DNA修饰碱基5-甲基胞嘧啶和8-羟基鸟嘌呤的毛细管气相色谱分析及质谱鉴定

探索了GC/FID定量分析DNA修饰碱基 5 甲基胞嘧啶和 8 羟基鸟嘌呤的实验条件 ,用GC/MS鉴定各有关成分。结果表明 ,DNA水解物中不同成分可被成功地衍生和分离 ;5 甲基胞嘧啶和 8 羟基鸟嘌呤的相对摩尔反应因子分别为 3 0和 1 3;灵敏度分别为 5 50× 1 0 9mV·s/ g和 7 59× 1 0 1 0 mV·s/ g ;检测限可分别达 36 4pg/s和 1 5 8pg/s ;整个分析流程的相对标准偏差小于 2 0 %。

羟基自由基和鸟嘌呤-胞嘧啶碱基对反应的密度泛函理论研究（英文）

为了解决年龄衰老、基因突变和癌症等问题,理解DNA的氧化损伤机理非常重要.本文利用密度泛函方法和极化连续介质模型在液相条件下研究了羟基自由基夺取鸟嘌呤-胞嘧啶(GC)碱基对上5个氢原子的反应机理.研究结果表明,所有的脱氢反应路径都是放热过程,热力学上五个脱氢反应路径形成自由基的稳定性顺序是(H2b-GC)·>(GC-H4b)·>(GC-H6)·>(GC-H5)·^(H8-GC)·,其中H2b反应路径的能量变化最大,说明该反应平衡时的转化率最高.动力学上,相对于反应复合物的局部反应能垒大小顺序是H2b<H4b<H5<H6<H8,可以看出在H2b夺取路径中能垒最小,表明了该反应能在室温下迅速完成,和实验结果一致.综合考虑热力学和动力学方面的分析,发现H2b夺取反应最容易进行,次之是H4b夺取反应,然后是H6和H5.而H8的夺取反应很难发生,和实验观察到的8位加成产物现象一致.

免疫佐剂胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸-脱氧寡核苷酸1826对小鼠白血病的免疫治疗作用

背景与目的:肿瘤疫苗作为一种肿瘤特异性主动免疫治疗的手段,在其生物学治疗中起着重要作用。本研究探讨免疫佐剂胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸-脱氧寡核苷酸(cytidine-phosphatte-guanonine oligodeoxynucleotides,CpG ODN)1826在白血病动物模型中的抗瘤作用和毒副作用。方法:建立急性淋巴细胞白血病动物模型,在不同时间用灭活的L1210细胞和免疫佐剂皮下注射给DBA/2小鼠,观察小鼠一般状况、成瘤率、而且瘤块生长情况;通过病理切片了解瘤块中心及周围浸润细胞情况。结果:与对照组比,灭活细胞加GpG ODN1826瘤苗可以降低小鼠成瘤率,而且成瘤小鼠瘤块有消退现象,瘤周单个核细胞浸润明显,瘤块内肿瘤细胞坏死明显;但生存期无明显延长。结论:应用GpG ODN1826瘤苗可以加强白血病小鼠的抗瘤作用,但非荷瘤小鼠有死亡现象,需对GpG ODN1826瘤苗进行改进或筛选其他适合临床应用的免疫佐剂。

CpG-ODN DSP30联合IL-2刺激在慢性B淋巴细胞增殖性疾病细胞遗传学检测中的临床价值

目的 探讨未甲基化胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸寡脱氧核苷酸(CpG-ODN)DSP30联合白细胞介素-2(IL-2)刺激在慢性B淋巴细胞增殖性疾病(B-CLPD)细胞遗传学检测中的应用价值。方法 选取2020年1月至2021年6月天津金域医学检验实验室的491例B-CLPD患者骨髓标本作为研究对象,将其中240例慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者作为CLL组,251例非CLL的其他B-CLPD患者作为non-CLL组。将每例骨髓标本分为2份,一份为实验组,一份为对照组,同步进行培养。实验组采用CpG-ODN DSP30联合IL-2刺激细胞并培养72 h,对照组采用常规培养细胞48 h,培养完成后收集细胞并制备染色体,应用G显带技术进行核型分析,比较实验组和对照组染色体核型培养成功率和染色体核型异常检出率的差异,并比较CLL组与non-CLL组的染色体核型异常情况。结果 实验组染色体核型培养成功率和异常检出率均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。与CLL组比较,non-CLL组高水平复杂核型及复杂核型占比更高,更易出现14q32(IGH)重排、6q-、7q-、+3及+18。结论 采用CpG-ODN DSP30联合IL-2刺激能明显提高B-CLPD的细胞遗传学异常检出率,并且在非CLL的B-CLPD中同样具有重要价值。

