷甲醇-水提取代谢物测得的代谢物数量最多(≥10^5),并且总离子强度在最优范围(10^6~10^7)内。本研究采用冷冻干燥、冷冻研磨和超声萃取相结合的代谢物提取方式,有效促进了细胞膜裂解,提高了代谢物提取效率。本研究建立的前处理条件适用于大肠杆菌胞内代谢物组学分析。 展开更多
关键词 大肠杆菌 胞内代谢 组学分析 样品前处理
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培养条件对毛霉胞内代谢产物稳定性的影响研究
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作者 史碧波 《西昌学院学报(自然科学版)》 2015年第4期25-28,共4页
试验初步探讨了毛霉培养条件对其胞内代谢产物稳定性的影响。以单一菌株为研究对象,探讨了培养基、接种量、培养时间、培养温度、摇瓶速度等因素对菌株胞内代谢产物HPLC图谱的影响,分析各因素的影响大小,建立了规范化的培养流程:选用马... 试验初步探讨了毛霉培养条件对其胞内代谢产物稳定性的影响。以单一菌株为研究对象,探讨了培养基、接种量、培养时间、培养温度、摇瓶速度等因素对菌株胞内代谢产物HPLC图谱的影响,分析各因素的影响大小,建立了规范化的培养流程:选用马铃薯制作马铃薯葡萄糖培养基,按每支18×180 mm试管装载30 m L进行分装,灭菌后接种2 m L的孢子悬液,在温度设为20℃的恒温摇床中以150 r/min摇瓶速度摇瓶培养4 d后取出。 展开更多
关键词 毛霉 培养条件 胞内代谢产物 高效液相色谱 中药色谱指纹图谱 相似度评价系统
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胞内代谢指纹分析在推断新化合物抗菌作用机制中的应用评价
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作者 施锦杰 范列英 马红霞 《国际检验医学杂志》 CAS 2011年第3期374-375,共2页
目的探讨利用胞内代谢指纹分析推断化合物抗菌作用机制的应用价值。方法 4种胍类化合物和13种常用抗生素作用于金黄色葡萄球菌的培养物,利用气相色谱-质谱对不同刺激下菌体细胞内代谢物进行全面检测即代谢指纹分析,通过聚类分析推断菌... 目的探讨利用胞内代谢指纹分析推断化合物抗菌作用机制的应用价值。方法 4种胍类化合物和13种常用抗生素作用于金黄色葡萄球菌的培养物,利用气相色谱-质谱对不同刺激下菌体细胞内代谢物进行全面检测即代谢指纹分析,通过聚类分析推断菌体代谢指纹相似性及化合物可能的作用机制。结果合成的4种化合物与常用的抗生素相比较,对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRSCoN)具有显著的抗菌活性,其相应的MIC值在0.125~8.000μg/mL之间;气相色谱-质谱对金黄色葡萄球菌ATCC25923在不同化合物存在条件下的代谢指纹分析,结果显示4种化合物具有相似的作用机制(P〉0.05);4种化合物与克林霉素关系最近,它们之间可能具有相似的作用机制。结论利用气相色谱-质谱代谢指纹分析,能够相对容易地推断抗菌药物的作用机制。 展开更多
关键词 气相色谱-质谱法 胞内代谢指纹分析 抗菌作用机制
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对数生长期酿酒酵母胞内代谢情况分析 被引量:3
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作者 曹凤 任红 +3 位作者 黄桂东 祝智航 陈忻 钟先锋 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2022年第22期68-75,共8页
酿酒酵母是发酵产业中的关键微生物,处于对数生长期的酵母菌迅速繁殖,积累大量初级代谢产物,对此时期进行调控可以提高发酵效率。为了解对数生长期酿酒酵母发酵情况,采用液相色谱串联质谱法(liquid chromatography tandem mass spectrom... 酿酒酵母是发酵产业中的关键微生物,处于对数生长期的酵母菌迅速繁殖,积累大量初级代谢产物,对此时期进行调控可以提高发酵效率。为了解对数生长期酿酒酵母发酵情况,采用液相色谱串联质谱法(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)对酵母胞内主要代谢物及其代谢途径进行分析。结果表明,在对数生长期酿酒酵母胞内共鉴定927种代谢物,含氮和含硫化合物数量及相对含量均最高。这些代谢物参与的代谢途径中,核苷酸代谢、辅因子和维生素代谢、碳水化合物代谢以及氨基酸代谢为酿酒酵母主要代谢途径,核苷酸代谢中相对含量最高的为嘧啶代谢。代谢物和代谢途径主要涉及酵母细胞膜的构建,遗传信息的复制,信号分子的传递,渗透压的调节等。为酵母提供生长所需的基本小分子物质和能量,同时为合成蛋白质、核酸等生物大分子物质提供原料。此外,碳水化合物和氨基酸代谢的代谢流分布可更好地支持酿酒酵母进行核苷酸代谢,促进酵母菌的增殖、生长和存活。该研究结果为定向改造酿酒酵母、提高其发酵效率提供一定科学依据。 展开更多
