用焦锑酸分子探针测定细胞内钙离子的研究

钙离子在人体生理活动中具有重要作用,近年来人们通过生化方法对其进行了广泛研究,但在超微结构水平运用焦锑分子探针技术显示细胞内钙,国内报道较少。本文介绍运用焦锑酸酸分子探针技术对细胞内的钙离子分布进行原位定位的方法,研究各种情况下钙在细胞内不同区域内的含量。材料和方法一、动物:雄性大耳白免6只,体重1.

机械牵拉对培养人视网膜色素上皮细胞内钙离子的影响

目的:观察培养人视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelial cells,RPEs)在受机械牵拉力时细胞内Ca^2+的变化。方法:将胶原包被的磁珠悬液加入培养人RPE细胞后孵育,附着磁珠的细胞放置在恒定磁场中,使用钙荧光指示剂fluo-3/AM和激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察在机械牵拉作用的前后细胞内钙离子的变化情况。结果:RPE细胞荧光着色很强,遍布整个细胞,其中细胞核比细胞质更强。机械牵拉后荧光强度显著增强,加入氯化锰后迅速降低。EGTA预处理的细胞在受力后荧光强度增加不显著,加入氯化钙后明显增强。细胞松弛素D预处理的细胞在受力后荧光强度比正常组增高2倍以上。结论:机械牵拉能显著增加钙离子内流,并且增加细胞内的钙库释放。钙离子内流可能是RPE细胞损伤前的信号。

蝙蝠葛碱拮抗缓激肽诱导人成神经细胞瘤细胞胞内钙升高的作用

目的 胞内钙离子浓度升高是Alzheimer病 (AD)显著的病理生理学变化之一 ,本研究讨论蝙蝠葛碱对缓激肽诱导人成神经细胞瘤细胞胞内钙升高的影响。方法 采用钙荧光探针Fura 2 /AM定量测试了蝙蝠葛碱 (Dau)对缓激肽诱导的人成神经细胞瘤细胞 (SH SY5Y)胞内钙升高作用的影响。结果 Dau可显著抑制缓激肽所致胞内钙离子浓度 ([Ca2 + ]i)升高 ,并存在剂量 效应关系。结论 Dau有抑制AD样 [Ca2 + ]i升高的作用 ,为AD的发病机制和防治提供了新的线索。

降钙素基因相关肽对心肌细胞缺血缺氧状态下胞内钙的影响

目的 观察降钙素基因相关肽 (CGRP)对急性分离心肌细胞在模拟缺血缺氧状态下胞内钙的影响 .方法 急性分离心肌细胞在模拟缺血缺氧状态下 ,以 Fluo- 3作为钙指示剂 ,用共聚焦显微镜测定胞内钙的变化 .结果 急性缺血缺氧时 ,心肌细胞胞内钙浓度降低 ,加入 CGRP后 ,钙浓度恢复 ;先加入 CGRP,再在缺血缺氧的条件下 ,胞内钙浓度基本保持不变 .结论

