孕酮对正常生育男性精子头部胞浆内游离钙离子浓度（[Ca^2＋]i）的影响

目的：定量分析生育男性获能后单个精子的[Ca^2+]i基础水平以及10μM孕酮刺激后的[Ca^2+]i动态改变。方法：生育健康男子10例，手淫法留取精液。精液液化后，应用上游技术分离活动良好的精子，之后将精子悬液置于3‘70C培养2h使之获能。获能后精子移人Petri培养皿，每皿加入终浓度为8．85μmoL／L的钙荧光探针Fluo-3／AM，370C避光孵育40min。

2型糖尿病患者细胞内钙离子浓度变化的研究

目的:探讨型糖尿病患者血中单个核细胞内2Ca2+浓度变化及其与胰岛素受体活性变化的关系。TPK方法:荧光分光分析法测定例型糖尿病及例正常对照单个核细胞内40220Ca2+浓度,并用酶联免疫法测定单个核细胞胰岛素受体酪氨酸激酶()活性。TPK结果:型糖尿病患者单个核细胞内2Ca2+浓度显著高于正常对照组,胰岛素受体活性显著低于正常对照TPK组。相关分析显示型糖尿病患者单个核细胞内2Ca2+浓度与、显著正相关,与受体活性显著负相关。FBGFINSTPK结论:细胞内Ca2+浓度升高可能通过影响胰岛素受体活性参与胰岛素抵抗的发生。

铁离子对Caco-2细胞内钙离子转运的影响及钙离子浓度变化与细胞凋亡关系的研究

目的 研究细胞外铁离子(Fe3+)浓度变化对钙离子(Caco 2)细胞内Ca2+转运的影响及细胞内钙离子 浓度升高与Caco 2细胞凋亡的关系。 方法 采用激光共聚焦扫描显微镜和流式细胞技术进行观察与检测。 结果 (1)利用激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)观察发现,随着Caco 2细胞外Fe3+浓度的减少(DFO终浓度为100～ 300μmol L),Ca2+向细胞内的转运量增加;而随着细胞外Fe3+浓度的增加(FAC终浓度为10～100μmol L),Ca2+向细 胞内的转运呈降低趋势;(2)经A23187和Fluo 3 AM处理后Caco 2细胞的存活率较高,达90%以上(用荧光素二醋酸 酯检测);(3)A23187升高Caco 2细胞的胞内Ca2+浓度,呈剂量依赖性;经流式细胞技术(FCM)检测发现胞内Ca2+浓度 增加具有诱导Caco 2细胞凋亡的作用。 结论 Caco 2细胞外Fe3+浓度的减少有促进Ca2+向细胞内转运的作用, 但胞外Fe3+浓度增加时有抑制Ca2+向胞内转运的作用;胞内Ca2+浓度增加对Caco 2细胞凋亡具有诱导作用。

900MHz微波电磁辐射对原代培养的大鼠脑皮质神经元的谷氨酸AMPA受体2及胞内钙离子浓度的影响

目的 研究非“致热效应”强度的微波 (90 0MHz)电磁辐射对分离式原代培养的大鼠脑皮质神经元谷氨酸受体 2 (GluR2 )及胞内钙离子浓度的影响。方法 将大鼠脑皮质神经元暴露于 90 0MHz的连续性微波电磁辐射 (SAR =3 .2 2W Kkg、2 .2 3W kg、1. 15W kg) ,进行每天 2小时、连续 4天 (或 6天 )及一次性 12小时暴露(SAR =3. 2 2W kg) ,观察其对上述指标的影响。结果 免疫组织化学及激光扫描共聚焦显微镜研究显示 ,SAR =3. 2 2W kg、2 . 2 3W kg、1. 15W kg时 ,微波使暴露组神经元的GluR2表达明显下调 (P <0 . 0 1) ,同时使胞内钙离子浓度明显上调 (P <0 . 0 1)。结论 90 0MHz微波电磁辐射 (SAR =3 .2 2W kg、2. 2 3W kg、1. 15W kg)对神经元GluR2表达及胞内钙离子浓度的影响具有蓄积效应 ,且具有一定的剂量反应关系 ,一次性微波暴露的影响在一定程度上是可逆的 ,所选微波对神经元的影响属于电磁辐射的非“致热效应”。

