通过膜片钳玻璃微电极内插管进行胞内透析

本文介绍了一种膜片钳微电极内插管进行胞内透析的方法。利用通用的微电极夹持器在其抽吸负压的侧管上方钻一斜孔直通夹持器中央管腔。插入由微量移液管头拉制成的细管 (外径约 0 1mm) ,后者与Ag AgCl电极一起伸出夹持器口端。通过相连的注射器 ,可以很方便地进行电极内液置换及胞内药物透析。此法和二次钳压技术及国外介绍的微插管电极内液置换法相比 ,更加简便易行 。

非洲爪蟾卵母细胞内源性ATP激活电流I_(D2)成分的分析

在带有滤泡膜的非洲爪蟾卵母细胞标本上 ,应用双电极电压钳及胞内透析方法进行记录 ,外加 ATP所激活的内源性膜电流包括 3个成分依次为 :快内向电流 (early fast depolarizing current,ID1 ) ,慢内向电流 (lateslow depolarizing current,ID2 )和慢外向电流 (slow hygerpolarizing current,IH) .本文主要分析 ID2 成分的特性及其产生的机制 .结果如下 :(1)胞内透析 5 0 0 μmol/L GDP- β- S,5 0 min后被完全阻断 ;(2 )外液中 [Cl- ]从 10 0 mm ol/L 下降到 5 mm ol/L 时 ,在 ATP(10 0 μm ol/L)作用下 ,ID2 幅值随 [Cl- ]的下降明显增大 ;(3)外液中无 Na+时 ID2 幅值增高 (P<0 .0 5 ) .结果表明 :ID2 是由 P2 Y受体所介导 ,通过 G蛋白耦联及胞内信号转导而引起胞内 Ca2 +依赖性Cl- 外流所致 .

非洲爪蟾卵母细胞内源性ATP激活外向电流的分析

应用双电极电压钳记录及胞内透析方法对非洲爪蟾卵母细胞内源性 ATP激活外向电流进行了分析。结果表明 ,ATP电流的 H成份仍为 K+外流所致 ,而其胞内机制也有 PKC参与。

P物质对大鼠DRG神经元H^+门控电流的调制作用

目的:观察P物质(SP)对神经元H+门控电流的调制作用及其可能存在的机制。方法:采用全细胞膜片钳技术分别记录pH 4.0、pH 5.0、pH 6.0及共加H+与SP情况下,急性分离的大鼠背根神经节(DRG)神经元H+门控电流的形式。通过胞内透析技术分析SP对H+门控电流可能的调控机制。结果:H+门控电流可划分为短暂内流型(T型)、持续内向电流型(S型)、反向电流型(O型)及双相内向电流型(B型)。SP对S型和B型中持续成分的H+门控电流有明显增强作用,这种电流幅值增强达(85.53±22.93)%,约81.8%细胞的这种增强效应不能被选择性的SP受体NK1拮抗剂阻断,而非肽类的SP受体NK1拮抗剂对约75%的DRG神经元可明显阻断这种增强效应;SP对S型和B型中持续成分的H+门控电流也有明显抑制作用,抑制的幅值达(48.46±4.45)%,并且约88.9%细胞的这种抑制效应不能被SP受体NK1拮抗剂所阻断。通过胞内透析技术在细胞内液中加入GDP-β-S后不能消除SP对H+门控电流的调制作用。结论:H+门控电流有T型、S型、O型及B型4种电流类型。SP对H+门控电流有增强和抑制的双向调节作用。SP可能通过G蛋白偶联受体通路及与H+门控离子通道的某一位点直接结合来发挥对H+门控电流的双向调节调制作用。

NPA抑制大鼠DRG分离神经元ATP-激活电流

目的 本研究主要探讨多巴胺D2受体的选择性激动剂R(- ) -NPA对ATP -激活电流的调制。方法 在大鼠新鲜分离的DRG神经元标本上应用全细胞膜片钳技术 ,观察了NPA对ATP -激活电流的作用。结果 大部分受检细胞 (87.3% ,48/ 5 5 )对ATP敏感 ,10 -6～ 10 -3 mol/LATP可引起剂量依赖性呈明显去敏感的内向电流。在此45个细胞中 ,预加NPA可引起三类反应 :(1)外向电流 (6 .3% ,3/ 48) ;(2 )内向电流 (2 5 .0 % ,12 / 48)和 (3)无反应 (6 8.8% ,33/ 48)。与ATP -激活电流相比 ,NPA -激活电流幅值小 ,无明显去敏感现象。预加NPA 30～ 6 0s对ATP -激活电流的影响如下 :在 91.7% (4 4/ 48)的细胞产生抑制作用 ,其余的无明显作用 (8.3% ,4/ 48)。此种抑制作用与NPA本身是否引起或引起的是内向或外向电流无关。在浓度 10 -7～ 10 -5mol/L范围NPA对 10 -4 mol/LATP -激活电流的抑制作用依赖于NPA的浓度。胞内透析GDP - β -s上述抑制作用可完全被取消。 结论 NPA对ATP -激活电流的抑制作用可能是由于D2受体激活后经G蛋白偶联及相应胞内转导途径而使ATP受体磷酸化所致。

精氨酸加压素对大鼠背根神经节神经元GABA激活电流的增强作用（英文）

越来越多的研究表明,精氨酸加压素（arginine vasopressin,AVP）在痛觉调制中具有镇痛作用。已报道的研究专注于AVP镇痛的中枢作用机制,而本研究旨在研究AVP镇痛的的外周作用机制。应用全细胞膜片钳技术,在急性分离的大鼠背根神经节（DRG）神经元上,观察AVP对GABA激活电流（IGABA）的增强作用以及AVP对GABAA受体功能的影响。结果显示,AVP（1×10-10~1×10-5 mol/L）预处理后,IGABA增大,GABA剂量效应曲线上移,IGABA的最大值较之对照增加约49.1%;而EC50值几乎不变,表示此种加强为非竞争性的,而且AVP对GABA电流的作用可能是电压非依赖性的。AVP对IGABA的加强作用几乎完全被V1a受体的拮抗剂SR49059（3×10-6 mol/L）阻断。二次钳压技术胞内透析非水解GDP类似物GDP-β-S（5×10-4 mol/L）或PKC抑制剂GF109203X（2×10-6 mol/L）也可以阻断AVP对IGABA的加强作用。以上结果提示,AVP经由G蛋白耦联受体以及PKC信号通路上调DRG神经元GABAA受体的功能,可能是其诱导镇痛作用的基础。