基于成簇的规律性间隔的短回文重复序列关联的失活核酸酶9-脱氧核糖核酸甲基转移酶3A基因复合体的O-6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因启动子区甲基化修饰对胶质瘤细胞替莫唑胺耐药性影响

目的探讨成簇的规律性间隔的短回文重复序列关联的失活核酸酶9-脱氧核糖核酸甲基转移酶3A基因复合体(CRISPR-dcas9-DNMT3A)介导的O-6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因(MGMT)基因启动子区域DNA甲基化修饰对胶质瘤细胞替莫唑胺(TMZ)耐药性的影响。方法 CRISPR-dcas9-DNMT3A表达载体通过慢病毒包装感染TMZ耐药细胞系U251-R[U251(中国医学科院基础医学研究所)通过替莫唑胺高浓度反复间歇诱导法诱导产生], 验证其对MGMT启动子区域DNA甲基化程度, MGMT表达水平以及TMZ药物敏感性影响。结果慢病毒感染成功的U251-R细胞, MGMT启动子区域甲基化水平增高[44.7%(17/38)、63.2%(24/38)、77.1%(27/38)比7.9%(3/38), P<0.05], MGMT蛋白表达减少, 细胞对TMZ化疗的敏感性增加(P<0.05)。结论 CRISPR-dcas9-DNMT3A慢病毒感染的U251-R细胞可通过增加其MGMT基因启动子区域甲基化水平减少MGMT蛋白表达从而增加化疗敏感性。

TLR9激动剂CpG-ODN对HepG2肝癌细胞增殖及侵袭的影响

目的探讨Toll样受体9(TLR9)激动剂未甲基化的胞嘧啶-鸟嘌呤核苷酸序列(Cp G-ODN)对Hep G2肝癌细胞增殖及侵袭的影响。方法应用不同浓度的Cp G-ODN作用于肝癌细胞株Hep G2不同时间,采用实时荧光定量PCR法检测Hep G2中TLR9mRNA表达情况,MTT法检测Hep G2细胞的增殖变化,Transwell法检测其侵袭能力变化。结果 Cp G-ODN组(4、16μg·m L-1)与阴性对照组比较可增加Hep G2细胞中TLR9mRNA的表达;Cp G-ODN(1、4、16μg·m L-1)激动TLR9后可促进Hep G2细胞增殖,且以48h最为显著,并存在剂量依赖关系;Cp G-ODN(4、16μg·m L-1)激动TLR9可增强Hep G2细胞的侵袭能力(P均<0.05)。结论 TLR9表达上调可促进肝癌细胞增殖和侵袭。

FMR1基因CGG重复数目在有不良孕产史育龄妇女中的分布

目的探讨脆性X染色体智力缺陷1(FMR1)基因胞嘧啶-鸟嘌呤-鸟嘌呤(CGG)重复数目在有不良孕产史育龄妇女中的分布。方法随机选取2018年8月至2019年11月就诊于绵阳市中心医院产前门诊的521例孕妇作为研究对象,根据研究对象是否有异常生育史分为两组。其中261例有不良孕产史(研究组),260例无不良孕产史(对照组)。对每位研究对象抽取2 ml静脉血并提取DNA,通过荧光PCR技术和毛细管电泳技术进行检测,统计并分析FMR1基因CGG重复序列。结果在接受检测的521例孕妇中,共检测出35种不同的CGG重复数目,CGG重复数目的变异范围为20~200。521例中,最常见的CGG重复数目是31(170例,占32.63%);其次为28(145例,占27.83%);第三位常见的CGG重复数目是35(78例,占14.97%);此外,CGG重复数目<28的有20例(3.84%),CGG重复数目是29、30、32、33、34的共有78例(14.97%),CGG重复数目>35的有30例(5.76%)。研究组有4例前突变和3例灰区,对照组未见前突变及灰区,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。研究组中有3例样本CGG重复数目>100。本研究中发现,FMR1基因异常均为突变杂合型。结论有不良孕产史的妇女发生FMR1基因前突变携带的风险较高,对该人群进行FMR1基因筛查,一定程度上可从基因角度为其提供更好的生育咨询。