关键词 酿酒酵母 对数生长期 胞内代谢 代谢 代谢途径
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短短芽胞杆菌代谢物组测定中代谢终止方式的优化
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作者 陈梅春 刘波 +4 位作者 朱育菁 陈峥 史怀 刘国红 潘志针 《福建农业学报》 CAS 2012年第12期1352-1359,共8页
微生物代谢组学是定性和定量研究分析细胞内外所有低分子量代谢产物,在发酵控制分析、代谢物控制分析及其他组学联用进行菌种改良等方面得到了应用。胞内代谢物种类和浓度变化非常迅速,因此快速冻结代谢反应是非常重要的,所以必须有效... 微生物代谢组学是定性和定量研究分析细胞内外所有低分子量代谢产物,在发酵控制分析、代谢物控制分析及其他组学联用进行菌种改良等方面得到了应用。胞内代谢物种类和浓度变化非常迅速,因此快速冻结代谢反应是非常重要的,所以必须有效率高和可靠的代谢终止方式,减少代谢物的流失。本研究以短短芽胞杆菌JK-2为研究对象,以LC-MS测定为评价标准,考察了5种代谢终止方式对胞内代谢物保留程度。结果表明,冷甲醇/水(含HEPES)代谢终止方式能够保留的代谢物最多,效率最高及其重现性好,在LC-MS正离子模式下,能够提取出3 000多种胞内代谢物。同时也考察了样品在正负模式下测试情况,结果表明正离子模式下能够检测到的代谢物的数目远远超过负离子模式下检测的数目。 展开更多
关键词 短短芽杆菌 代谢组学 灭活 胞内代谢 正负离子模式
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应用代谢网络模型解析工业微生物胞内代谢 被引量:8
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作者 叶超 徐楠 +1 位作者 陈修来 刘立明 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1901-1913,共13页
为了快速、高效地理解工业微生物胞内代谢特征,寻找潜在的代谢工程改造靶点,基因组规模代谢网络模型(GSMM)作为一种系统生物学工具越来越受到人们的关注。文中在回顾GSMM 20年发展历程的基础上,分析了当前GSMM的研究现状,总结了GSMM的... 为了快速、高效地理解工业微生物胞内代谢特征,寻找潜在的代谢工程改造靶点,基因组规模代谢网络模型(GSMM)作为一种系统生物学工具越来越受到人们的关注。文中在回顾GSMM 20年发展历程的基础上,分析了当前GSMM的研究现状,总结了GSMM的构建及分析方法,从预测细胞表型和指导代谢工程两个方面阐述了GSMM在解析工业微生物胞内代谢中的应用,并展望了GSMM未来的发展趋势。 展开更多
关键词 微生物胞内代谢 生产性能 基因组规模代谢网络模型 系统生物学
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超高效液相色谱-三重四极杆质谱联用检测红色糖多孢菌胞内中间代谢物同位素丰度
7
作者 牟翰 洪铭 +5 位作者 刘晓云 李敏超 黄明志 储炬 庄英萍 张嗣良 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1264-1270,共7页
