河南省胞内分枝杆菌临床分离株耐药特征及基因分型

目的:分析河南省胞内分枝杆菌临床分离株的耐药及基因分型。方法:收集68株2019年河南省部分地市结核病专科医院痰标本分离的胞内分枝杆菌,采用微孔板法测定其对16种药物的敏感性,用16位点VNTR方法进行基因分型,并用BioNumerics软件对分型数据进行聚类分析。结果:68株对克拉霉素、利福布汀和甲氧苄啶/磺胺甲恶唑的耐药率分别为11.76%(8/68)、5.88%(4/68)、8.82%(6/68)。克拉霉素、利福布汀和甲氧苄啶/磺胺甲恶唑的抑制50%胞内分枝杆菌的最低抑菌浓度(MIC 50)和MIC 90分别为2和32 mg/L、0.5和2 mg/L以及0.25/4.75和2/38 mg/L。16位点VNTR将68株分为45个基因型,包括来自11个簇的34株和34个独特模式的分离株,Hunter-Gaston分辨力指数为0.978。成簇菌株利奈唑胺和阿米卡星耐药率高于非成簇菌株(58.82%vs 23.53%;44.12%vs 14.71%)(P<0.05)。结论:克拉霉素、利福布汀和甲氧苄啶/磺胺甲恶唑等对河南省胞内分枝杆菌临床分离株具有较好的抗菌活性。VNTR分型方法对胞内分枝杆菌具有较好的分型能力。成簇菌株中利奈唑胺和阿米卡星的耐药率高于非成簇菌株。

江苏省2016—2021年临床分离铜绿假单胞菌耐药及基因组特征分析

目的了解江苏地区临床分离的铜绿假单胞菌耐药情况及基因特征。方法收集2016—2021年江苏地区各哨点医院临床分离的铜绿假单胞菌,采用肉汤稀释法对分离株进行10类19种抗菌药物的敏感性测定,对分离株行全基因组测序并多位点序列分型,综合抗菌药物耐药性数据库(CARD)扫描分析耐药基因。结果2016—2021年通过致病菌识别网12个市的哨点医院收集患者分离的铜绿假单胞菌101株。药敏试验结果显示,全部菌株对共计6类8种抗菌药物全部耐药,包括酰胺醇类抗生素氯霉素、磺胺类的复方磺胺甲口恶唑、头孢菌素类的头孢噻肟和头孢唑林、四环素类的四环素、青霉素类的氨苄西林及氨苄西林/舒巴坦以及β-内酰胺类的阿莫西林/克拉维酸;45.54%的分离株为碳青霉烯类耐药菌株,对亚胺培南、美罗培南两种碳青霉烯类抗生素的耐药率已分别达45.54%、39.60%;耐10种以上抗生素的菌株达63.36%;共发现35种耐药表型,其中1株菌对19种抗菌药物广泛耐药,耐药谱为AMC-AM-SAM-CZ-CTX-C-TE-SXT的菌株最多(31.69%,32株)。多位点序列分析发现75个ST型,聚类发现ST 262处于中心点,并遗传进化出11个亚型或分支。全基因组扫描发现6类18种抗菌药物耐药基因,crp P基因的携带情况与表型完全一致。结论2016—2021年江苏地区临床分离的铜绿假单胞菌耐药情况严重,两种碳青霉烯类抗生素的耐药率、耐10种以上抗生素的菌株比例高于国内其他省份,应引起高度重视。

携带bla_(VIM-2)耐药基因的恶臭假单胞菌致皮肤感染一例并文献复习

恶臭假单胞菌能够引起多种鱼类的败血性感染,但对人的致病性一直被忽视。本研究从一例63岁男性患者左下肢皮肤伤口中分离到一株优势细菌,经生化鉴定和16S RNA测序分析确认为恶臭假单胞菌。进一步对其进行药敏试验,发现该菌株对氨苄西林、多种头孢类抗生素、碳青霉烯类抗生素、复方新诺明耐药,耐药基因检测发现该分离株携带抗碳青霉烯类bla_(VIM-2)耐药基因。根据药敏试验结果选用头孢他啶注射液2 g,每日两次,疗程14天,外用夫西地酸乳膏,每日2次,2个月后患者皮损完全愈合。