DNA氧化损伤产物及其检测方法

介绍了DNA氧化损伤对生物体的影响 ,主要的DNA氧化损伤产物8_羟基鸟嘌呤和5_羟基胞嘧啶的形成及其检测方法 ,并对目前DNA氧化损伤产物研究存在的问题进行了讨论。

毛细管电泳法测定苷肽胶囊中3种核苷酸

提出了毛细管电泳法同时分离测定苷肽胶囊中3种核苷酸腺嘌呤-5′-单磷酸、胞嘧啶-5′-单磷酸和鸟嘌呤-5′-单磷酸含量的方法。以15 mmol.L-1硼砂+35 mmol.L-1碳酸钠+60 mmol.L-1羟丙基-β-环糊精混合溶液为电解质溶液,运行电压30 kV,于254 nm波长处进行紫外检测。3种核苷酸的线性范围依次为5.0～80.0,8.0～80.0,8.0～80.0 mg.L-1,检出限(3S/N)依次为2.0,3.0,3.0 mg.L-1。采用该方法对苷肽胶囊样品中3种核苷酸的含量分别进行了测定,所得加标回收率在92.1%～102.7%之间,相对标准偏差(n=5)均小于等于5.0%。

甲醛对人Ⅱ型肺泡上皮细胞DNA氧化和甲基化水平的影响

目的：分析甲醛染毒对体外培养的人Ⅱ型肺泡上皮细胞（A549）内8-羟基鸟嘌呤脱氧核苷（8-oxo-dG）水平、DNA 5-甲基胞嘧啶（5-mC）含量的影响及其时间-效应和剂量-效应关系，探讨甲醛所致的细胞DNA氧化与DNA甲基化的关联性。方法：用5～20μmol/L甲醛作用于A549细胞，用高压液相色谱串联电化学检测技术分析细胞DNA 8-oxo-dG水平，用免疫荧光和高效毛细管电泳法检测细胞全基因组DNA 5-mC含量改变。结果：甲醛染毒提高了细胞8-oxo-dG水平，但是降低了细胞的DNA 5-mC含量。甲醛致细胞DNA氧化与DNA甲基化呈现不同特点，A549细胞暴露于20μmol/L甲醛后，DNA氧化水平在1周甚至更早时间就已显著增高，而相同条件下DNA甲基化水平的改变需要6周以上的时间，DNA甲基化的改变滞后于DNA氧化。A549细胞经5～20μmol/L甲醛染毒8周后，DNA氧化水平与甲醛剂量呈正相关关系，而同样条件下DNA甲基化水平与甲醛剂量呈负相关关系。结论：甲醛染毒可提高DNA氧化水平，降低细胞DNA甲基化水平。在甲醛的毒作用效应中，细胞DNA氧化损伤可能是早于其DNA甲基化的一个重要分子事件。