采用超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱联用仪(LC-MS/MS),建立了能精确检测红色糖多孢菌胞内代谢物^(13)C同位素丰度的方法。在优化的超高效液相色谱的条件及三重四极杆串联质谱的离子传输电压和碰撞池电压下,筛选出各胞内代谢物的最... 采用超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱联用仪(LC-MS/MS),建立了能精确检测红色糖多孢菌胞内代谢物^(13)C同位素丰度的方法。在优化的超高效液相色谱的条件及三重四极杆串联质谱的离子传输电压和碰撞池电压下,筛选出各胞内代谢物的最佳离子对。根据物质在LC-MS/MS中生成的母离子和子离子碳链长短及子离子是否含有^(13)C等特性,建立了"一对一"法、"一对多"法和单级质谱SIM法等同位素丰度检测方法。利用这些方法,检测了自然标记标准品和^(13)C标记实验样品,根据实验值与理论值的接近程度筛选出最优方法。结果表明,对于以磷酸糖类为代表的子离子不含有^(13)C的代谢物,"一对一"法最有效;对于以有机酸类为代表的母离子和子离子都含有^(13)C的短碳链代谢物,"一对多"法更有优势;对于以辅酶A类为代表的母离子和子离子都含有^(13)C且碳链较长的代谢物,单级质谱SIM法才能发挥作用。建立的同位素丰度检测方法具有较好的准确度,可应用于红色糖多孢菌胞内代谢物同位素丰度的检测,为后续研究菌体的代谢机理,实现红霉素的高效表达奠定了基础。 展开更多
关键词 红色糖多孢菌 胞内代谢 13C同位素丰度 超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱
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不同溶氧条件下谷氨酸棒杆菌发酵过程代谢物及关键酶酶活分析 被引量:11
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作者 卢志洪 刘志成 郑穗平 《中国酿造》 CAS 北大核心 2010年第6期28-31,共4页
分别在10%和30%溶氧条件下,使用2L罐进行谷氨酸发酵,分析了这2种发酵状态下细胞外和细胞内代谢物含量和关键酶活性变化。结果表明,10%溶氧和30%溶氧情况下产酸分别达到36.02 g/L和38.22 g/L,表明高溶氧适合产酸。溶氧低时,乳酸脱氢酶在... 分别在10%和30%溶氧条件下,使用2L罐进行谷氨酸发酵,分析了这2种发酵状态下细胞外和细胞内代谢物含量和关键酶活性变化。结果表明,10%溶氧和30%溶氧情况下产酸分别达到36.02 g/L和38.22 g/L,表明高溶氧适合产酸。溶氧低时,乳酸脱氢酶在发酵中期活性很高,从酶学角度揭示溶氧低易生成乳酸,却不利于谷氨酸的积累。不同溶氧水平下,α-酮戊二酸、丙酮酸乳酸、柠檬酸、琥珀酸表现出相似的变化规律,但其在成峰时间和最大浓度有一定差别。发酵后期胞外各有机酸含量出现一定程度的下降,表明其可作为碳源被细胞重新利用。 展开更多
关键词 谷氨酸发酵 代谢 胞内代谢 关键酶
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初始pH值对细脚拟青霉小试发酵过程菌体生长及胞内核苷类物质积累的影响 被引量:2
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作者 桂琳 葛飞 +1 位作者 周小楠 周权 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第15期163-166,共4页
在30L发酵罐中,采用液体深层发酵的方法,考察培养液初始pH7、6.5、6、5.5、5、4.5时对细脚拟青霉菌体生长及胞内核苷类物质积累的影响。结果表明:初始pH6.5时,对菌体生长和胞内核苷的积累最为有利,最大生物量为28.7g/L,最高胞内核苷类... 在30L发酵罐中,采用液体深层发酵的方法,考察培养液初始pH7、6.5、6、5.5、5、4.5时对细脚拟青霉菌体生长及胞内核苷类物质积累的影响。结果表明:初始pH6.5时,对菌体生长和胞内核苷的积累最为有利,最大生物量为28.7g/L,最高胞内核苷类物质产量为5.94mg/g;起始pH7、6、5.5、5、4.5时,最大生物量分别在发酵的第9、10、11、11、13天获得,依次为26.4、27.3、23.6、21.2、18.5g/L;最大胞内核苷类物质的产量分别在发酵的第11、11、11、13、13天获得,依次为5.27、5.51、4.89、4.29、4.05mg/g。细脚拟青霉以菌体或者胞内代谢物为发酵目标进行优化控制时,其发酵初始pH值应调节到相应的最佳值。 展开更多
关键词 细脚拟青霉 胞内代谢 生物量 核苷类物质
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胞外ATP:一种新的细胞凋亡诱导剂 被引量:5
10
作者 符乃阳 马靖 《生命的化学》 CAS CSCD 2000年第6期250-253,共4页
关键词 凋亡 诱导剂 外ATP 胞内代谢
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不同碳源及通气条件下lpdA基因敲除对大肠杆菌代谢的影响 被引量:2