铜绿假单胞菌“泛耐株”耐药相关基因研究

目的研究"泛耐"铜绿假单胞菌中多种耐药基因的存在情况及耐药机制。方法采用聚合酶链反应(PCR)法检测22株"泛耐"铜绿假单胞菌的β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类修饰酶(AMEs)基因、喹诺酮类耐药基因、耐消毒剂基因(qacE△1-sul1)和整合酶基因。结果PCR扩增结果显示22株菌中oprD2、blaCARB、gyrA、aac(6')-Ⅰb、ant(2″)-Ⅰ和qacE△1-sul1基因均阳性;blaSHV、blaSPM、blaGIM、blaDHA、blaOXA-10、blaGES、blaPER、aac(3')-Ⅰ和aac(6')-Ⅱ基因均阴性;blaIMP、blaTEM、blaVEB、aac(3')-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、intⅠ1和blaVIM阳性率分别为95.5%、77.3%、13.6%、4.5%、4.5%、4.5%和4.5%。结论oprD2基因阳性说明这些泛耐菌株中外膜蛋白并未缺失,多种耐药基因同时存在是本研究中铜绿假单胞菌"泛耐"的根本原因。

多重耐药铜绿假单胞菌耐药基因及亲缘性分析

目的了解解放军第98医院临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌(MRPA)中抗菌药物相关耐药基因存在状况及菌株亲缘性。方法在2003年9月-2004年10月间从临床分离30株MRPA,采用PCR及序列分析的方法分析24种基因blaTEM、blaSHV、blaOXA-10群、blaPER、blaVEB、blaIMP、blaVIM、blaGES、blaCARB、blaDHA、blaMIR、aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(3)-Ⅲ、aac(3)-Ⅳ、aac(6′)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ、aph(3′)-Ⅵ、oprD、qacE△1-sul1、catB、cml1,采用Average法进行耐药基因聚类分析以确定菌株亲缘性。结果30株MRPA中blaTEM、blaOXA-10群、blaCARB、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ、qacE△1-sul1和cml1基因的阳性率分别为66.7%、3.3%、3.3%、76.7%、3.3%、33.3%、53.3%、26.7%、83.3%和3.3%,blaOXA-10群基因经序列分析确认为blaOXA-10型ESBLs,27株(90.0%)发生oprD基因缺失突变;其他基因均阴性;根据耐药基因聚类分析该30株MRPA可分4群,为医院感染所致。结论临床分离的MRPA中至少存在10种耐药基因,oprD基因缺失突变率很高,MRPA可导致克隆传播医院感染,并存在暴发性流行。

铜绿假单胞菌耐药基因的分子流行病学研究

目的了解不同地区临床分离铜绿假单胞菌耐药基因的流行现状。方法对临床分离的104株铜绿假单胞菌采用ATB细菌鉴定仪鉴定菌种和K—B法测定抗菌药物的敏感性，利用聚合酶链反应（PCR）检测耐药基因（16种）和多分子标志法聚类分析菌株的亲缘性。结果3个地区铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药率依次为51．3％、80．0％和100．0％，对第三代头孢菌素的耐药率为48．2％～100．0％，耐药基因oprD2缺失率为90％～100％；多重耐药基因标志的菌株显示存在克隆传播现象，但绍兴地区流行耐药株以oprD2的缺失为主，湖州地区则以TEM、oprD2缺失、aac（3）-Ⅱ、ant（3”）-Ⅰ、qacEΔ1为主。结论3个地区临床分离的铜绿假单胞菌呈多重耐药，并由克隆传播导致医院感染，但耐药的机制并不相同。

