过表达三磷酸胞嘧啶脱氧核苷酸焦磷酸酶1促进前列腺癌细胞株LNCaP细胞周期活动

目的探讨人三磷酸胞嘧啶脱氧核苷酸(dCTP)焦磷酸酶1在前列腺癌组织和前列腺癌细胞株LNCaP中的表达,观察dCTP焦磷酸酶1的过表达对LNCaP细胞周期的影响。方法免疫组织化学法分析前列腺癌及非癌组织中dCTP焦磷酸酶1的表达量;通过Westernblot检测LNCaP的dCTP焦磷酸酶1表达量(LNCaP:1.26±0.13比RWPE-1:0.52±0.01,P=0.000)。构建dCTP焦磷酸酶1过表达的LNCaP细胞株,并通过流式细胞仪检测LNCaP细胞株细胞周期的变化(LNCaP-dCTP焦磷酸酶1过表达组:48.23±0.66比LNCaP-空载体组:30.10±1.01,P=0.022)。结果dCTP焦磷酸酶1在癌组织中表达上调[免疫组织化学评分:非癌组:(2.00±1.55)分,前列腺癌组:(4.00±1.52)分,P=0.000],dCTP焦磷酸酶1的高表达增加了LNCaP细胞的S+G2期的比例(P=0.000)。结论前列腺癌中的dCTP焦磷酸酶1表达增加,其高表达可能会促进前列腺癌细胞分裂。

正源负源比较液质联用测定酶解液中脱氧核苷酸含量

目的:建立一种快速灵敏的同时测定DNA酶解液中5′-腺嘌呤脱氧核苷酸(dAMP)、5′-胸腺嘧啶脱氧核苷酸(dT-MP)、5′-鸟嘌呤脱氧核苷酸(dGMP)、5′-胞嘧啶脱氧核苷酸(dCMP)的超高效液相色谱质谱(UPLC-MS)方法。方法:采用UPLC-MS色谱质谱系统,安捷伦ZORBAXSBAq-C18柱(4.6mm×250mm,5μm);以20mmol.L-1醋酸铵缓冲盐溶液(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱(0～10min,B相从5%→10%;10～11min,B相从10%→90%;11～15min,B相为90%;15～16min,B相从90%→5%;16～18min,B相为5%),流速0.6mL·min-1;在电喷雾正离子模式下,采用多反应监测模式(MRM)选择性监测5′-腺嘌呤脱氧核苷酸(dAMP)(m/z332.1/81.1和332.1/136.2)、5′-胸腺嘧啶脱氧核苷酸(dTMP)(m/z323.1/81.1和323.1/207.2)、5′-鸟嘌呤脱氧核苷酸(dGMP)(m/z348.1/152.1348.1/313.3)和5′-胞嘧啶脱氧核苷酸(dCMP)(m/z308.1/81.1和308.1/112.1)。结果:5′-腺嘌呤脱氧核苷酸(dAMP)、5′-胸腺嘧啶脱氧核苷酸(dTMP)、5′-鸟嘌呤脱氧核苷酸(dGMP)和5′-胞嘧啶脱氧核苷酸(dCMP)的线性范围分别为34.8～1160.0ng.mL-1(r=0.9997),32.8～820.0ng.mL-1(r=0.9997),60.0～1200.0ng.mL-1(r=0.9990),37.6～940.0ng.mL-1(r=0.9998),检出限分别为9.4,8.48,11.43,10.35ng·mL-1;定量限分别为31.35,28.28,38.10,34.50ng·mL-1;样品加标回收率为71.1%～117.2%;日内、日间精密度试验的RSD为0.94%～4.99%。结论:该方法快捷,灵敏度高,专一性强,重复性好,可用于DNA酶解液中4种脱氧核苷酸的分析。

遗传学中几组相似问题辨析

一、n次复制与第n次复制区别:n次复制共产生2n个DNA分子,新增DNA分子2n-1个;而第n次复制产生的DNA分子则是2n-1个,新增加DNA分子也是2n-1个.例1具有A个碱基对的一个DNA分子片段,含有m个腺嘌呤,该片段完成n次复制时,需游离的胞嘧啶脱氧核苷酸多少个?

TLR9与先天性免疫反应

TLR9（Toll-likereceptor9）是一种微生物病原相关分子结构模式识别受体，TLR9能够识别CpG—ODN（胞嘧啶磷酸鸟甘-寡聚脱氧核苷酸），使病原相关受体在先天性免疫细胞上表达，并激活下游炎性通路。研究表明，TLR9在先天性免疫反应中产生了重要作用，如脓毒血症、自身免疫性疾病、刀豆体球蛋白A介导肝炎性肝脏损伤、炎性泡沫细胞形成、缺血再灌注损伤等，并且与多种致病因子相关联，如肝x受体、甲酰多肽受体、线粒体DNA等。