11
作者 李迈 姚善泾 清水和幸 《化工学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第4期880-885,共6页
lpdA基因编码的lipoamidedehydrogenase是丙酮酸脱氢酶复合体、α酮戊二酸脱氢酶复合体和甘氨酸裂解多酶体系的组成亚基之一.比较了不同碳源及通气条件下,lpdA基因敲除突变E.coli与野生E.coli的发酵特性,并通过对一些主要的酶活和胞内... lpdA基因编码的lipoamidedehydrogenase是丙酮酸脱氢酶复合体、α酮戊二酸脱氢酶复合体和甘氨酸裂解多酶体系的组成亚基之一.比较了不同碳源及通气条件下,lpdA基因敲除突变E.coli与野生E.coli的发酵特性,并通过对一些主要的酶活和胞内代谢产物浓度的测量,考察了lpdA基因敲除对E.coli代谢的影响.结果表明:葡萄糖为碳源的有氧条件下,lpdA基因的敲除导致丙酮酸、D乳酸、L谷氨酸的积累,TCA循环的抑制,乙醛酸途径和磷酸戊糖途径中的磷酸葡萄糖脱氢酶的激活.乙酸或丙酮酸为碳源的有氧发酵及葡萄糖为碳源的微氧发酵实验补充了以上的结论. 展开更多
关键词 LPDA 大肠杆菌 丙酮酸 D-乳酸 L-谷氨酸 酶活 胞内代谢产物
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苜蓿中华根瘤菌代谢组学样品制备方法的研究 被引量:2
12
作者 张田 张志丹 +3 位作者 刘蛟 董会娜 付绍平 张大伟 《工业微生物》 CAS 2019年第4期1-7,共7页
代谢组样品制备是代谢组学研究的基础。本文以维生素B12生产菌株苜蓿中华根瘤菌Sinorhizobium meliloti 320为研究对象,通过检测细胞损伤、ATP泄漏、代谢物回收效率以及细胞代谢淬灭效率综合评价细胞淬灭方法,同时对5种提取试剂的提取... 代谢组样品制备是代谢组学研究的基础。本文以维生素B12生产菌株苜蓿中华根瘤菌Sinorhizobium meliloti 320为研究对象,通过检测细胞损伤、ATP泄漏、代谢物回收效率以及细胞代谢淬灭效率综合评价细胞淬灭方法,同时对5种提取试剂的提取效率进行比较优化胞内代谢物的提取方法。最终获得苜蓿中华根瘤菌S.meliloti 320的胞内代谢组学样品制备较佳条件:即-20℃40%甲醇淬灭细胞,过滤收集淬灭细胞,甲醇/乙腈/水(体积比为2∶2∶2,外加0.1%的甲酸)与50%甲醇相结合提取胞内代谢物。实验结果显示-20℃的40%甲醇(通过过滤收集细胞)对细胞膜的损伤较小,且细胞代谢淬灭效率和回收效率较高;甲醇/乙腈/水(体积比为2∶2∶2,外加0.1%的甲酸)与50%的甲醇对胞内代谢物的提取效率较高且有互补作用。 展开更多
关键词 苜蓿中华根瘤菌 代谢组样品制备 淬灭 胞内代谢物提取
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基于GC-MS的棉子糖肠球菌代谢组学样品前处理方法的优化
13
作者 杨新达 牛肖凡 +3 位作者 刘仲浩 张健 张巧珍 高强 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2022年第18期130-136,共7页
探究不同的样品前处理方法对气相色谱-质谱联用(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)法检测棉子糖肠球菌(Enterococcus raffinosus)胞内小分子代谢物种类和数量的影响。通过GC-MS分析测定不同的菌体破碎方式、菌体清洗次数以... 探究不同的样品前处理方法对气相色谱-质谱联用(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)法检测棉子糖肠球菌(Enterococcus raffinosus)胞内小分子代谢物种类和数量的影响。通过GC-MS分析测定不同的菌体破碎方式、菌体清洗次数以及冻融时间处理后的棉子糖肠球菌样品的胞内代谢物的种类。结果显示,液氮研磨较超声破碎更有利于胞内物质的释放;清洗3次既可清洗掉菌体表面的杂质,也能够防止胞内小分子代谢物外泄;冻融3 min更利于胞内代谢物的提取。通过优化后的前处理方法处理的样品,共检测出253种胞内小分子物质,经NIST 17.0数据库可精确匹配到8类共47种物质,其中酯类5种、烯烃类1种、烷烃类2种、醇类5种、酸类30种、糖类1种、苯环类2种、其他1种。 展开更多
关键词 棉子糖肠球菌 代谢组学 样品前处理方法 气相色谱-质谱法(GC-MS) 胞内代谢
