丁苯酞对阿尔茨海默病大鼠海马p38丝裂原激活蛋白激酶和细胞外信号调节激酶表达的影响

目的探究丁苯酞对阿尔茨海默病（AD）大鼠海马区中p38丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）和细胞外信号调节激酶（ERK）表达的影响。方法雄性成年SD大鼠90只随机分为试验组、对照组和空白组各30只,在试验组和对照组大鼠海马区内注射Aβ1-42建立AD模型,建模后第2天开始给予试验组丁苯酞灌胃,对照组和空白组给予相同剂量的食用麻油,共喂养30 d。之后通过Y型迷宫比较三组学习记忆能力,通过免疫组织化学染色方法比较三组脑组织中p38MAPK和ERK的表达水平。结果三组学习记忆能力由强到弱依次为空白组,试验组和对照组;三组CA1海马区p38MAPK表达阳性的细胞数量由高到低依次为对照组、试验组和空白组;三组大脑皮层中ERK表达水平由高到低依次为空白组,试验组和对照组,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论丁苯酞可明显改善AD大鼠的学习记忆能力,其原因可能与海马区p38MAPK表达下降及大脑皮层中ERD表达提高有关。

细胞外信号调节激酶和p38丝裂原活化蛋白激酶的表达水平对人精子活动力的影响

目的:比较细胞外信号调节激酶(ERK)、P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)的磷酸化和蛋白表达水平在正常精子和弱精子症患者精子中的差异,旨在探讨ERK和P38MAPK表达水平与精子活动力的相关性。方法:收集正常精液(精子浓度≥20×106/ml,a级精子≥25%或a+b级精子≥50%)和弱精子症患者精液(精子浓度≥20×106/ml,a级精子<25%或a+b级精子≤40%)各20份,洗涤后提取精子总蛋白,采用Western印迹方法分别检测ERK、P38MAPK的磷酸化和蛋白表达水平。结果:ERK和P38MAPK在正常精子和弱精子症患者精子中均有表达,ERK、P38MAPK蛋白表达水平和P38MAPK磷酸化水平在弱精子症患者组显著升高(P<0.05),而两组间ERK磷酸化水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:人精子ERK、P38MAPK蛋白表达水平和P38MAPK磷酸化水平升高可能是精子活动力低下的原因之一。

荒漠甲虫小胸鳖甲胞外信号调节激酶ERK基因的克隆与低温表达谱分析

昆虫属变温生物,冷胁迫是其最常见的环境刺激。丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路与细胞应对外界刺激密切相关,为了解MAPK信号通路在荒漠甲虫小胸鳖甲耐寒机制中的作用,从小胸鳖甲4℃转录组数据中筛选出胞外信号调节激酶(ERK)基因的全长c DNA,命名为Mp ERK。生物信息学分析表明,Mp ERK全长1125 bp,编码374个氨基酸。Mp ERK的理论分子量是43 k Da,含有ERK激酶所共有的磷酸化位点,属于MAPK超家族,与其它物种ERK的一致性达80%以上。实时定量PCR检测Mp ERK基因在低温下的表达谱发现,4℃处理1 h后,Mp ERK基因的表达上调为对照的7.5倍,5 h时达到高峰,为对照的15倍。-4℃处理1 h后,Mp ERK基因的表达上调为对照的8.4倍,5 h时达到高峰,为对照的13.75倍。研究结果表明Mp ERK基因是冷响应的,可能在小胸鳖甲应对低温时发挥信号转导作用。

家蚕丝胶对糖尿病大鼠肾脏胞外信号调节激酶信号转导通路活性的影响

糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）是糖尿病的严重并发症,其病理特征是肾小球肥大,系膜细胞增生、细胞外基质（extracellular matrix,ECM）积聚和基底膜增厚,从而导致肾小球高滤过和蛋白尿,最终导致肾小球硬化和肾间质纤维化.近年来有研究显示胞外信号调节激酶（extracellular signal regulated kinase,ERK）信号转导通路与DN密切相关.ERK是丝裂原活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinase,MAPK）家族的一个亚族,可被多种生长因子和细胞因子激活,介导细胞的生长、增殖和分化等多种生理、病理过程[1,2].本研究旨在探讨家蚕丝胶对糖尿病模型大鼠肾脏ERK信号转导通路的影响及可能机制,以期为临床治疗DN提供新思路.