CpG对X线放射治疗Lewis肺癌小鼠移植瘤的增敏效应

目的:探讨含胞嘧啶-磷酸盐-鸟嘌呤基序的寡脱氧核苷酸(cytosine-phosphate-guanine oligodeoxynucleotide,CpG ODN)对X线照射荷瘤小鼠Lewis肺癌的放疗增敏作用。方法:在小鼠右前腋窝接种Lewis肺癌细胞,制备荷瘤小鼠模型,将32只荷瘤小鼠随机分为4组:对照组,无任何处理;X线照射组,3 Gy/次,第1、3、5、8、10、12天照射,总剂量18Gy;CpG组,第1、3、5、8、10、12天注射,每次腹腔注射CpG ODN 0.05 mg;D组:CpG+X线照射组,每次X线照射前6 h腹腔注射CpG ODN观察各组移植瘤生长速度和各治疗组移植瘤生长延迟时间,H-E染色法观察移植瘤组织病理变化,TUNEL法检测细胞凋亡结果:成功建立荷Lewis肺癌小鼠模型,经治疗后各组小鼠移植瘤体积都较对照组明显减小(P<0.01),CpG+X线照射组移植瘤体积最小;X线照射组移植瘤的生长延迟时间为2.1 d,CpG组为2.3 d,CpG+X线照射组为4.8 d,CpG ODN的放射增敏比为2.09。H-E染色病理观察到各治疗组都较对照组移植瘤坏死明显,CpG+X线照射组最显著TUNEL法检测对照组瘤组织细胞凋亡率为(2.75±0.89)%,X线照射组为(4.87±1.13)%,CpG组为(7.63±1.41)%,CpG+X线照射组为(32.63±4.66)%;各治疗组都明显高于对照组,CpG+X线照射组显著高于X线放射组和CpG组(P<0.01)。结论:CpG OND能明显提高Lewis肺癌移植瘤对X线的放射敏感性,促进肿瘤细胞凋亡。

免疫刺激序列对鼠实验性过敏性结膜炎的作用研究

目的构建豚草花粉诱导的小鼠过敏性结膜炎动物模型,观察免疫刺激序列胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤(cytidine-phosphate-guanosine,CpG)DNA对过敏性结膜炎的免疫刺激作用。方法将16只BALB/c小鼠分为CpG DNA实验组和对照组,每组各8只,均于左足部局部注射豚草花粉和氢氧化铝悬浮液进行初次致敏,在注射后第14天右眼结膜囊内滴用豚草花粉溶液进行再次致敏;其中CpG DNA实验组在再次致敏前3d给予CpG DNA滴眼,对照组给予PBS滴眼。观测指标包括症状得分、眼穹隆部结膜嗜酸性粒细胞的数量及结膜IL-12p40 mRNA的表达情况。结果 CpG DNA实验组小鼠仅偶有眼睑或球结膜充血水肿等过敏反应,眼局部反应均较对照组明显减轻(均为P<0.01)。CpG DNA实验组临床症状得分为(5.50±1.60)分,明显低于对照组的(10.88±1.73)分,差异有统计学意义(t=3.560,P=0.003)。CpG DNA实验组小鼠穹隆部结膜组织中嗜酸性粒细胞每高倍视野镜下细胞计数为(16.12±9.31)个,明显少于对照组的(67.25±20.63)个,差异有统计学意义(t=6.39,P<0.01)。CpG DNA实验组结膜组织中IL-12p40 mRNA的表达上调,是对照组IL-12p40 mRNA相对表达量的9.2倍。结论在致敏初始阶段给予CpG DNA能够明显抑制小鼠过敏性结膜炎的过敏反应和晚期炎症反应,其作用可能与CpG DNA诱导IL-12p40过表达有关。