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ORP调控对葡萄糖和果糖混合底物丁醇发酵的影响
14
作者 齐高相 吴又多 +2 位作者 陈丽杰 万慧慧 白凤武 《化工进展》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第A01期243-250,共8页
采用氧化还原电位(oxidoreduction potential,ORP)调控以模拟菊芋块茎酸解液(葡萄糖和果糖混合糖)为底物进行的丙酮丁醇发酵过程,能够有效控制"酸崩溃"现象的发生。已通过实验确定最佳调控策略为控制整个发酵过程的ORP不低于-... 采用氧化还原电位(oxidoreduction potential,ORP)调控以模拟菊芋块茎酸解液(葡萄糖和果糖混合糖)为底物进行的丙酮丁醇发酵过程,能够有效控制"酸崩溃"现象的发生。已通过实验确定最佳调控策略为控制整个发酵过程的ORP不低于-460mV。本研究在最佳调控策略下,发酵终点丁醇浓度从3.39g/L提高到11.65g/L,残糖浓度从30.82g/L降低到1.38g/L。对比ORP调控组和对照组发现,ORP调控能够改变发酵过程中细胞内还原力水平,能量状态和代谢流向,因此ORP调控能有效防止"酸崩溃"现象发生,调节菌体生长和溶剂产量。ORP调控策略应用于以葡萄糖和果糖混合糖为底物的丁醇发酵具有操作可行性,是一种简便而有效的工艺优化手段。 展开更多
关键词 混合糖 丁醇发酵 丙酮丁醇梭菌 ORP调控 胞内代谢
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Endostatin promotes the anabolic program of rabbit chondrocyte 被引量:2
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作者 YiFENG YiPinWU XuDongZHU YanHongZHANG QingJunMA 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 2005年第3期201-206,共6页
Endostatin is a natural occurred angiogenesis inhibitor derived from collagenXVIII. So far its function during the angiogenesis process of bone formation and arthropathy has not been well studied yet. The present stud... Endostatin is a natural occurred angiogenesis inhibitor derived from collagenXVIII. So far its function during the angiogenesis process of bone formation and arthropathy has not been well studied yet. The present study addresses the function of endostatin in rabbit articular chondrocytes (RAC). We found that endostatin can promote RAC adhesion and spreading as well as its proliferation. In monolayer cultured RAC, CollagenII, TIMP1 and collagenXVIII transcription were up regulated by endostatin while collagenI and MMP9 were down regulated. Moreover collagenXVIII and endostatin antigens are present at synovial fluid. These findings indicate new function of endostatin as a homeostatic factor in cartilage metabolism. 展开更多
关键词 ENDOSTATIN ANGIOGENESIS CHONDROCYTE matrix metalloproteinase.