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂对人精子活动力的影响

丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）属于丝/苏氨酸蛋白激酶,有报道[1]其家族成员细胞外信号调节激酶（extracellular-signal regulated protein kinase,ERK）和p38MAPK定位于精子尾部中段,参与精子活动力的调节;17-β雌二醇可通过PI3K/Akt通路激活ERK,增加精子活动力,

敲低Raf激酶抑制蛋白促进LX-2人肝星状细胞增殖

目的研究Raf激酶抑制蛋白(RKIP)在LX-2人肝星状细胞增殖中作用。方法将RKIP小干扰RNA(siRNA-RKIP)重组质粒转染至LX-2细胞,培养5 d,并筛选出稳定转染的细胞。MTT法检测沉默RKIP后LX-2细胞的增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡、细胞周期;实时定量PCR检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和1型胶原蛋白(Col1)mRNA的表达。Western blot法检测RKIP、α-SMA、Col1及胞外信号调节激酶/丝裂原活化蛋白激酶(ERK/MAPK)信号通路相关蛋白的表达水平。结果与空白对照组相比,RKIP低表达明显诱导LX-2细胞增殖,抑制细胞凋亡,增加G2期细胞比例,提高Col1、α-SMA mRNA和蛋白表达。此外,RKIP的沉默明显提高ERK/MAPK磷酸化水平。结论敲低RKIP的水平促进LX-2细胞的增殖,其机制与激活ERK/MAPK信号通路有关。

过表达Raf激酶抑制蛋白(RKIP)抑制人肝星状细胞增殖

目的研究Raf激酶抑制蛋白(RKIP)对LX-2人肝星状细胞增殖的影响。方法用重组质粒pc DNA3.1-RKIP转染LX-2细胞,G418筛选并培养稳定转染的细胞。MTT法和集落形成试验检测过表达RKIP对LX-2细胞增殖、集落生成的影响;Western blot法检测RKIP、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、1型胶原蛋白(Col1)、基质金属蛋白酶1(MMP-1)、MMP-2及胞外信号调节激酶/丝裂原激活蛋白激酶(ERK/MAPK)信号通路相关蛋白的表达水平。结果与对照细胞相比,过表达RKIP明显抑制LX-2细胞增殖和集落形成,下调Col1、α-SMA、MMP-1和MMP-2蛋白表达,降低ERK/MAPK磷酸化水平。结论过表达RKIP抑制LX-2细胞的增殖,其机制与抑制ERK/MAPK信号通路有关。

参苓白术散通过ERK/p38 MAPK信号通路干预溃疡性结肠炎大鼠结肠组织AQP3、AQP4的表达

目的探讨细胞外信号调节激酶/p38丝裂原活化蛋白激酶(ERK/p38MAPK)信号通路在参苓白术散调控脾虚湿困型溃疡性结肠炎大鼠结肠组织水通道蛋白(aquaporin,AQP)3、AQP4表达中的作用。方法将60只Wistar大鼠按照随机数字表均分为正常组、模型组(氯化钠注射液)、参苓白术散组、U0126+参苓白术散组、SB203580+参苓白术散组。除正常组外,脾虚湿困型溃疡性结肠炎大鼠采用2,4,6-三硝基苯磺酸/乙醇灌肠,结合环境与饮食干预复制。14 d后采用蛋白质印迹法检测各组大鼠结肠组织AQP3、AQP4蛋白的表达,实时荧光定量PCR法检测其mRNA表达情况。结果模型组大鼠AQP3、AQP4蛋白表达及其mRNA的表达水平明显低于正常组(P<0.05),参苓白术散组大鼠结肠组织AQP3、AQP4蛋白及mRNA表达较模型组明显升高,组间比较有显著性差异(P<0.05),SB203580+参苓白术散组及U0126+参苓白术散组大鼠结肠组织AQP3、AQP4蛋白及mRNA表达较模型组有较小幅度升高,与正常组和参苓白术散组相比均有显著性差异(P<0.05)。结论参苓白术散可显著改善大鼠结肠组织AQP3、AQP4蛋白及mRNA表达,ERK/p38 MAPK信号通路参与了参苓白术散对脾虚湿困型溃疡性结肠炎大鼠结肠组织AQP3、AQP4表达的调节作用。