心房肌胞内钙浓度变化对心房颤动患者小电导钙激活钾通道电流的影响

目的:SK通道存在于心肌细胞上,其中SK2亚型主要表达在心房。SK2通道对胞内游离钙离子高度敏感,可快速将钙离子浓度的变化转换成细胞膜电位变化。本实验应用穿孔膜片钳技术记录人心肌细胞SK2电流,观察心房肌细胞SK2电流在窦性患者和心房颤动患者之间的差别,以及电极液中不同的钙浓度对两组细胞SK2电流的影响。方法:将接受体外循环手术的患者分为两组:心房颤动组和窦性心律组。以心房肌细胞为研究对象,用穿孔膜片钳技术记录人心肌细胞电流,观察窦性组与房颤组SK2通道电流的差异以及两组细胞SK2电流对电极液中钙敏感性的不同。结果:在全细胞穿孔膜片钳模式下,电极液中游离钙离子浓度为5×10-7mol/L时,记录到房颤组SK2通道电流明显大于窦性组,尤其是在超极化水平。膜电位在-130 mV时,窦性组与房颤组的SK2通道电流密度分别为(-2.92±0.35)pA/pF(n=6),(-6.83±0.19)pA/pF(n=3,P<0.05)。在电极液游离钙离子浓度分别为0 mol/L、5×10-7mol/L、10-6mol/L,膜电位为-130 mV时,窦性组SK2通道电流密度分别为(-1.43±0.33)pA/pF(n=7),(-2.92±0.35)pA/pF(n=6),(-10.11±2.15)pA/pF(n=8,P<0.05);房颤组SK2通道电流密度分别为(-2.17±0.40)pA/pF(n=4)(-6.83±0.19)pA/pF(n=3)(-14.47±2.89)pA/pF(n=4)(P<0.05)。结论:人心房肌细胞SK2通道具有电压不敏感、内向整流、apamin敏感的特性。电极液中钙浓度相同的情况下,房颤组的SK2电流密度明显大于窦性组,SK2通道电流对钙离子的敏感性高于窦性组,提示SK2通道钙敏感性增加可能与心房颤动的发生发展密切相关。

海马脑片LTP中胞内钙变化及硫氮卓酮的影响

本文利用脑片胞内荧光钙指示剂 F ura-3标记和场电位测定技术 ,观察了海马 CA1 区 NMDA受体依赖型长时程增强(L TP)中钙离子变化及 L型钙通道阻断剂硫氮卓酮的影响。结果发现 ,条件刺激在诱出 L TP(NMDA受体依赖型 )产生的同时 ,胞内钙荧光强度显著升高。激光共聚焦显微镜下 ,可见 CA1 区锥体细胞轮廓明显。而海马其它各区胞内钙荧光强度无显著变化。在 LTP维持期 ,胞内钙荧光强度出现显著下降。硫氮卓酮 (3 0μmol/ L)显著抑制 CA1 区 L TP诱出和胞内钙荧光强度升高。这些结果表明 ,在海马 CA1 区 NMDA受体依赖型 LTP中 ,L

辛伐他丁对大鼠肝贮脂细胞增殖周期和胞内钙浓度的影响

目的 观察辛伐他丁对大鼠肝贮脂细胞增殖周期以及胞内Ca2 + 浓度的影响。方法 采用酶灌流法分离大鼠肝贮脂细胞 ,2 0 %血清和 10ng/mLPDGF诱导培养肝贮脂细胞 ,应用流式细胞仪检测肝贮脂细胞增殖周期 ,Fura/AM荧光法测定胞内Ca2 +浓度。结果 1～ 2 0 μmoL/L辛伐他丁可阻止血清和PDGF诱导大鼠肝贮脂细胞由G1期进入S期 ,降低肝贮脂细胞S期比、PⅠ值和DNA含量 ,与对照组比较有显著性差异 (P <O .0 5 )。同时 ,1～ 2 0 μmoL/L辛伐他丁可明显降低血清和PDGF诱导培养的肝贮脂细胞胞内Ca2 + 浓度 ,不呈剂量依赖性 ,与对照组比较有显著性差异 (P <0 .0 5 )。同时加入 10mmoL/L甲羟戊酸可逆转辛伐他丁对大鼠肝贮脂细胞增殖周期以及胞内Ca2 + 浓度的影响。结论 辛伐他丁可抑制大鼠肝贮脂细胞增殖生长 ,并降低肝贮脂细胞胞内Ca2 + 浓度 。

运动对心肌胞内钙的影响

钙离子是重要的细胞内调节因子 ,参与了几乎所有细胞生理过程。运动心肌实验表明 ,心肌胞内钙离子的变化与产生心脏运动适应性有关。通过对钙的生理特性与功能、〔Ca2 + 〕浓度的测定方法及其评价、急性运动和耐力运动心肌胞内钙的影响以及停训后心肌胞内钙的变化的综合分析和比较 ,发现现有的运动与心肌胞内钙的研究结果不一 ,直接对胞浆游离钙变化的研究太少 ,且存在一些技术问题 ,心肌胞内钙的研究对于揭示运动心脏结构与机能改变的发生与退变有重要价值。而耐力训练停训后心肌肥大的退变机制的研究对于探索运动心脏的本质和运动员医务监督的实施具有理论价值和实践意义。

