血链球菌胞内蛋白与胞外蛋白对中间普氏菌与牙龈卟啉单胞菌生物膜作用的研究

目的:提取血链球菌胞内蛋白与胞外蛋白,研究两者对中间普氏菌(P.i)与牙龈卟啉单胞菌(P.g)生物膜的作用。方法:通过低温超速离心,有机溶剂萃取法提取血链球菌胞外蛋白;通过超声破碎,硫酸铵盐析,SephadexG-25除盐及透析的方法提取血链球菌胞内蛋白。观察血链球菌胞内蛋白与胞外蛋白对P.i及P.g的作用。观察血链球菌胞内蛋白与胞外蛋白对P.i及P.g混合培养形成的生物膜作用。结果:血链球菌胞内蛋白对混合培养的P.i与P.g的生长有明显抑制作用,其最小抑菌浓度为0.125g/L;血链球菌胞外蛋白对P.i与P.g未见抑菌作用。P.i与P.g混合培养形成的生物膜在血链球菌胞内蛋白作用后,生物膜活性降低,与对照组相比具有显著差异(P<0.05);但在血链球菌胞外蛋白作用后,生物膜活性与对照组相比差异不具有统计学意义。结论:血链球菌胞内蛋白对P.i和P.g及两者混合培养形成的生物膜具有明显抑制作用;而血链球菌胞外蛋白对P.i和P.g及两者混合培养形成的生物膜无抑制作用。

血链球菌胞内蛋白及膜蛋白分别对热带念珠菌生物膜作用的研究

目的:提取血链球菌标准株ATCC10556的胞内蛋白及膜蛋白,研究血链球菌胞内蛋白及血链球菌膜蛋白对热带念珠菌生物膜的生物学作用。方法:参照Fujimura[1]方法分离血链球菌胞内蛋白有效成分,使之作用于热带念珠菌生物膜,并以激光共聚焦显微镜观察热带念珠菌生物膜厚度的变化。参照碳酸钠梯度离心法[2]提取膜蛋白,观察其对热带念珠菌及其生物膜是否具有抑制作用。结果:在胞内蛋白作用下,24h内热带念珠菌生物膜厚度明显变薄与阴性对照组相比有显著差异,并且12h效果最为显著(P<0.05)。膜蛋白作用下的热带念珠菌生物膜厚度与阴性对照组相比未见明显差异。结论:血链球菌胞内蛋白对热带念珠菌生物膜具有显著的抑制作用。血链球菌膜蛋白对热带念珠菌及其生物膜无抑制作用。

神经突触前膜胞内蛋白(Munc-18)抗体慢性点燃致痫大鼠及其机制

目的 研究抗脑抗体———神经突触前膜胞内蛋白 (Munc 18)抗体是否能慢性点燃致痫大鼠以及其致痫的机制。方法 在SD大鼠的海马CA1区注射Munc 18抗体 ,隔天注射一次 ,5次之后每隔两周注射一次 ,共 10周。期间监测大鼠的脑电图 (EEG)和痫样行为。 10周后取脑切片作HE、尼氏和TUNEL染色。 结果 实验组12只大鼠中 ,有 10只有痫样EEG(83% ) ,5只 (5 0 % )在 6周之后仍有保留 ;9只有 14级痫样行为 (75 % ) ,6周以后为 4例 (4 4% ) ;染色发现在海马区有胶质细胞增生 ,神经元细胞数量减少且形态异常 ,凋亡细胞数量明显增多。与对照组相比均有显著差异 (P <0 .0 1或P <0 .0 5 )。 结论 Munc 18抗体能慢性点燃致痫大鼠 ,其机制可能与海马区神经元细胞的凋亡有关 ,但还需进一步的研究证实。

人类胞内蛋白半衰期与其亚细胞定位的相关性研究

胞内蛋白的稳定性直接影响着生命活动与细胞周期。蛋白的选择性降解是通过泛素-蛋白酶体途径实现的,它是蛋白消亡的主要方式之一,同时也是细胞主动调节自身状态的体现。蛋白的稳定性除了与自身序列和结构相关外,还和成熟蛋白所处的细胞内环境,即蛋白的亚细胞定位有关。本文主要从蛋白质在细胞中的区域化分布角度研究其与蛋白寿命的关系。结合大量的蛋白半衰期实验数据以及生物信息数据库,文章统计并分析了每个蛋白的定位信息,并进一步研究了与定位有关的信号肽情况,以及应用F检验筛选出了部分能够显著区分长短寿命蛋白的N端序列特征。结果表明胞内蛋白半衰期与其亚细胞定位之间存在一定的关联性。短寿命蛋白往往定位于细胞膜或者膜性囊泡结构上,大多由信号肽引导定位,作为细胞的分泌蛋白、信号转导蛋白或者功能性蛋白发挥作用并迅速降解;而长寿命蛋白多数属于持家蛋白,定位于细胞胞浆中或直接在胞浆中合成,作为细胞骨架或者发挥着支撑细胞的作用。另外,蛋白的区域化分布影响着蛋白质的折叠、聚合以及翻译后修饰,这些过程与蛋白的稳定性有着密切的联系。本研究为将来蛋白稳定性的深入研究提供了新的思路,同时也为生物信息学中开发蛋白质稳定性相关的预测工具提供了参考。