多重耐药性铜绿假单胞菌耐药基因及菌株聚类分析

目的了解临床分离的铜绿假单胞菌中β-内酰胺类、氨基糖苷类等抗菌药物耐药相关基因存在状况和菌株的亲缘性。方法药敏试验用PhoenixTM-100鉴定药敏系统检测,β-内酰胺类抗菌药物耐药相关基因、氨基糖苷类抗菌药物修饰酶基因和消毒剂抗性基因,采用PCR检测并用DNA测序仪证实。结果190株铜绿假单胞菌对氨苄西林/舒巴坦、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、头孢噻肟、头孢他啶、头孢吡肟、亚胺培南、美罗培南的耐药率分别为98.9%、59.5%、45.8%、77.4%、34.2%、38.4%、15.3%、6.8%;对环丙沙星、左氧氟沙星耐药率为15.3%、21.0%;21株铜绿假单胞菌中blaVEB、blaGES和blaCARB阳性率分别为9.5%、9.5%和57.1%,oprD2基因缺失率达95.2%;TEM、SHV、OXA、PERI、MP、VIM、SPM、GIM和DHA编码基因均阴性;aac(6′)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅱ和ant(2″)-Ⅰ,在21株铜绿假单胞菌中的阳性率分别为9.5%、61.9%和66.7%,qacE△1-sul1基因的阳性率为66.7%。结论临床分离的铜绿假单胞菌已携带多种耐药基因,oprD2基因缺失可能是铜绿假单胞菌耐受亚胺培南重要原因,聚类分析表明存在克隆传播医院感染。

广州地区多重耐药铜绿假单胞菌相关耐药基因的研究

目的探讨广州地区临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌相关耐药基因。方法采用纸片扩散法进行药敏试验,聚合酶链反应(PCR)对多重耐药铜绿假单胞菌进行β-内酰胺酶相关基因和氨基糖苷类修饰酶基因检测,并对耐药基因进行测序。结果38株铜绿假单胞菌对多黏菌素B耐药率是0%,对其余抗菌药物耐药率均>50%,氨基糖苷类修饰酶基因ant(2″)-Ⅰ、ant(3″)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅱ和aac(3)-Ⅱ基因阳性率分别为21.1%、39.5%、28.9%、31.6%和21.1%,未检出aac(3)-Ⅰ基因;β-内酰胺酶基因OXA-10、TEM-1、DHA-1、PER-1和IMP-1基因阳性率分别为42.1%、18.4%、10.5%、7.9%和31.6%,未检出CTX-M-9基因和VIM基因;另外OprD2基因缺失率达60.5%。结论广州地区多重耐药的铜绿假单胞菌携带多种β-内酰胺酶和氨基糖苷类修饰酶基因,应引起高度重视。

多重耐药铜绿假单胞菌产超广谱β-内酰胺酶基因研究

目的调查多重耐药铜绿假单胞菌(PAE)产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因的流行状况。方法采用琼脂稀释法对35株临床分离的PAE进行抗菌药物敏感试验,PCR方法检测7种ESBLs基因。结果35株PAETEM、OXA、PER、GES的阳性率分别为51.4%、42.8%、31.4%、22.9%,而SHV、VEB、CTX-M-1基因均阴性。结论我院临床分离PAETEM、OXA、PER、GES基因携带率高,检出GES基因为国内首次报道。

多药耐药铜绿假单胞菌对β-内酰胺类、氨基糖苷类、消毒剂耐药相关基因研究

目的了解多药耐药铜绿假单胞菌(PAE)中β-内酰胺酶、oprD2基因、氨基糖苷类修饰酶及qacE△1基因存在状况。方法铜绿假单胞菌使用VITEK仪器鉴定,琼脂稀释法行MIC药敏试验,采用聚合酶链反应(PCR)技术检测TEMI、MP、VIM、oprD2、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰa、ac(6′)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ、qacE△1。结果TEM基因检出率分别为51.4%,IMP、VIM基因未检出,oprD2基因缺失率为60.0%;aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ和ant(2″)-Ⅰ等5种氨基糖苷类修饰酶基因检出率分别为48.6%、40.0%、54.3%、45.7%、60.0%;qacE△1基因为94.3%。结论在35株多药耐药铜绿假单胞菌中,β-内酰胺酶、氨基糖苷类修饰酶基因检出率较高,耐消毒剂基因检出率很高,应该引起高度重视。