miR-124-3p通过负调控Caveolin-1表达N2a/APPswe细胞凋亡率及细胞内钙离子浓度

目的:探讨在阿尔茨海默病(Alzheimer’s diseases,AD)细胞模型中miR-124-3p通过调控Caveolin-1的表达对细胞凋亡率及钙离子浓度的影响。方法:体外培养野生型N2a(N2a/WT)和N2a/APPswe细胞,real-time PCR及Western blot分别检测miR-124-3p与β-淀粉样蛋白前体蛋白(β-amyloid precursor protein,APP)m RNA及蛋白的表达。双荧光素酶报告实验分析miR-124-3p与Caveolin-1之间靶向调控关系。N2a/APPswe细胞瞬时转染miR-124-3p模拟物(mimics),real-time PCR、Western blot分别检测Caveolin-1 m RNA和蛋白的表达。N2a/APPswe细胞分别瞬时转染miR-124-3p模拟物(mimics)、pc DNA-Caveolin-1、Caveolin-1-si RNA,流式细胞仪分析细胞凋亡水平,测定细胞内游离钙离子浓度。结果:与WT组相比,APPswe组APP m RNA和蛋白水平表达都明显升高(分别为P=0.000,P=0.000),miR-124-3p表达明显降低(P=0.000)。双荧光素酶报告实验表明,和与突变型载体(p GL3-Caveolin-1 3’UTR MUT)共转染组相比,与野生型载体(p GL3-Caveolin-1 3’UTR WT)共转染组的相对荧光素酶活性和明显减弱(P=0.004);转染miR-124-3p mimics后,与空载体组比较,miR-124-3p mimcs转染组的Caveolin-1 m RNA和蛋白的表达明显下调(分别为P=0.000,P=0.000);分别转染miR-124-3p mimics、Caveolin-1-si RNA后,与空载体组比较,细胞凋亡率降低(分别为P=0.000,P=0.000),游离钙离子浓度降低(分别为P=0.000,P=0.000);转染pc DNA-Caveolin-1后,得到与上述相反的结果(分别为P=0.000,P=0.000)。结论:miR-124-3p可以通过靶向下调Caveolin-1的表达,抑制AD细胞凋亡,降低细胞中游离钙离子浓度,从而发挥神经保护作用,为AD的防治提供新的思路和靶点。

日循环高温对肉鸡淋巴细胞钙离子浓度、白介素-2水平及细胞周期的影响

本文旨在研究日循环高温对肉鸡淋巴细胞钙离子浓度、白介素-2(IL-2)水平、脾脏T淋巴细胞转化率以及细胞周期的影响。选择32日龄爱拔益加(AA)肉用公鸡150只,随机分为3个处理(适温组、配对组和高温组),每个处理5个重复,每个重复10只鸡。其中适温组昼夜维持恒温22℃,自由采食;配对组昼夜维持恒温22℃,按前1天高温组的采食量饲喂;高温组为27℃—35℃—27℃循环变化,自由采食;试验持续2周。结果显示,日循环高温可显著提高肉鸡的直肠温度、呼吸率和淋巴细胞内钙离子浓度(P<0.01);日循环高温处理7d时,可显著提高肉鸡血浆中皮质酮浓度和脾脏T淋巴细胞IL-2的分泌水平(P<0.05),显著降低肉鸡淋巴细胞伴刀豆球蛋白A诱导的T淋巴细胞转化率(P<0.01),日循环高温处理14d时,各组间均无显著差异(P>0.05);日循环高温处理14d时,可使处于G1期的细胞比例显著升高(P<0.05),使S期的细胞比例显著下降(P<0.01),而对G2期的细胞比例无显著影响(P>0.05)。综合试验结果,日循环高温处理可使肉鸡淋巴细胞内钙离子浓度升高,同时提高细胞IL-2分泌水平;持续日变高温可抑制肉鸡的免疫功能,表现在抑制脾脏T淋巴细胞转化率以及降低细胞从G1期进入S期的比例等方面。

用Fura-2/AM测定肺炎链球菌粘附A549细胞后胞浆游离钙离子浓度

目的 :通过体外实验 ,研究肺炎链球菌 (Streotococcus pneumoniae,S.pn)是否可触发肺 型上皮细胞 (A5 49)胞浆 [Ca2 +] i 浓度的改变。方法 :用 F ura-2 /AM荧光探针负载 A5 49细胞后测定 S.pn粘附A5 49细胞 3 0、60、90 min的胞内 [Ca2 +] i 浓度。结果 :S.pn粘附 A5 49细胞 3 0、60、90 min后的胞内 [Ca2 +] i均高于对照 [(187.4± 17.3 ) nmol/L ] ,并达到饱和 ,分别为 (4 87.5± 3 8.1)、(5 48.2± 3 5 .6)、(5 5 7.2± 47.5 )nmol/L。结论 :上述结果提示 S.pn粘附 A5 49细胞可增加胞浆内 [Ca2 +] i