昆虫病原线虫共生菌胞内外蛋白的提取及杀虫活性比较

通过超声波破碎、硫酸铵盐析等方法从10株昆虫病原线虫共生菌的发酵液中分离出各菌株的胞内和胞外蛋白,测定各蛋白样品含量及其对棉铃虫初孵幼虫的生长抑制毒性,并用Native-PAGE和SDS-PAGE对各粗蛋白组分进行初步分析。结果表明有7个菌株的胞内和胞外蛋白对棉铃虫初孵幼虫生长均显示出不同程度的抑制生长活性。其中以嗜线虫致病杆菌3个菌株CB6、All和Bw活性最强,其胞内蛋白的活性分别达97.1%、97.9%、97.2%,胞外蛋白分别达95.8%9、6.3%、88.6%。不同菌株胞内胞外蛋白产量各不相同。电泳图谱表明,不同菌株间及同一菌株胞内胞外蛋白有差异,但近缘菌株相似。

神经突触前膜胞内蛋白抗体致大鼠癫癎的机制

目的 研究神经突触前膜胞内蛋白(Munc18)抗体致痫大鼠的机制。方法60只SD大鼠分为4组，在实验组大鼠的海马CA1区间断注射Munc18抗体，共9次。监测大鼠的脑电图和痫样行为。10周后全部大鼠处死取脑，切片做HE、尼氏和TUNEL染色后观察。结果 实验组12只大鼠中，10只出现异常脑电，5只在6周之后仍然存在；9只出现1-4级不等的痫样行为，6周后仍有4只存在痫样行为；大鼠脑片显示海马区神经细胞数量明显减少(155±20，P<0．01)，而凋亡细胞数量明显增多(16．80±3．32，P<0．01)，伴有胶质细胞增生及细胞形态异常。结论 Munc18抗体能慢性点燃致痫大鼠，其机制可能与其诱导整个海马区神经细胞的凋亡和丢失有关。

白叶枯病菌胞内蛋白的提取及电泳分离方法的构建

水稻白叶枯病菌已成为研究植物-病原物互作模式的病菌。要利用蛋白质组学方法深入研究其生物学特性和致病机理,人们面临着其胞内蛋白提取和有效分离方法尚未建立的问题。本文采用TCA丙酮沉淀法和裂解液沉淀法提取白叶枯病菌胞内蛋白,利用两种等点聚焦程序(IEFⅠ,IEFⅡ)进行一向等电聚焦,用三种蛋白上样浓度(400μg,600μg,800μg)进行双向电泳,G-250烤染后,通过Imagemaster软件对双向电泳图谱进行比较分析。结果表明,裂解液沉淀法、等电聚焦程序Ⅱ(IEFⅡ)、600μg上样浓度三者相结合的方法是提取和分离白叶枯病菌胞内蛋白的理想方法,能获得较好的实验效果。该方法的建立为白叶枯病菌蛋白质组学研究奠定基础。

协助细胞“自杀”的蛋白

美国耶什华大学爱因斯坦医学院的科学家们在研究中发现，一种小型胞内蛋白可以协助细胞“自杀”，这发现很可能为癌症等疾病提供新的治疗方式。自然衰老或外界压力等因素均会导致细胞的程序化死亡，又称“凋亡”。

Munc18抗体致痫机制的体外实验研究:诱导海马神经细胞的损伤

目的前期研究发现将突触前膜胞内蛋白(Munc18)抗体注射到大鼠的海马,大鼠呈痫样发作,故研究此抗体对海马神经细胞的损伤作用。方法取SD新生鼠海马组织,以此培养的原代海马神经细胞作为靶细胞。抗体在不同的作用时间(20h和40h)和稀释倍数下,通过细胞存活率和乳酸脱氢酶(LDH)释放量来测定抗体对神经细胞的毒性;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)测定神经细胞的凋亡。结果Munc18抗体对神经细胞具有细胞毒性和促凋亡作用,并与抗体的滴度和作用时间呈剂量依赖性。即使在抗体低滴度的情况下(×1000和×2000),Munc18抗体仍可诱导凋亡,且与对照组比较有显著性差异(P<0.01或P<0.05)。结论Munc18抗体的致痫机制与其诱导神经细胞的损伤作用(可能主要是经凋亡途径)有关。