下呼吸道感染来源铜绿假单胞菌毒力基因与氟喹诺酮类药物的耐药性研究

目的检测下呼吸道感染患者分离的铜绿假单胞菌毒力基因exoS、exoU表达及与氟喹诺酮耐药性的相关性。方法收集2015年10月至2016年3月住院患者痰标本中分离的铜绿假单胞菌,以液体稀释法测定药物敏感性;PCR法扩增exoS、exoU基因。结果检出铜绿假单胞菌46株,exoS、exoU基因阳性率分别为86.96%(40/46)和69.57%(32/46),检出率最高的基因型是exoS+/exoU+(60.87%,28/46)。其中36.96%(17/46)为多重耐药菌(MDR)。氟喹诺酮不敏感(FQNS)菌株78.95%(15/19)为MDR,89.47%(17/19)表达exoU基因,明显高于氟喹诺酮敏感(FQ-S)菌株(P<0.05)。与FQ-S菌株相比,FQ-NS菌株耐药严重,对氨曲南和头孢吡肟耐药率高达70%以上,对美罗培南和亚胺培南耐药率高于50%。耐药率较低的药物有多黏菌素B(10.53%,2/19)、阿米卡星(10.53%,2/19)、头孢他啶(15.79%,3/19)和庆大霉素(21.05%,4/19)。结论下呼吸道感染铜绿假单胞菌毒力基因exoS、exoU阳性率较高,以exoS+/exoU+基因型为主。与FQ-S比较,FQ-NS菌株耐药性更为严重,exoU阳性率更高,提示临床应加强毒力基因及耐药性监测。

耐亚胺培南铜绿假单胞菌和嗜麦芽寡养单胞菌抗菌药物耐药基因研究

目的分析浙江省湖州解放军第98医院自临床分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌(IRPa)和嗜麦芽寡养单胞菌(Sm)中抗菌药物相关耐药基因存在状况。方法2003年9月至2004年10月间从临床分离28株IRPa和19株Sm,采用聚合酶链反应及序列分析的方法分析8种β-内酰胺酶基因(blaIM P、blaV IM、blaTEM、blaSHV、blaOXA、blaPER、blaVEB和blaGES)、9种氨基糖苷类修饰酶基因(AM E s基因)[aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(3)-Ⅲ、aac(3)-Ⅳ、aac(6′)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅱ、ant(3")-Ⅰ、ant(2")-Ⅰ和aph(3′)-Ⅵ]、外膜孔蛋白D 2基因(op rD)、消毒剂-磺胺耐药相关基因(qacE△1-su l1)、氯霉素乙酰转移酶基因(ca tB)、氯霉素外排蛋白基因(cm l1)。结果28株IRPa中blaTEM、blaOXA、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅱ、ant(3")-Ⅰ、ant(2")-Ⅰ和qacE△1-su l1基因的阳性株数(%)分别为20株(71.4%)、1株(3.6%)、23株(82.1%)、10株(35.7%)、15株(53.6%)、8株(28.6%)和24株(85.7%),AM E s基因总阳性率为89.3%,blaOXA基因经序列分析确认为blaOXA-10型超广谱β-内酰胺酶,25株(89.3%)发生op rD基因缺失突变。19株Sm中aac(6′)-Ⅱ、ant(2")-Ⅰ及qacE△1-su l1基因的阳性株数(%)均为2株(10.5%);其余基因均阴性。结论临床分离的IRPa中存在blaTEM、blaOXA-10、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅱ、ant(3")-Ⅰ、ant(2")-Ⅰ和qacE△1-su l1基因,op rD基因缺失突变率很高。Sm中存在aac(6′)-Ⅱ、ant(2")-Ⅰ及qacE△1-su l1基因。