胞内钙的稳态调节

胞内钙的稳态调节主要有两方面:质膜钙运转调节和胞内钙库的调节。质膜钙运转包括质膜钙泵,质膜钙通道和Na^+/Ca^(2+)交换的调节作用。胞内钙库的调节受第二信使操纵,钙库有其特异的库蛋白分子参与钙的贮存、诱导释放和重新摄取过程。这两方面的协同作用精确保证了细胞溶质中自由钙离子的稳定水平。

牛主动脉内皮细胞乙酰胆碱激活蛋白介导的胞内钙离子变化

目的 研究主动脉内皮细胞乙酰胆碱激活蛋白(EPA)介导胞内钙离子变化的特征 ,并探讨培养牛主动脉内皮细胞EPA功能的变化。方法 以Fluo 3,Frua 2为荧光探针 ,采用共聚焦和荧光光度法测定内皮细胞 [Ca2 + ]i。结果 Ach能够引起体外培养 6代以内内皮细胞 [Ca2 + ]i 的增加 ;Ach激发的内皮细胞 [Ca2 + ]i 信号表现为瞬时性单次或连续 2次的钙振荡 ,具有异时性和快速耐受的特点。未观察到烟碱和其它M受体激动剂引起的 [Ca2 + ]i 变化。Ach对胞内 [Ca2 + ]i 浓度的作用以原代细胞增加最为明显 ,但随培养时间的延长 ,此效应逐渐减弱 ,至 13代后无效应。结论 血管内皮细胞乙酰胆碱激活蛋白激活能介导胞内钙离子的增高 ,经培养后EPA功能丧失。

内皮素-1对体外培养的牛眼小梁细胞内钙离子浓度的影响

目的了解内皮素-1(ET-1)对小梁细胞收缩状态调节的作用方式,以求探索新的有效而不良反应小的抗青光眼药物。方法通过组织块培养的方法获得三代牛眼小梁细胞,Fulo-3/AM负载后于激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)下动态扫描不同浓度ET-1作用后胞内荧光强度变化,得出[Ca2+]i值。结果10-9、10-8、10-7mol/L ET-1可使小梁细胞[Ca2+]i呈剂量依赖性升高,其中10-8mol/L的ET-1可使小梁细胞[Ca2+]i由327.5±24.57升高至373.60±40.18(n=8,P<0.01)。结论一定浓度的ET-1可通过收缩小梁网而致眼内压升高;其受体阻滞剂或转换酶抑制剂可能为原发性开角型青光眼的治疗开辟新途径。

针刺足阳明经穴对家兔胃窦平滑肌细胞舒缩长度及胞内钙离子浓度的影响

目的 :从细胞水平探讨足阳明经与胃相关的特异性及针刺足阳明经穴对胃平滑肌细胞胞内钙离子浓度的影响。方法 :将 4 5只家兔随机分为生理盐水组 (A)、阿托品模型组 (B)、针刺足阳明经穴组 (C)、针刺足少阳经穴组 (D)、针刺足太阳经穴组 (E)。阿托品造模处理后 ,分离胃窦平滑肌细胞 ,制成活的单个平滑肌细胞悬液 ,在显微镜下以测微尺测定细胞长度 ,以荧光分光光度计测定胞内钙离子浓度。结果 :针刺足阳明经组 (C)的细胞舒缩长度明显短于其他各组 (P <0 . 0 1) ,且胃窦平滑肌细胞胞内钙离子浓度明显高于其他各组 (P <0 . 0 1)。结论 :针刺足阳明经穴能使阿托品阻断的胃窦平滑肌细胞产生明显的收缩效应 ,进一步证实足阳明经与胃之间存在特异性的联系 ,其效应的产生与引起胃窦平滑肌细胞内钙离子释放有关。