三种植物源增殖性底物对嗜酸乳杆菌发酵及蛋白表达的影响

为探究植物源增殖性底物对嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus CICC6005)生物量的影响,并在此基础上重点解析发酵菌体蛋白质表达水平上的变化,本研究通过采用正交优化方法,在TJA培养基中添加各种增殖性底物确定其生物量的水平,利用SDS-PAGE凝胶电泳技术对胞内胞外蛋白质进行纯化鉴定。结果显示,三种植物源增殖性底物最优浓度分别为番茄汁5%、土豆汁3%、苹果汁2%,发酵液活菌数达2.31×10^(10) CFU/mL;由R值分析得出,影响L.acidophilus CICC6005菌株生长的各因素的主次顺序为:番茄汁、土豆汁和苹果汁。发酵液中表达全蛋白质的图谱显示,L.acidophilus CICC6005菌株在该营养条件下表达蛋白的数量有明显的增加,并根据标准曲线得出各峰的蛋白分子量大小,即胞内蛋白的分子量为59、17 ku;胞外蛋白的分子量为66、35 ku,其表达量分别为2.144、0.744、2.394、4.644 mg/mL。综上,在TJA基础培养基上,适宜浓度的植物源增殖性底物对L.acidophilus CICC6005菌株的增殖以及蛋白质的表达水平均起到了一定的促进作用,同时纯化鉴定出该菌表达的两种主要蛋白质,对进一步其益生功能具有科学和实践意义。

短乳杆菌49蛋白提取及酶解条件优化

为了最大程度上获取短乳杆菌49(Lactobacillus brevis 49)的蛋白质信息,分别优化了蛋白质的提取条件与酶解条件。用正交实验法考察细胞破碎方法、蛋白酶种类、酶解时间、酶添加量4个因素对L.brevis 49的胞内蛋白提取方法以及酶解方法的影响,以质谱中检测到的蛋白质数目为参考指标进行优化;同时对培养基氮源进行优化,并分别选用TCA沉淀法、冷丙酮沉淀法、平衡酚-丙酮法和超滤法提取发酵液中的胞外蛋白。结果表明:L.brevis 49胞内蛋白最佳的提取破壁方法为超声破碎法,最佳水解酶为糜蛋白酶和胰蛋白酶共同作用,最佳的酶与蛋白质量比为1∶50,最佳酶解时间为12 h,获得胞内蛋白数目527个。获得L.brevis 49胞外蛋白的最佳培养基为0.6%酵母浸粉做单一氮源的MRS培养基,最佳提取方法为三氯乙酸(TCA)法,可获得44个含信号肽蛋白。该方法有望为啤酒的安全检测提供参考。

非NMDA受体的细胞内调控及其机制

非NMDA受体是AMPA受体和KA受体的统称,其亚基上的胞内C末端上有很多磷酸化脱磷酸化及胞内蛋白的结合位点,这些作用位点与非NMDA受体的调控密切相关。如PKA、PKC、PKG、CaMKⅡ和PTK等蛋白激酶均可调节受体的活性。另外,胞内的一些骨架蛋白和信号蛋白也可与非NMDA受体结合而影响其功能。本文着重综述非NMDA受体的细胞内调控及其机制。

杜仲水提液对嗜酸乳杆菌生长及发酵产物的影响

制备5种不同质量浓度的杜仲水提液添加到MRS培养基中对嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)CICC6005进行培养,旨在探究不同质量浓度的杜仲水提液对L.acidophilus CICC6005增殖情况及对发酵过程中胞外和胞内蛋白含量变化的影响,并对其蛋白组分进行分析。发酵所得胞外和胞内蛋白分别用三氯乙酸-丙酮沉淀法和试剂盒法获得,采用Sephadex G-100凝胶层析分离技术对胞外和胞内蛋白分离纯化,用二喹啉甲酸法和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分别测得各组分蛋白的含量及分子质量。结果显示:当培养基中添加的杜仲水提液质量浓度为0.125 0 g/m L时,对菌体增殖有明显的促进作用,菌体生物量最大(4.38×108 CFU/m L),同时在此质量浓度时菌体胞外和胞内蛋白含量也达到最大值;胞外和胞内蛋白经过Sephadex G-100凝胶层析分离后均得到2个明显的蛋白峰,胞外蛋白两组分分子质量分别为67、31 ku,胞内蛋白两组分分子质量分别为57、17 ku。综上,添加适宜质量浓度的杜仲水提液对L.acidophilus CICC6005的增殖起到了一定的促进作用,并对其发酵产物组成产生了一定的影响。