CpG ODN对卡铂治疗Lewis肺癌小鼠移植瘤的增敏效应

目的：探讨含胞嘧啶-磷酸盐-鸟嘌呤基序的寡脱氧核苷酸（cytosine-phosphate-guanine oligodeoxynucleotide,CpGODN）对卡铂治疗Lewis肺癌荷瘤小鼠的化疗增敏作用。方法：在小鼠右前肢腋窝接种Lewis肺癌细胞,制备荷瘤小鼠模型,将32只荷瘤小鼠随机分为4组：对照组,不做任何处理;卡铂治疗组,第1~5天每天腹腔注射卡铂注射液0.32mg;CpG组,第1~5天每次腹腔注射CpGODN（1826）0.05mg;CpG＋卡铂组,每次卡铂注射前6h腹腔注射CpGODN（1826）。观察各组移植瘤生长速度和重量,HE染色法观察移植瘤组织病理变化,TUNEL法检测细胞凋亡。结果：成功建立Lewis肺癌荷瘤小鼠模型。各治疗组小鼠肿瘤体积都较对照组明显减小（P〈0.01）,其中CpG＋卡铂组移植瘤体积最小;卡铂组、CpG组、CpG＋卡铂组的抑瘤率分别为23.35%、21.47%、48.43%;HE染色法观察到各治疗组移植瘤的坏死均较对照组明显,其中CpG＋卡铂组最明显。TUNEL法检测对照组瘤组织细胞凋亡率为2.75%±0.89%,卡铂组为4.87%±1.13%,CpG组为7.63%±1.41%,CpG＋卡铂组为32.63%±4.66%,各治疗组瘤细胞凋亡率均明显高于对照组（P均〈0.01）,其中CpG＋卡铂组显著高于单独卡铂组和单独CpG组（P均〈0.01）。结论：CpGODN（1826）能明显提高Lewis肺癌移植瘤对卡铂治疗的化疗敏感性,促进肿瘤细胞凋亡。

肺癌患者调节性T细胞的变化及CpG ODN的干预作用

目的:观察肺癌患者外周血调节性T细胞的变化,并探讨CpG ODN的干预作用。方法:分离肺癌患者和健康志愿者(各30例)的外周血单个核细胞(PBMC),用流式细胞仪检测CD4+CD25+调节性T细胞比例,Real-time PCR检测Foxp3基因的表达,ELISA法检测TGF-β和IFN-γ水平。将30例肺癌患者的PBMC随机分为实验组和安慰剂组,分别给予CpG ODN2006或安慰剂CpG ODN1612干预,比较干预前后上述指标的变化。结果:肺癌患者PBMC中的CD4+CD25+调节性T细胞比例、Foxp3基因的相对表达量、TGF-β水平均高于健康对照组,差异具有显著性,但不同病理分型和分期的肺癌患者亚组间比较无显著性差异。两组的IFN-γ水平比较无差异性。CpG ODN干预后CpG ODN2006治疗组的CD4+CD25+调节性T细胞比例、Foxp3基因的相对表达量及TGF-β水平出现了下降,差异有显著性,IFN-γ水平变化无显著性差异。而CpG ODN1612安慰剂组的上述指标在干预前后则无显著性改变。结论:肺癌患者外周血中的CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞比例、TGF-β水平明显升高。CpG ODN2006干预可下调CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞比例及TGF-β水平。

动物免疫增强剂的研究进展

免疫增强剂可促进动物对抗原的免疫应答反应,显著增强疫苗的免疫效果。文章综述了动物疫苗研究领域中的免疫增强剂,如免疫刺激复合物、脂质体、细胞因子、胞嘧啶-鸟嘌呤寡脱氧核苷酸和天然产物对动物疫苗免疫效果的影响,并对免疫增强剂的发展趋势作了展望。

细菌CpG DNA的免疫激活作用研究进展

细菌基因组DNA中以较高的频率出现非甲基化的胞嘧啶 鸟嘌呤二核苷酸 (CpGDNA) ,免疫活性细胞的Toll样受体 9(TLR9)可以识别CpGDNA并激活NF κB途径 ,活化免疫活性细胞 ,引起以Th1型为主的免疫应答 ,在诱导天然免疫、疫苗佐剂、抗肿瘤、促进造血。