Ca^(2+)浓度对红细胞吸钙—依赖性三磷酸腺苷酶活力测定的影响

总结了Ca2+浓度对孔雀绿法直接测定红细胞溶血液中钙—依赖性三磷酸腺苷酶活力的影响。实验结果表明CaCl2低于1．86mmol／L（相当Ca2+0．025mmol／L）时酶活力与Ca2+浓度遵循米—曼氏方程，Km等于0．025mmol／L（相当于Ca2+0．00033mmol／L）。当CaCl2浓度高于1．86mmol／L时，酶活力受到抑制，且随CaCl2浓度升高而下降。当CaCl2浓度高于2．95mmol／L（相当Ca2+0．0398mmol／L）酶活力迅速下降，CaCl2浓度为14．75mmol／L时酶促反应速度为零。

次声作用后大鼠心肌细胞内钙离子变化与L型钙通道、Ca^(2+)-ATP酶及Na^+-K^+-ATP酶变化的关系

目的:观察不同时间次声作用后大鼠心肌细胞钙离子变化与L型钙通道、Ca2+-ATP酶及Na+-K+-ATP酶变化的关系。方法:实验于2005-04/2006-08在解放军第四军医大学西京医院次声实验室完成。①实验分组:选择健康雄性SD大鼠32只,按随机数字表法分为4组,每组8只。次声暴露1,7,14d组(大鼠置于5Hz/130dB次声舱中,次声作用2h/次,1次/d),正常对照组(不予次声暴露)。②实验评估:测定大鼠心肌细胞内钙离子荧光强度,作为反映钙离子浓度的指标;测定L型钙通道mRNA的表达;测定Ca2+-ATP酶及Na+-K+-ATP酶活性。结果:①随着次声作用时间延长,大鼠心肌细胞钙离子浓度和L型钙通道mRNA的表达明显高于正常对照组(P<0.01)。②次声暴露1d组大鼠心肌细胞Ca2+-ATP酶及Na+-K+-ATP酶的活性显著高于正常对照组(P<0.01),次声暴露7d与14d组大鼠心肌细胞Ca2+-ATP酶及Na+-K+-ATP酶的活性显著低于正常对照组(P<0.01)。结论:5Hz/130dB次声引起大鼠心肌钙离子浓度的时间依赖性变化,这种变化可能与L型钙通道、Ca2+-ATP酶及Na+-K+-ATP酶的活性变化有关。

基于钙激活氯离子通道检测胞质内第二信使Ca^(2+)

目的建立一种基于钙激活氯离子通道(CaCC)可敏感检测胞质内第二信使Ca^(2+)的细胞模型。方法构建氯离子通道蛋白1(ANO1)和YFP-H148Q/I152 L真核表达载体,应用脂质体转染法构建共表达ANO1和YFPH148Q/I152 L的FRT细胞,倒置荧光显微镜观察其表达情况,流式细胞仪检测细胞纯度;应用膜片钳技术研究CaCC生理特性;荧光淬灭动力学实验验证细胞模型的有效性;荧光淬灭动力学实验验证细胞模型可筛选CaCC调节剂;荧光探针法检测加入CaCC激活剂后胞质内的Ca^(2+)浓度。结果倒置荧光显微镜下观察到ANO1表达在细胞膜上,YFP-H148Q/I152 L表达于胞质中;该模型具有经典的钙激活氯离子通道的生理特性;成功构建共表达ANO1和YFP-H148Q/I152 L的FRT细胞模型;该模型可筛选CaCC调节剂,荧光变化斜率值与CaCC调节剂浓度成剂量依赖关系;荧光变化斜率值可反映胞质内Ca^(2+)浓度,该模型可敏感检测胞质内Ca^(2+)浓度。结论此细胞模型可以高效敏感检测胞质内第二信使Ca^(2+)浓度,为Ca^(2+)信号相关靶点的研究提供了一种简便快捷的方法。

人参皂甙Rh2对人胶质瘤细胞内钙离子浓度的影响

目的观察人参皂甙Rh2对人胶质瘤细胞内钙离子浓度的影响。方法实验分为对照组和人参皂甙Rh2组,对照组应用常规培养基培养人胶质瘤细胞株U87MG,人参皂甙Rh2组在常规培养基中人参皂甙Rh2的浓度为20μg/m L,利用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测各组培养的人胶质瘤细胞内钙离子浓度,再利用Western blot技术检测人胶质瘤细胞Cav1.2蛋白的表达,最后利用膜片钳技术检测人胶质瘤细胞L型电压依赖型钙离子通道的功能。结果人参皂甙Rh2处理U87MG细胞后,细胞内钙离子浓度是对照组的2.5倍(P<0. 05);人参皂甙Rh2培养后胶质瘤细胞Cav1.2蛋白表达量是对照组的1.5倍(P<0. 05),且L型电压依赖性钙离子通道功能增强。结论人参皂甙Rh2可通过增加胶质瘤细胞Cav1.2表达和L型电压依赖性钙离子通道的功能促进细胞内游离钙离子浓度的增加,从而诱导人胶质瘤细胞的凋亡。