第Ⅲ组代谢性谷氨酸受体抑制Aβ_(31～35)诱导的神经元胞内钙增高

目的观察第Ⅲ组代谢型谷氨酸受体激动剂L-SOP和(R,S)-PPG对Aβ31～35所致培养神经元胞内Ca2+浓度升高的影响。方法原代培养的大鼠额叶皮层神经元,分别加入第Ⅲ组mG luR s激动剂L-SOP或(R,S)-PPG,利用实时Ca2+荧光成像技术观察对Aβ31～35所致〔Ca2+〕i升高的影响。结果急性给予Aβ31～35可引起培养神经元的〔Ca2+〕i水平呈剂量依赖性的升高,即随着Aβ31～35浓度的增加,其〔Ca2+〕i升高的幅度逐渐增加,而潜伏期逐渐缩短;经L-SOP或(R,S)-PPG预处理后,使Aβ31～35所引起的〔Ca2+〕i的平均升高幅度降低,平均潜伏期明显延长。结论在离体培养的神经元第Ⅲ组mG luR s的激活可通过抑制Aβ31～35引起的Ca2+超载,对Aβ31-35诱导的神经毒发挥保护作用。

雌激素对正常人精子运动参数及胞内钙离子的影响

目的研究雌激素在体外对正常人精子运动参数和胞内钙离子的影响。方法用不同浓度的雌激素类物质17β-雌二醇(E_2)作用于人精子,以汁算机辅助精子分析系统(CASA)观察人精子体外运动参数的变化;用腺昔酸环化酶抑制剂预处理人精子,通过流式细胞术检测E_2、非透膜性大分子物质雌二醇-牛血清白蛋白复合物(E_2-BSA)对精子胞内Ca^(2+)浓度的影响。结果0.1μmol/L的E_2可显著提高精子前向运动百分率、平均曲线运动速度、平均直线运动速度和平均路径速度(P<0.05),10μmol/L的E_2明显降低精子的前向运动百分率、平均曲线运动速度和平均路径速度(P<0.05),0.0lμmol/L的E_2对精子的各项运动参数无显著影响;E_2(0.1μmol/L)、E_2-BSA(5μmol/L)作用后,精子胞内Ca^(2+)浓度均显著升高(P<0.05);腺苷酸环化酶抑制剂可明显抑制E_2或E_2-BSA引起的精子胞内Ca^(2+)浓度的升高(P<0.05)。结论雌激素在体外可增强正常人精子的运动力,该效应可能是通过雌激素与人精子膜上雌激素受体结合后,升高精子胞内Ca^(2+)的浓度以及激活腺苷酸环化酶而实现的。

fMLP、PMA、LTB4诱导对大鼠吞噬细胞胞内钙离子浓度的影响

目的在静息状态下,以大鼠腹腔吞噬细胞[Ca2+]i和fMLP、PMA、LTB4诱导下的吞噬细胞[Ca2+]i为指标,推测吞噬细胞对fMLP、PMA、LTB4的反应性。方法通过密度梯度离心法分离大鼠腹腔吞噬细胞,将分离得到的吞噬细胞用Fura-2/AM(终浓度为5μmol/L)负载1h,采用细胞内离子测定仪测定[Ca2+]i的动态变化。结果静息状态下,巨噬细胞内[Ca2+]i高于中性粒细胞;在不同浓度fMLP、PMA、LTB4诱导下,[Ca2+]i变化都具有浓度依赖性:经fMLP诱导后,[Ca2+]i呈一过性增高,但持续时间较长,其[Ca2+]i缓慢下降,具有时间和浓度依赖性;经PMA诱导后,[Ca2+]i增高幅度最大,持续时间最长,观察45 min后也无下降趋势;经LTB4诱导后,[Ca2+]i呈一过性增高,持续时间较短,约1 min后恢复到静息状态浓度;在高浓度fMLP诱导后,约10 min后恢复到静息状态浓度。结论 fMLP、PMA、LTB4诱导引起大鼠腹腔吞噬细胞[Ca2+]i发生依赖性增高,持续时间各不相同。

透射电镜下显示细胞内钙离子的细胞化学方法

透射电镜下显示细胞内钙离子的细胞化学方法巴恩平，罗毅，张曙光，朱光明（中国人民解放军总医院病理科电镜室，北京１００８５３）本文用改良的Ｂｏｒｇｅｒｓ草酸－焦锑酸钾细胞化学方法，显示细胞内钙离子，同时观察神经组织的超微结构改变，对研究神经组织缺氧、缺血...

