胞内精子注射法制备转基因爪蟾的研究

目的研究爪蟾胞内精子注射法(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)转基因技术的可行性。方法取成熟雄蛙的睾丸分离纯化精子,用毛地黄皂甙(digitonin)崩解精细胞膜并制备精子浓缩液,然后与线性化报告基因载体pCMV-EGFP-N1共处理,最后将处理后的精子注射入从雌性爪蟾体内取出的未受精卵中,培养并观察。结果制备的精子质量较高,稀释的精子注射入未受精卵后,卵的受精率为10%,受精卵活过神经胚的比率为20%,但都略微有点畸形。其中,绿色荧光报告基因EGFP的整合率为81%,但镜下未见绿色荧光蛋白的表达。结论ICSI法是制备转基因爪蟾的简便可行的新途径。