15-HETE对肺动脉平滑肌细胞钙离子浓度的影响

目的 通过阻断细胞外钙离子 (Ca2+ )内流,观察 15 羟化二十烷四烯酸 ( 15 HETE)对兔肺动脉环收缩张力和肺动脉平滑肌细胞内游离钙浓度 ( [Ca2+ ]i)的影响,探讨缺氧时 15 HETE引起细胞钙动员的机制。方法 采用组织浴槽血管环方法观察L 型钙通道阻断剂硝苯地平和无钙液对15 HETE诱导的兔肺动脉环收缩力的影响;酶法分离培养兔肺动脉平滑肌细胞,激光扫描共聚焦显微镜测定 15 HETE对细胞内 [Ca2+ ]i的作用。结果 在正常组和缺氧组, 10μmol·L-1硝苯地平和无钙液对 1μmol·L-1 15 HETE引起的肺动脉环收缩均没有影响;培养的 15 HETE组细胞 (正常培养的细胞暴露于 1 μmol·L-1 15 HETE下继续孵育 8min)与正常对照组相比,细胞内 [Ca2+ ]i明显增加 (P<0 05)。结论 15 HETE可引起肺动脉平滑肌细胞 [Ca2+ ]i增加,且此钙来源于细胞内贮钙库的释放。

灵芝多糖对小鼠T细胞胞浆游离Ca^(2+)浓度和胞内pH的影响

目的通过考察灵芝多糖（ＧＬＰ）对免疫细胞信号转导过程的影响，探讨ＧＬＰ免疫调节作用机制。方法采用激光扫描共聚焦显微镜（ＬＳＣＭ）技术，动态监测ＧＬＰ均一体组分ＧＬＢ７对小鼠Ｔ细胞胞浆游离Ｃａ２＋浓度（［Ｃａ２＋）和胞内 ｐＨ（［ｐＨ］ｉ）的影响。结果 ＧＬＢ７（２０ｍｇ·Ｌ－１）引起小鼠 Ｔ细胞中［Ｃａ２＋］；和［ｐＨ］；明显升高，１ｍｉｎ即分别升高至３３４．７０％±１６，４％（ｎ＝３）、１７１．６％ ± １０．４％（ｎ＝３），之后一直分别维持在该平台期，至 １０ ｍｉｎ仍维持高峰水平。加入ＥＣＴＡ和 ｖｅｒａｐａｍｉｌ处理后， １０ ｍｉｎ ＧＬＢ７ 引起 Ｔ细胞［Ｃａ２＋］；和［ｐＨ］；分别升高为 ２０２．４％± １３．６％（ｎ＝３）。１４０．２％±７．８％（ｎ＝３），与正常对照组比较差异有显著性（Ｐ＜０．０1）。以 ＥＧＴＡ和 ｖｅｒａｐａｍｉｌ处理后，再分别以 ｈｅｐ－ｅｒｉｎ和 ｐrocaine处理细胞 １０ ｍｉｎ，之后以 ＧＬＢ７刺激Ｔ细胞，１０ｍｉｎ［Ｃａ２＋］ｉ值分别为１５１．５％±９．４％（ｎ＝３）、１４３．２％± ８．１ ％（ ｎ＝ ３），与 ＥＧＴＡ和 ｖｅｒａｐａｍｉｌ处理组相比差异有显著性（ Ｐ＜ ０．０１）。

钙磷陶瓷表面类骨磷灰石形成的Ca^(2+)浓度阈值研究

通过对双相磷酸钙陶瓷材料表面在静态模拟体液中和动态模拟体液中的形成类骨磷灰石的钙离子浓度的阈值的测定,表明双相磷酸钙陶瓷材料表面在静态模拟体液中形成类骨磷灰石的Ca2+浓度阈值是0.2459g/L,其阈值比标准模拟体液低10%;双相磷酸钙陶瓷材料表面在模拟体液以生理流率流动时形成类骨磷灰石的Ca2+浓度阈值是0.3392g/L,其阈值比标准模拟体液高22%;动态模拟体液的Ca2+浓度阈值比静态的Ca2+浓度阈值高37.8%。