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采用代谢组学分析技术分析工业啤酒发酵过程中风味物质生成规律 被引量:14
16
作者 钟成 刘伶普 +3 位作者 李清亮 杨攀飞 郝俊光 贾士儒 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期49-58,共10页
啤酒风味是保证啤酒品质的关键因素之一。运用代谢组学的方法,分析工业啤酒发酵过程中酵母胞内代谢物和啤酒风味物质的对应关系,从代谢水平上研究风味物质形成过程中的关键影响因素。在啤酒发酵过程中,同时检测风味物质的含量变化和酵... 啤酒风味是保证啤酒品质的关键因素之一。运用代谢组学的方法,分析工业啤酒发酵过程中酵母胞内代谢物和啤酒风味物质的对应关系,从代谢水平上研究风味物质形成过程中的关键影响因素。在啤酒发酵过程中,同时检测风味物质的含量变化和酵母胞内代谢物的变化,对得到海量的、多维的代谢数据采用主成分分析(PCA)和偏最小二乘分析(PLS)的多元统计分析方法进行处理。由PCA分析结果可知:磷酸、海藻糖、琥珀酸、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸对主成分贡献比较大,说明这些代谢物在不同发酵阶段含量变化显著。由PLS分析结果可知:对啤酒风味影响最大的物质主要为氨基酸,包括丝氨酸、缬氨酸、苏氨酸、赖氨酸、丙氨酸、亮氨酸和天冬酰胺等,这为啤酒中风味物质的调控提供了一定的理论指导。 展开更多
关键词 啤酒 风味 酵母胞内代谢 代谢组学 多元统计分析
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产L-丝氨酸谷氨酸棒杆菌的代谢工程改造和代谢流分析 被引量:5
17
作者 来书娟 张芸 +4 位作者 刘树文 梁勇 商秀玲 柴欣 温廷益 《中国科学:生命科学》 CSCD 北大核心 2012年第4期295-303,共9页
作为胞内一碳单位的主要来源,L-丝氨酸对维持菌体生理代谢具有不可替代的作用,导致其难于实现以糖质为原料的直接发酵法生产.本研究采用系统代谢工程策略,构建了基因工程菌Corynebacterium glutamicum SER-8.连续补料发酵实验显示,SER-... 作为胞内一碳单位的主要来源,L-丝氨酸对维持菌体生理代谢具有不可替代的作用,导致其难于实现以糖质为原料的直接发酵法生产.本研究采用系统代谢工程策略,构建了基因工程菌Corynebacterium glutamicum SER-8.连续补料发酵实验显示,SER-8的比生长速率降低,L-丝氨酸的积累量在不同的生长时期呈现变化.代谢流分析证明,过表达3-磷酸甘油酸激酶使糖酵解途径和三羧酸循环增强,过表达脱敏型3-磷酸甘油酸脱氢酶加强了L-丝氨酸合成途径.敲除激活蛋白GlyR部分减弱了L-丝氨酸向甘氨酸的转化,代谢流比率仍有38.2%.实验结果表明,胞内L-丝氨酸的代谢对维持C.glutamicum的生长至关重要,而通过引入GCV裂解系统,分解过量的甘氨酸,同时增加胞内一碳单位的供应将是未来L-丝氨酸代谢工程改造的新靶点. 展开更多
关键词 谷氨酸棒杆菌 L-丝氨酸-胞内代谢物-代谢工程-基元模型分析
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唾液乳杆菌渗透胁迫的核磁共振分析
18
作者 齐宁利 龚霄 李普旺 《食品工业》 北大核心 2013年第11期157-159,共3页
唾液乳杆菌是一类重要的益生菌,在其天然生境或应用过程中常常面临渗透胁迫,导致发酵活力降低、益生功效的发挥受到抑制。采用一维核磁共振技术分析了渗透胁迫下唾液乳杆菌胞内代谢物组成及变化,结果发现不同生化途径的小分子代谢物,如... 唾液乳杆菌是一类重要的益生菌,在其天然生境或应用过程中常常面临渗透胁迫,导致发酵活力降低、益生功效的发挥受到抑制。采用一维核磁共振技术分析了渗透胁迫下唾液乳杆菌胞内代谢物组成及变化,结果发现不同生化途径的小分子代谢物,如氨基酸、有机羧酸、糖类、核苷及其衍生物等存在显著差异。其中,贡献率大于85%的主要差异代谢物依次为甜菜碱、2-氨基丁酸、脯氨酸、肉毒碱和牛磺酸,也从代谢水平上研究微生物渗透胁迫应答机制提供了新思路和新方法。 展开更多
关键词 唾液乳杆菌 渗透胁迫 胞内代谢 核磁共振
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Presentation matters: Identity of gold nanocluster capping agent governs intracellular uptake and cell metabolism 被引量:3