多药耐药铜绿假单胞菌耐药性及相关耐药基因分析

目的探讨临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌耐药性及相关耐药基因。方法采用纸片扩散法进行药敏试验,VITEK 2全自动微生物鉴定及药敏系统对其进行重新鉴定,聚合酶链反应(PCR)扩增oprD2、金属酶基因、氨基糖苷类酶修饰基因。结果 40株铜绿假单胞菌对临床常用的抗生素:厄它培南,亚胺培南(IPM)、头孢他啶(CAZ)、美罗培南、头孢吡肟(PEP)、哌拉西林/他唑巴坦(TZP)、环丙沙星、氨曲南(ATM)、庆大霉素(GEN)、妥布霉素、阿米卡星、多粘菌素耐药率分别为100%、96.2%、92.0%、90.1%、84.8%、83.9%、83.1%、73.7%、65.1%、60.6%、58.0%、0%。PCR结果显示oprD2缺失率65.0%,整合子阳性率22.5%,发现金属酶基因IMP-1株,氨基糖苷类修饰酶基因ant3Ⅰ、aac6Ⅱ、aac6Ⅰ、ant2Ⅰ基因阳性率分别为36.0%、35.1%、26.2%,20.1%,同时携带2种或2种以上耐药基因占55.0%,携带2种以上氨基糖苷类修饰基因的有40.0%。结论多重耐药铜绿假单胞菌耐药性高,携带多种氨基糖苷类修饰酶基因,外膜孔蛋白oprD2缺失在多药耐药铜绿假单胞很常见,另外携带多种耐药基因盒的整合子的存在也是细菌耐药的常见原因,应引起高度重视。

铜绿假单胞菌β-内酰胺类抗菌药物耐药相关基因研究

目的了解临床分离的铜绿假单胞菌中β-内酰胺类抗菌药物耐药相关基因存在状况。方法自临床分离的39株铜绿假单胞菌,采用聚合酶链反应(PCR)检测耐药基因(TEM、SHV、OXA-1群、OXA-10群、PER、VEB、GES、CARB、IMP、VIM、SPM、GIM、OprD、DHA和OprD2)。结果39株PAE中TEM阳性1株(2.6%)、CARB阳性12株(30.8%)、VIM阳性9株(23.0%)、DHA阳性3株(7.7%),39株oprD2基因均为缺失(100.0%),其余基因均阴性。结论临床分离的铜绿假单胞菌VIM及CARB基因携带率高,oprD基因缺失突变是对亚胺培南耐药的重要原因,检出CARB基因为国内首次报道。

铜绿假单胞菌β-内酰胺类抗生素耐药相关基因研究

目的了解临床分离的铜绿假单胞菌中β-内酰胺类抗生素耐药相关基因的存在状况。方法自临床分离20株铜绿假单胞菌,采用聚合酶链反应(PCR)检测耐药基因(blaTEM、blaSHV、blaOXA-10、blaPER、blaVEB、blaGES、blaCARB、blaIMP、blaVIM、blaDHA、blaMOX、blaFOX和oprD2)。结果20株中blaTEM阳性20株(100%)、blaGES阳性20株(100%),5株oprD2基因缺失(25%),其余基因均阴性。结论临床分离的铜绿假单胞菌blaTEM及blaGES基因携带率高。从铜绿假单胞菌中检出blaGES基因为国内首次报道。

烧伤患者铜绿假单胞菌感染株的消毒剂-磺胺耐药基因、Ⅰ类整合酶基因研究

目的铜绿假单胞菌(PAE)感染株的消毒剂-磺胺耐药相关基因qacE△1-sul1和Ⅰ类整合酶基因(intⅠ1)存在状况。方法对分离自天津第四医院烧伤住院患者创面20株PAE菌的qacE△1-sul1i、ntⅠ1基因进行检测。结果20株PAE菌qacE△1-sul1i、ntⅠ1基因均阳性。结论PAE菌全部携带消毒剂-磺胺耐药基因、Ⅰ类整合酶基因。