miR-508-5p慢病毒过表达载体构建及对MAPK1/ERK信号通路靶向抑制作用的研究

目的:构建能高效表达成熟miR-508-5p小分子的慢病毒过表达载体,研究其对MAPK1/ERK信号通路靶向调控作用。方法:利用化学合成miR-508-5p茎环结构RNA,并将其克隆入线性化的pSicoR质粒中,经双酶切及测序鉴定;同时构建与miR-508-5p互补靶基因MAPK1的3'非翻译区,将其克隆入线性化的Report载体中。利用脂质体转染试剂将鉴定阳性的pSicoR-miR-508-5p重组质粒转染HEK-293T细胞,进一步通过Relative luciferase activity、Western blot及real-time PCR试验检测MAPK1蛋白和mRNA相对表达水平。结果:酶切及测序结果证明成功构建pSicoR-miR-508-5p及Report-MAPK1 3'-UTR重组质粒,并通过实验证实miR-508-5p过表达明显抑制MAPK1的蛋白表达水平及mRNA相对含量(P<0.05);抑制miR-508-5p的表达,又明显上调MAPK1的蛋白表达水平及mRNA相对含量(P<0.05)。结论:成功构建pSicoR-miR-508-5p慢病毒过表达载体,证实miR-508-5p直接靶标MAPK1的表达,在转录后水平对其进行负调控,为进一步研究miRNA对细胞通路和细胞周期的调控作用奠定了基础。

丝胶对糖尿病大鼠肾脏ERK信号通路的影响

目的探讨彩色蚕茧提取物——丝胶对2型糖尿病大鼠肾脏细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的作用。方法雄性SD大鼠48只,随机均分为4组:正常对照组、糖尿病模型组、丝胶治疗组和二甲双胍组。糖尿病模型组、丝胶治疗组和二甲双胍组大鼠均建立链脲佐菌素(2%,25 mg.kg-1,3 d)致2型糖尿病大鼠模型;模型成功建立后,丝胶治疗组和二甲双胍组大鼠分别给予丝胶(2.4 g.kg-1.d-1)和二甲双胍(55.33 mg.kg-1.d-1)灌胃治疗35 d。分别采用Western blot和RT-PCR法检测ERK信号通路相关因子ERK、丝裂原活化蛋白激酶的激酶(MEK)和原癌基因c-fos蛋白和mRNA的表达。结果糖尿病模型组大鼠肾脏ERK、MEK、c-fos的表达较正常对照组大鼠增高,差异具有统计学意义(P<0.01);丝胶治疗组、二甲双胍组ERK、MEK、c-fos的表达较糖尿病模型组大鼠降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论肾脏ERK信号通路的激活可能参与了糖尿病肾脏损害的发生发展。丝胶可通过下调ERK及其上游MEK、下游c-fos的表达,抑制糖尿病大鼠肾脏ERK信号通路的激活,发挥对糖尿病大鼠肾脏损伤的保护作用。

急性冷热应激对大鼠脊髓和脊神经节ERK信号转导的影响

ERK是细胞内MAPK信号转导系统的重要蛋白激酶,参与多种刺激的应激反应。本实验建立冷热应激模型,应用免疫组织化学和Western blot方法,研究冷热应激刺激对大鼠脊髓和脊神经节ERK的激活作用。结果显示:(1)正常脊髓非磷酸化ERK1(pan-ERK1)阳性细胞分布于RexedIII-X层,而I-II层没有免疫反应,胞浆着色,没有核膜断裂;磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)阳性细胞见于灰质Rexed各层(I-X),散在分布。免疫产物位于胞浆核周区,少见于细胞核,核膜有断裂。脊神经节p-ERK1/2免疫反应见于大、中、小型神经元,定位于细胞核;没有pan-ERK1免疫反应。(2)20min热应激后,RexedII层p-ERK1/2阳性细胞数明显增多,核周着色区增大,核膜常有断裂,脊神经节阳性细胞数没有明显变化;10min热应激和体温(38℃)应激后,脊髓和脊神经节阳性细胞数和核着色没有显著变化。(3)20min冷应激后,脊髓II层p-ERK1/2阳性细胞数轻度减少,核周着色区变窄,核膜有断裂,脊神经节阳性细胞数没有变化;10min冷应激后阳性细胞数没有明显变化。(4)Western blot显示,热应激和冷应激分别提高和降低了胸段脊髓p-ERK1/2的蛋白表达水平。本研究证实,ERK存在于脊髓灰质各层和脊神经节各型神经元,热应激提高了ERK激活水平而冷应激则相反,提示MAPK信号转导激活具有应激类型和应激强度的依赖性,参与了感觉神经元的功能调节。