亚砷酸钠对HaCaT细胞MGMT基因启动子区甲基化CpG结合蛋白-2、DNA甲基转移酶1、组蛋白去乙酰化酶-1结合的影响

目的观察亚砷酸钠（NaAsO：）对人肤角质形成细胞株（HaCaT细胞）MGMT基因启动子区甲基化CpG结合蛋白-2（MeCP2）、DNA甲基转移酶1（DNMTl）及组蛋白去乙酰化酶1（HDACl）结合情况的影响，为深化阐释砷毒作用机制提供依据。方法分别以0．00（空白对照）、3．13、6，25、12．50、25．00μmol／LNaAs02重复间隔处理HaCaT细胞72h（NaAs02处理24h，隔天再次相同处理，重复3次），以人表皮鳞癌细胞株（A431）作为阳性对照。定量染色质免疫共沉淀技术（Q—CHIP）检测MGMT基因转录调控区CHIPl、CHIP2区域及MGMT基因编码区ChIP3区域MeCP2、DNMTl、HDACl结合情况。结果各组HaCaT细胞MGMT基因转录调控区CHIPl、CHIP2区域MeCP2、DNMTl、HDACl蛋白结合水平比较，差异有统计学意义（F值分别为7．387、84．634、78．442和19．263、69．649、26．546，P均〈0．05）；其中各N以s02处理组CHIPl、CHIP2区域MeCI〉2、DNMTl、HDACl蛋白结合水平[3．13μmol／LNaAs02处理组：（136．00±16．97）％、（145．00±2．83）％、（88．50±19．09）％和（106．50±37．48）％、（112．34±8．73）％、（59．71±8．49）％；6．25μmol／LNaAs02处理组：（130．00±42．43）％、（154．50士4．95）％、（101．00±1．27）％和（88．50±3．54）％、（134．32±2．82）％、（102．75±19．91）％；12．50~mol／LNaAs02处理组：（141．50±23．33）％、（161．50±7．78）％、（125．00±U．31）％和（119．50±24．75）％、（171．59±3．54）％、（167．61±10．61）％；25，00μmol／LNaAs02处理组：（134．50±43．13）％、（472．50±50．20）％、（383．50±30．41）％和（180．09±12．73）％、（348．50±27．58）％、（158．45±12．02）％]均高于空白对照组[（51．50±9．19）％、（82．00±12．73）％、（25．03±2．91）％和（37．02±4．24）％、（91．56±26．16）％、（19．09±2．90）％，P均〈0．05]。各组HaCaT细胞MGMT基因编码区CHIP3区域MeCP2蛋白结合水平比较，差异无统计学意义（F=1．670，P〉0．05），而DNMTl、HDACl蛋白结合水平比较，差异有统计学意义（F值分别为4．404、9．863，P均〈0．05），其中25．00I,Lmol／LNaAs02处理组DNMTl、HDACl蛋白结合水平[（615．85±29．63）％、（306．09±59．40）％]与空白对照组[（99．70±12．02）％、（92．45，±48．79）％]比较，差异有统计学意义（P均〈0．05）。结论MeCP2可结合于砷所致高甲基化MGMT基因转录调控区。通过招募DNMTl及HDACl使组蛋白去乙酰化，同时DNMTl可结合于MGMT基因编码区，以非甲基化DNA结合蛋白（IVIBD）依赖的方式招募HDACl，通过染色质重塑方式导致MGMT基因沉默，可能是砷毒性表现的早期分子事件。

Toll样受体9及其配体研究进展

哺乳动物的免疫系统通过模式识别受体来识别病原微生物,Toll样受体(TLR)9是主要的先天性免疫模式识别受体之一。TLR9的天然配体是病毒和细菌基因组中的非甲基化胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤二核苷酸序列(CpG),实验研究中多采用人工合成的具有抗核酶降解作用的类似物——含有CpG基序的寡聚脱氧核苷酸。TLR9被其配体激动后可使机体产生强烈的Th1型优势免疫应答,在变态反应性疾病、感染性疾病和癌症方面的治疗中有广泛的应用前景。

中英文对照名词词汇(一)

γ-氨基丁酸 γ-aminobutyri cacid（GABA） 胞嘧啶-腺嘌呤-鸟嘌呤 cytosine—adenine—guanine（CAG） 北美放射学会 Radiological Society of North America（RSNA）

含CpG元件的寡脱氧核苷酸可在体外抑制乙肝病毒复制

据医学空间网9月6日报道（原载Immunol Lett 2005 Aug 13），在特定位点含有非甲基化的胞嘧啶-鸟嘌呤二核苷酸（CpG元件）的寡脱氧核苷酸（ODNs）是有力的免疫激活剂，还可诱导若干Th1类免疫调节因子的生成。动物试验提示，CpG ODNs有望作为疫苗佐剂及免疫保护因子。