不同木质底物诱导下桦剥管菌细胞内差异蛋白质分析

【目的】研究桦剥管菌在不同木质底物诱导下细胞内蛋白的差异表达情况,探讨桦剥管菌降解木材机理。【方法】以白桦、云杉木屑为诱导底物,利用蛋白质组双向电泳技术(2-DE)结合质谱技术(MALDI-TOF/TOF MS),检测桦剥管菌在不同树种木屑诱导下与对照组(未加木屑)相比菌体胞内蛋白质变化情况,对差异蛋白进行生物信息学分析。【结果】在白桦和云杉木屑诱导下,桦剥管菌细胞内蛋白表达发生了明显变化,处理组(添加木屑)共检测到32个细胞内差异表达蛋白点,经质谱检测及数据库检索,成功鉴定17个差异蛋白点,这些蛋白具有转移酶、水解酶、蛋白结合、细胞信号转导等分子功能,涉及分解代谢、有机物质代谢、氮化合物代谢、初级代谢、细胞生物合成和刺激响应过程。【结论】桦剥管菌降解木材是多种蛋白质共同作用的结果,通过调节多种代谢过程中的相关蛋白表达来发挥作用。

Munc13-1、Munc18-1对锰染毒SH-SY5Y细胞中多巴胺分泌障碍的影响

[背景]慢性锰中毒诱发神经递质分泌障碍一直是其造成机体损伤的重要原因之一,但锰致神经递质分泌障碍的机制目前并不清楚。[目的]探究突触前膜胞内蛋白13-1(Munc13-1)与突触融合蛋白结合蛋白18-1(Munc18-1)对氯化锰(MnCl_(2))致人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)多巴胺(DA)分泌障碍的影响。[方法]建立MnCl_(2)诱导SH-SY5Y细胞模型,根据MTT法测细胞存活率,实验分组为对照组和低、中、高浓度染锰组(0、100、200、400μmol·L^(−1)MnCl_(2)),处理24 h。用酶联免疫吸附试验试剂盒测定培养基中DA分泌量。通过实时荧光定量PCR检测细胞突触融合蛋白-1(Syntaxin-1)mRNA表达水平。提取细胞总蛋白,采用Western blotting检测Munc13-1、Munc18-1以及Syntaxin-1蛋白表达水平。并对MnCl_(2)染毒浓度和DA分泌量与Munc13-1、Munc18-1蛋白表达量之间做Pearson相关性分析。[结果]与对照组比较,随着锰染毒浓度的增加,细胞存活率逐渐下降,中、高浓度染锰组差异具有统计学意义(P<0.05);各锰染毒组细胞培养液中DA浓度随锰浓度增加呈下降趋势,与对照组和低浓度染锰组比,中、高浓度染锰组差异具有统计学意义(P<0.05);Syntaxin-1的表达量在mRNA和蛋白层次上,在各组间变化不明显,差异不具有统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,Munc13-1的蛋白表达量随染锰浓度增加而依次下降,Munc18-1的蛋白表达量依次上升(P<0.05),其中与低浓度染锰组相比,高浓度染锰组Munc13-1和中、高浓度染锰组Munc18-1蛋白变化有统计学意义(P<0.05),与中浓度染锰组比,高浓度染锰组Munc18-1蛋白变化有统计学意义(P<0.05)。相关性分析显示,MnCl_(2)染毒浓度与Munc13-1蛋白表达呈负相关(r=-0.898,P<0.05),与Munc18-1蛋白表达呈正相关(r=0.678,P<0.05);DA浓度与Munc13-1蛋白表达呈正相关(r=0.932,P<0.05),与Munc18-1蛋白表达呈负相关(r=-0.817,P<0.05)。[结论]锰染毒SH-SY5Y细胞致DA的分泌抑制,与其上调Munc18-1和下调Munc13-1蛋白的表达水平有关,这可能是锰致神经损伤的原因之一。

他克莫司缓释剂Envarsus XR预防肾移植的器官排斥反应

Envarsus XR是一种他克莫司（tacrolimus）缓释制剂,属于钙调磷酸酶抑制剂的免疫抑制剂。与其他免疫抑制剂联合用药,专用于肾移植患者预防器官排斥反应。他克莫司与细胞内蛋白FKBP-12结合,后者与钙调神经磷酸酶形成复合物,从而抑制钙调神经磷酸酶活性,并抑制被激活的T细胞（NF-AT）内核因子和活性B细胞（NF-KB）核因子-K轻链增强子的磷酸化和转位。

糖尿病药可治疗结肠癌

一项新的研究证明:一种广泛应用的糖尿病药物troglitazone有希望成为新的治疗结肠癌的方法。但是一些科学家也担心这种药可能激发遗传学易感者的癌症。波士顿Dana-Farber癌症研究所的Bruce M.Spiegelman报告。