G蛋白调节剂对梨花粉萌发及花粉胞内Ca^(2+)浓度变化的影响

用激光共聚焦技术研究了异三聚体G蛋白活性调节剂对梨花粉萌发、花粉管生长及花粉细胞内游离钙离子浓度动态的影响。结果表明:异三聚体G蛋白激活剂霍乱毒素(CTX)可促进梨花粉萌发与花粉管生长,而其抑制剂百日咳毒素(PTX)则抑制花粉萌发与花粉管生长;霍乱毒素处理后,花粉细胞内产生特异性的“钙瞬变”信号,而百日咳毒素处理后则引起花粉细胞内游离钙离子浓度的持续下降。这表明:异三聚体G蛋白可能参与了梨花粉萌发与花粉管生长的调控过程,G蛋白的活性变化对花粉萌发的效应可能是通过调控花粉细胞内游离Ca2+浓度的动态变化产生特异性的钙信号来实现的。

低剂量电离辐射诱导小鼠睾丸生精细胞线粒体结构、ATPase活性及钙离子浓度的变化

目的:观察0.025~0.200 Gy X线低剂量电离辐射后3~24 h小鼠生精细胞线粒体结构、睾丸组织内ATPase和生精细胞钙离子浓度的变化,阐明线粒体结构与相关生物学功能改变在调控凋亡中的作用。方法:透射电镜检测小鼠睾丸生精细胞线粒体结构的改变;蛋白酶法检测ATPase活性的改变;以Fluo-3为探针,流式细胞术检测钙离子浓度([Ca2+]i)的变化。结果:0.075 Gy照射后12 h,小鼠精原细胞与精母细胞线粒体肿胀、空泡化、嵴断裂;精子细胞核固缩,顶体囊泡结构模糊,核膜结构不清楚,线粒体空泡化。0.025~0.200 Gy照射后12 h,睾丸组织中Na+-K+-ATPase活性较0 Gy照射降低,其中0.050~0.200 Gy较0 Gy显著降低(P<0.05),Ca2+-ATPase活性均较0 Gy照射显著降低(P<0.05);生精细胞中[Ca2+]i也具有同样的剂量-效应关系,其中0.075 Gy照射后,较0 Gy显著降低(P<0.05)。0.075 Gy照射后3~24 h,睾丸组织中Na+-K+-ATPase活性较0 h均显著降低(P<0.05);Ca2+-ATPase活性在3 h稍有升高后,6~24 h较0 h均显著降低(P<0.05);生精细胞中[Ca2+]i也具有相似的时程-效应关系。结论:低剂量电离辐射能够诱导小鼠睾丸生精细胞线粒体结构的改变;同时,其诱导ATPase活性和[Ca2+]i的变化具有剂量-效应与时程-效应规律性。

氧化性白内障中晶状体上皮细胞内Ca^(2+)浓度的变化

目的 通过测定过氧化氢诱发的白内障中晶状体上皮细胞内Ca^(2+)浓度的变化,探讨Ca^(2+)浓度的改变在氧化性白内障发生机制中的作用。方法 用过氧化氢诱发实验组离体培养的大鼠晶状体产生白内障,用Fura-2/AM荧光标记法测定晶状体上皮细胞胞浆内Ca^(2+)的浓度,并与对照组正常晶状体相比。结果 经过氧化氢作用的实验组,6、12和24h时,晶状体上皮细胞胞浆内Ca^(2+)浓度与对照组相比明显升高,差异有显著性(P=0.001,0.000,0.000)。结论 本研究证实过氧化氢作用于大鼠晶状体后,其上皮细胞内Ca^(2+)浓度明显升高,从而为Ca^(2+)依赖的蛋白水解酶如钙蛋白酶等的激活创造必要条件。

内皮素-1对体外培养的牛眼小梁细胞内钙离子浓度的影响

目的了解内皮素-1(ET-1)对小梁细胞收缩状态调节的作用方式,以求探索新的有效而不良反应小的抗青光眼药物。方法通过组织块培养的方法获得三代牛眼小梁细胞,Fulo-3/AM负载后于激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)下动态扫描不同浓度ET-1作用后胞内荧光强度变化,得出[Ca2+]i值。结果10-9、10-8、10-7mol/L ET-1可使小梁细胞[Ca2+]i呈剂量依赖性升高,其中10-8mol/L的ET-1可使小梁细胞[Ca2+]i由327.5±24.57升高至373.60±40.18(n=8,P<0.01)。结论一定浓度的ET-1可通过收缩小梁网而致眼内压升高;其受体阻滞剂或转换酶抑制剂可能为原发性开角型青光眼的治疗开辟新途径。