国内9家医院铜绿假单胞菌消毒剂-磺胺耐药基因的研究

目的调查临床分离铜绿假单胞菌消毒剂-磺胺耐药基因qacE△1-sulI的存在情况。方法收集国内9家医院临床分离的311株铜绿假单胞菌,采用PCR法检测qacE△1-sulI基因。结果311株铜绿假单胞菌196株检出qacE△1-sulI基因,总检出率为63.0%。9家医院铜绿假单胞菌qacE△1-sulI基因检出率有较大差异。结论9家医院临床分离铜绿假单胞消毒剂-磺胺耐药基因qacE△1-sulI携带率高。

多重耐药铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因及qacEΔ1基因检测研究

目的探讨多重耐药铜绿假单胞菌(Pa)的耐药机制,为临床使用氨基糖苷类药物治疗Pa感染和消毒灭菌工作提供参考。方法采用琼脂稀释法从临床分离的Pa中筛选出35株多重耐药菌株,用PCR方法检测这些菌株中氨基糖苷类修饰酶编码基因及qacEΔ1基因存在状况。结果35株Pa中aac(3)Ⅱ、aa(6′)Ⅱ、ant(3″)Ⅰ和ant(2″)Ⅰ等5种氨基糖苷类修饰酶基因检出率分别为48.6%、40.0%、54.3%、45.7%和60.0%,绝大多数菌株携带2种或2种以上的氨基糖苷类修饰酶基因,而qacEΔ1基因检出率也达到94.3%。结论铜绿假单胞菌产生氨基糖苷修饰酶与该菌的多重耐药有密切关系,临床治疗Pa感染应参考药敏试验结果,慎选氨基糖苷类药物;同时在消毒灭菌工作中,不宜继续使用季铵盐类、双胍类等作为常用消毒剂。

耐碳青霉烯铜绿假单胞菌的耐药基因检测及分析

目的探讨我院临床分离耐碳青霉烯铜绿假单胞菌的耐药特征及β-内酰胺酶基因的携带情况和基因型分布。方法收集经VITEK-2全自动细菌鉴定及药敏分析系统鉴定的铜绿假单胞菌,筛选耐碳青霉烯菌99株,碳青霉烯敏感菌54株,分析其耐药特征;采用PCR法检测7种主要β-内酰胺酶基因(blaTEM、blaPER、blaVEB、blaSHV、blaOXA、blaVIM及blaIMP)携带情况,并分析其与耐药相关性。结果碳青霉烯耐药菌中β-内酰胺酶基因阳性检出率为24.2%(24/99),单个基因携带率由高到低分别为IMP型13.1%(13/99),OXA-10型9.1%(9/99),TEM型8.1%(8/99),PER型6.1%(6/99),SHV型1.0%(1/99),VIM型1.0%(1/99);同时携带2种基因的菌株为4.0%(4/99),同时携带3种基因的菌株为3.0%(3/99),其中2株同时携带TEM、PER和OXA-10酶基因,另1株同时携带TEM、PER和VIM基因,这些菌中PER基因携带率最高为85.6%(6/7);而碳青霉烯敏感菌均未检出耐药基因;碳青霉烯耐药菌对11种常用抗菌药物的耐药率较高,除庆大霉素45.5%(45/99)和妥布霉素38.4%(38/99)外均大于66%,与碳青酶烯敏感菌的耐药率有显著性差异(P<0.01)。结论我院耐碳青霉烯铜绿假单胞菌主要产IMP型金属酶,产酶株耐药性明显高于非产酶株。

重症监护室多重耐药铜绿假单胞菌耐药基因分型研究

目的了解ICU检出多重耐药铜绿假单胞菌(Pae)耐药基因存在情况。方法将ICU检出Pae菌株进行体外耐药监测,并对其中19株多重耐药菌株进行耐药相关基因OprD2、IMP-1、GIM、SPM、VIM、TEM、PER、DHA和VEB检测。结果 PCR结果显示OprD2基因、IMP-1基因阳性率100%;TEM基因阳性率73.7%;VEB基因阳性率10.5%;PER、DHA、GIM、SPM、VIM基因无阳性检出。结论 ICU铜绿假单胞菌中携带多种耐药基因是导致菌株出现多重耐药性的重要原因。