MAPK在葡萄糖及AngⅡ致血管平滑肌细胞增殖反应中的作用

目的:研究丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号途径在葡萄糖(GS)和/或血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)介导大鼠动脉平滑肌细胞促增殖中的作用及其可能的调控机制.方法:实验以平滑肌细胞蛋白合成速率和蛋白含量为平滑肌细胞增殖的指标,以平滑肌细胞3H-亮氨酸掺入率表示细胞蛋白质合成速率,通过3H-胸苷(3H-TdR)反映平滑肌细胞DNA的代谢及细胞增殖情况;并通过给予PD098059及高浓度葡萄糖(HG)预处理,观察它们对细胞蛋白合成、DNA代谢及细胞增殖的影响.结果:①AngⅡ(10-7mol/L)处理平滑肌细胞,3H-胸苷掺入率明显增高;HG(25×10-3mol/L)处理平滑肌细胞,3H-胸苷掺入率明显增高;AngⅡ+HG处理平滑肌细胞3H-胸苷掺入率显著增高.②AngⅡ增加3H-胸苷掺入的作用可明显被PD098059所抑制;AngⅡ+HG增高3H-胸苷掺入的作用也可被PD098059所抑制.③AngⅡ(10-7mol/L)处理平滑肌细胞,3H-亮氨酸掺入率明显增高;HG(25×10-3mol/L)处理平滑肌细胞,3H-亮氨酸掺入率增加;AngⅡ+HG处理平滑肌细胞3H-亮氨酸掺入率显著增加.④AngⅡ增加3H-亮氨酸掺入的作用可部分被PD098059所抑制;AngⅡ+HG增加3H-亮氨酸掺入的作用可显著被PD098059所抑制.结论:应用MAPK的特异性抑制剂PD098059抑制血管平滑肌细胞的增殖,证明MAPK激活在GS和/或AngⅡ导致平滑肌细胞增殖反应中有重要作用.

人肺癌细胞的肿胀应激及其信号通路分析

目的通过比较肺癌与对应癌旁组织的含水量、细胞核大小以及丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)磷酸化激活情况以明确肺癌细胞是否存在肿胀应激。方法采用干湿质量比较法检测10例人肺腺癌、12例肺鳞癌以及对应的癌旁正常肺组织新鲜标本的含水量差别。用磷酸化和非磷酸化抗体结合免疫组织化学染色方法,检测30例肺腺癌、32例肺鳞癌、10例正常肺泡上皮细胞和10例正常肺支气管上皮细胞c-Jun氨基末端激酶(JNK)、胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和p38 MAPK的表达及磷酸化激活情况。最后采用HE染色结合图像分析软件估算肺腺癌和肺鳞癌的癌细胞和对应癌旁正常肺泡上皮细胞及支气管上皮细胞的细胞核大小差别。结果干湿质量比较法发现肺鳞癌和肺腺癌的平均含水量均显著高于其对应的癌旁正常组织。免疫组织化学染色发现p38 MAPK在肺腺癌和肺鳞癌及癌旁组织均高表达。ERK在肺腺癌和鳞癌组织均弱表达,但是在肺癌旁组织高表达。JNK在肺腺癌及癌旁组织均弱表达。在肺泡上皮组织和支气管上皮组织中JNK、p38 MAPK、ERK1/2均未被磷酸化激活。但是,肺腺癌、肺鳞癌组织中JNK被磷酸化激活,而p38 MAPK及ERK1/2未被磷酸化激活。肺癌细胞的细胞核明显大于对应的正常肺上皮细胞的细胞核。结论肺癌细胞存在肿胀应激,不同组织类型肺癌细胞肿胀的信号通路存在差异。

卒中后MAPK／ERK信号转导通路的激活是保护还是损害？

卒中是危害人类健康的常见病，具有较高的致残率和死亡率，因此卒中后脑损伤及其治疗一直是脑血管病研究领域的难点问题。丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated proteins kinase，MAPK）是一类存在于所有真核细胞的丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶，MAPK激活通路在真核细胞的信号转导过程中起着至关重要的作用。