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作者 Chor Yong Tay Yong Yu +2 位作者 Magdiel Inggrid Setyawati Jianping Xie David Tai Leong 《Nano Research》 SCIE EI CAS CSCD 2014年第6期805-815,共11页
Au nanoclusters (AuNCs) hold tremendous potential to be employed in a wide variety of biological applications. Despite the rapid development in the field of NCs synthesis, a comprehensive understanding of how cells ... Au nanoclusters (AuNCs) hold tremendous potential to be employed in a wide variety of biological applications. Despite the rapid development in the field of NCs synthesis, a comprehensive understanding of how cells interact with this class of ultra-small nanoparticles (〈2 nm) having defined sizes and surface chemistry, remains poorly understood. In this study, we show that the choice of the surface ligand used to protect AuNCs can significantly perturb cellular uptake and intracellular redox signaling. A panel of monodisperse, atomically precise AuNCs with different core Au atom number (i.e., Auls, Au18 and Au25) protected with either mercaptopropionic acid (MPA) or glutathione (GSH) capping agent were synthesized and their effects on the generation of intracellular reactive oxygen species (ROS), cytotoxicity and genotoxicity of the NCs were assessed. Both mitochondrial superoxide anion (O2^-) and cytoplasmic ROS were found to be higher in cells exposed to MPA but not GSH capped AuNCs. The unregulated state of intracellular ROS is correlated to the amount of internalized AuNCs. Interestingly, MPA-AuNCs induction of ROS level did not lead to any detrimental cellular effects such as cell death or DNA damage. Instead, it was observed that the increase in redox status corresponded to higher cellular metabolism and proliferative capacity. Our study illustrates that surface chemistry of AuNCs plays a pivotal role in affecting the biological outcomes and the new insights gained will be useful to form the basis of defining specific design rules to enable rational engineering of ultra-small complex nanostructures for biological applications. 展开更多
关键词 NANOTECHNOLOGY NANOBIOLOGY gold nanoclusters reactive oxygen species surface chemistry
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