雷公藤氯内酯醇对人外周血淋巴细胞内钙离子浓度的影响

雷公藤氯内酯醇(Tripcholorlide,T_4)是雷公藤有效活性成分之一,具有很强的免疫抑制及抗生育活性,其相关效价较雷公藤多甙强100～200倍。近年来,有关雷公藤免疫抑制机制的研究取得了不少进展。许多研究证实,T_4可抑制 T 淋巴细胞 IL-2、IL-1、IL-6、TNFa、rFN 等多种细胞因子 mRNA 表达与蛋白合成,并抑制淋巴细胞增生及抗体产生。但是,关于 T_4作用的细胞内机制尚不清楚。一些研究发现有丝分裂原激活 T淋巴细胞的过程有赖于胞内钙信号系统参与,因此,本研究以Fura-2荧光法观察不同浓度 T_4对 T 淋巴细胞内钙离子浓度的影响,以探讨 T_4作用的细胞内机制。

离体豚鼠前庭神经节细胞的分离及胞内钙离子活动的观察

目的进一步了解前庭神经节细胞的形态和电生理特性.方法用体重250～300g的豚鼠,断头后取出颞骨,剔除面神经和听神经,取出前庭神经节.经酶消化后用机械法分离成单细胞,用钙离子敏感的荧光染料Fura-2染色,于数字荧光显微镜下观察.结果分离出的单个前庭神经节细胞形状为园形、椭园形和不规则型,直径从20μm到30μm不等,分为有微绒毛的Ⅰ型细胞和无绒毛的Ⅱ型细胞.在体外室温22～24℃下可存活5～6h.用150 mmol/L KCl灌流1分钟,灌流开始20秒后,前庭神经节细胞胞内钙离子荧光强度比率从静止时的0.47±0.04,增至1.18±0.19,40秒后达峰值1.43±0.18,然后缓慢下降.300秒后降至峰值一半,约10分钟后基本恢复至正常,重复刺激可得到类似的结果.在无钙外环境中,150 mmol/L KCl不能诱发胞内钙离子浓度增加.1μM ionomycin可诱发不可逆的胞内钙离子浓度增加.结论本研究使用酶消化后机械分离法分离出活性良好的单个神经节细胞,前庭神经节细胞膜存在电压依赖性钙离子通道.

植物雌激素α-ZAL和17βE_2对大鼠单个心室肌细胞缩舒功能和胞内钙瞬时变化的影响

目的:比较植物雌激素α-ZAL和17βE2对大鼠心肌细胞缩舒和胞内钙瞬变的影响。方法:从成年雌性大鼠心脏分离单个心肌细胞,应用美国Ionoptix视频跟踪计算机图像分析系统在0.5Hz的电刺激下测定离体单个心肌细胞的收缩参数,其中包括最大收缩幅度(PS)、最大收缩幅度时间(TPS)、90%舒张幅度时间(TR90)和最大收缩速率(+dL/dttmax)及最大舒张速率(-dL/dttmax);同时用Fura2/AM钙荧光指示剂测定胞内钙浓度的变化。结果:10-9~10-5mol/L17βE2能使PS产生浓度依赖性的增加,最大增加35%,高浓度的17βE2对TPS有显著影响(P<0.05),能够使ΔFFI最大增加25%;而10-9~10-5mol/Lα-ZAL无论是心肌细胞缩舒功能还是胞内钙含量均无明显变化。且α-ZAL和17βE2对心室肌细胞静息状态下胞内钙浓度和胞内钙的荧光衰减率均无显著影响。结论:α-ZAL对心室肌细胞的作用与17βE2有很大不同,17βE2对心肌细胞缩舒有直接刺激作用,增强心肌收缩可能是通过胞内钙释放与胞外钙内流所介导;而α-ZAL无这种作用,它可能是通过抑制胞外钙内流和其抗氧化反应达到保护心室肌细胞的作用。