PI3K/AKT/mTOR和MAPK/ERK信号通路在胃癌细胞中的相互作用机制

目的探讨磷脂酰肌醇3–激酶/蛋白激酶B/哺乳动物靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)、丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(MAPK/ERK)两条信号通路对胃癌细胞功能的影响及相互作用机制。方法使用PI3K抑制剂LY294002、mTOR抑制剂AZD8055、MEK抑制剂AZD6244单独或联合作用于胃癌MGC-803细胞。应用CCK8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期;蛋白印迹法(Western blot)检测通路关键蛋白的表达。结果联合使用LY294002(25μmol/L)与AZD6244(125μmol/L)、AZD8055(0.1μmol/L)与AZD6244(125μmol/L)能够显著抑制胃癌MGC-803细胞的增殖活性,且联用组比单独作用组具有更强的抑制效果(P<0.05);联用组诱导细胞凋亡数量和阻滞于G0/G1期的MGC-803细胞数量增多,高于单独作用组(P<0.05)。与LY294002、AZD8055和AZD6244单独作用相比,LY294002与AZD6244、AZD8055与AZD6244联用组MGC803细胞p-AKT、p-P70S6K和p-ERK1/2蛋白表达明显受到抑制(P<0.05)。结论PI3K/AKT/mTOR和MAPK/ERK两条信号通路在胃癌MGC-803细胞的生长中具有协同调控作用,对于两条信号通路的多靶点抑制能够更加明显的抑制癌细胞生长。

花姜酮对心肌细胞缺氧损伤的保护作用及机制

目的探究花姜酮(ZER)对心肌细胞缺氧损伤的保护作用及潜在的作用机制。方法缺氧诱导H9c2心肌细胞损伤模型。将H9c2心肌细胞分为空白组(正常培养)、对照组(缺氧培养)、ZER处理组(8μmol/L ZER组、16μmol/L ZER组、24μmol/L ZER组,缺氧+8、16、24μmol/L ZER)。CCK-8法检测H9c2心肌细胞活力;流式细胞仪检测各组H9c2心肌细胞凋亡率;Western印迹检测各组H9c2细胞中凋亡及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)通路相关蛋白的水平。结果H9c2心肌细胞活力随着缺氧诱导时间的延长而降低,在缺氧36 h后细胞的活力低于一半。与空白组相比,对照组、ZER处理组细胞的增殖活力显著降低,凋亡率显著升高,凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸酶(caspase)-3和caspase-9:显著上调,MAPK/ERK通路相关蛋白(p-MAPK、p-ERK)显著下调(P<0.05)。与对照组相比,ZER处理组H9c2细胞增殖活力显著增高,凋亡率显著降低Bax、caspase-3和caspase-9显著下调,p-MAPK、p-ERK表达量显著上调,且均呈现浓度依赖性(P<0.05)。结论ZER可能通过激活MAPK/ERK信号通路减轻缺氧对心肌细胞的损伤。

柴朴汤对哮喘模型大鼠气道炎症及ERK/p38 MAPK信号通路的影响

目的：观察柴朴汤对哮喘模型大鼠气道炎症及细胞外信号调节激酶（ERK）／p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）信号通路的影响。方法：sD大鼠随机分为空白组、模型组、柴朴汤低、中、高（0．75，1．5，3．0g·kg^-1）组，地塞米松组。采用卵蛋白（OVA）致敏激发建立大鼠哮喘模型。柴朴汤低、中、高剂量组于激发前0．5h给予相应剂量柴朴汤灌胃；地塞米松组于激发前0．5h给予地塞米松（0．005g·kg^-1）灌胃；模型组于激发前0．5h给予等体积生理盐水灌胃；空白组以生理盐水代替OVA进行腹腔注射及雾化吸入；隔日1次，共激发28d。观察各组大鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞总数及分类细胞计数的变化；酶联免疫吸附法（ELISA）检测肺组织磷酸化ERK（p-ERK），磷酸化p38MAPK（p-p38MAPK）的活性；实时荧光定量PCR（Real-timePCR）分析检测ERK，p38MAPKmRNA的表达；蛋白免疫印迹法（Westernblot）检测ERK，p-ERK，p38MAPK，p-p38MAPK蛋白的表达；光镜下观察病理组织形态学变化及进行炎症评分。结果：模型组大鼠BALF中细胞总数和分类细胞计数；肺组织p-ERK，p-p38MAPK的活性，ERK，p38MAPKmRNA的表达，p-ERK，p-p38MAPK的表达，炎症评分均明显高于空白组（P〈0．01）；柴朴汤低、中、高剂量组和地塞米松组上述指标则明显低于模型组（P〈0．05，P〈0．01）。结论：柴朴汤可改善哮喘模型大鼠气道炎症，其机制可能与其抑制ERK／p38MAPK信号通路有关。

干扰ERK／p-38 MAPK信号通路对乳腺癌骨转移的影响

我们选用乳腺癌高转移细胞株MDA—MB-231为实验对象，观察细胞内胞外信号调节激酶（ERK）和p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）在细胞侵袭和迁移能力方面的作用，探讨干扰ERK／p38MAPK信号通路在乳腺癌骨转移调控中的意义。