基于胞外信号调节激酶/胞浆型磷脂酶A2信号通路分析川穹嗪对膜性肾病大鼠肾保护作用

目的探讨川穹嗪(TMP)对膜性肾病大鼠肾功能的影响,并分析其与胞外信号调节激酶(ERK)/胞浆型磷脂酶A2(cPLA2)信号通路的相关性。方法用阳离子化血清蛋白皮下注射制备膜性肾病大鼠模型,分为模型组、实验组,每组10只,实验组腹腔注射TMP(100 mg·kg-1),模型组腹腔注射等体积生理盐水,隔日注射一次,连续4周,另选10只SD大鼠不做处理作为对照组。用酶联免疫吸附(ELISA)法检测炎性因子水平,用免疫印迹(Western blotting)法检测肾组织细胞凋亡、ERK/cPLA2信号通路相关蛋白水平。结果对照组、模型组、实验组的白介素-1β(IL^-1β)含量分别为(2.79±0.35),(6.95±0.52),(4.13±0.48)ng·L^-1;白介素-6(IL-6)含量分别为(42.25±3.55),(69.41±7.05),(52.36±6.18)ng·L^-1;肿瘤坏死因子-ɑ(TNF-ɑ)含量分别为(40.52±4.58),(66.38±6.56),(55.25±5.85)ng·L^-1;Bax蛋白相对表达量分别为0.26±0.08,0.68±0.10,0.43±0.13;Bcl-2蛋白相对表达量分别为0.72±0.12,0.23±0.03,0.47±0.18;p-ERK1/2蛋白相对表达量分别为0.23±0.04,0.75±0.06,0.45±0.05;p-cPLA2蛋白相对表达量分别为0.19±0.02,0.67±0.05,0.51±0.04;对照组与模型组比较、模型组与实验组比较,上述指标的差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论TMP可以减低膜性肾病大鼠的炎性反应、细胞凋亡进而实现其肾保护作用,可能与抑制ERK/cPLA2信号通路有关。

“三通针法”电针调控Rho/ROCK(Rho kinase)及MEK/ERK信号通路对脊髓损伤大鼠胞浆型磷脂酶A2的影响

背景:胞浆型磷脂酶A2(cytosolic phospholipase A2,cPLA2)是治疗脊髓损伤的新型策略和靶标,其受RhoA/Rho kinase及MEK/ERK信号通路的调控。而电针可通过调控RhoA/Rho kinase和MEK/ERK信号通路治疗脊髓损伤。目的:探讨电针调控Rho/ROCK(Rho kinase)及MEK/ERK信号通路对脊髓损伤后cPLA2的影响。方法:90只雌性SD大鼠,随机取72只制备脊髓损伤模型,BBB评分后随机分为脊髓损伤组、电针治疗组、U0126治疗组(ERK阻断剂)和Y27632治疗组(ROCK阻断剂),另18只设为假手术组(只进行椎板咬除,但不进行脊髓撞击)。电针治疗组大鼠取大椎、腰阳关以及双侧次髎、足三里进行电针治疗,每天1次,每次20 min,共14次;U0126治疗组和Y27632治疗组分别予以U0126和Y27362隔天1次硬膜下腔注射。治疗结束经BBB评分后处死大鼠,收集脊髓组织,ELISA检测脊髓组织前列腺素E2、血小板活化因子的水平;TUNEL法检测脊髓神经细胞凋亡率;Western blot检测脊髓RhoA、ROCKⅡ、MEK、ERK1/2、p-ERK1/2、cPLA2、p-cPLA2蛋白的表达;qRT-PCR检测脊髓RhoA、ROCKⅡ、MEK、ERK1/2与cPLA2的基因表达。结果与结论:(1)与假手术组比较,脊髓损伤组大鼠BBB评分明显下降(P<0.01),脊髓组织细胞凋亡阳性细胞数、前列腺素E2和血小板活化因子水平、p-cPLA2蛋白和cPLA2基因的表达均明显升高(P<0.01);除电针治疗组大鼠cPLA2基因表达降低差异无显著性意义外,各治疗组大鼠上述指标均明显逆转(P<0.01);(2)与假手术组比较,脊髓损伤组大鼠脊髓组织RhoA及ROCKⅡ蛋白和基因的表达、MEK和ERK1/2基因的表达、MEK和p-ERK1/2蛋白的表达均明显升高(P<0.01),电针治疗组及其他两治疗组大鼠上述指标均明显降低(P<0.01或P<0.05);(3)结果说明,电针能下调Rho/ROCK和MEK/ERK信号通路相关因子表达,抑制cPLA2的活性,减少神经细胞凋亡、减轻炎症反应,最终达到治疗脊髓损伤的作用。

131I治疗老年分化型甲状腺癌患者的效果分析及对胞外信号调节激酶通路蛋白的调控作用研究

目的分析131I治疗老年分化型甲状腺癌患者的效果及对胞外信号调节激酶(ERK)通路蛋白的调控作用。方法对180例老年分化型甲状腺癌患者的临床资料进行研究,分析患者经131I治疗后血清中血细胞及肝肾功能变化,并检测患者血清中ERK通路蛋白水平变化。结果细胞数和血小板数均低于治疗前,差异均有统计学意义(P﹤0.05),而治疗前后红细胞数、淋巴细胞数、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、血尿素氮(BUN)、碱性磷酸酶(ALP)及肌浆网钙离子ATP酶2a(SERCA2a)水平比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05)。血清中ERK信号通路蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(BAX)、p53、p73蛋白水平均升高而Ras、Raf、胞外信号调节蛋白激酶(MEK)、ERK1/2、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)及增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白水平均降低,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论131I治疗老年分化型甲状腺癌患者效果与其调控患者体内ERK信号通路有关,且不影响患者的肝肾功能。

ERK1/2信号通路介导同型半胱氨酸对PC12细胞的损伤作用

目的观察同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)对PC12细胞的损伤作用,探讨胞外信号调节蛋白激酶1/2(extracellular signal-regulated protein kinases1and2,ERK1/2)通路在其中的作用。方法台盼蓝拒染法和MTT比色法检测细胞存活率,相差倒置显微镜观察细胞形态,Hoechst33258染色荧光照相术检测细胞凋亡,罗丹明123染色荧光照相术和流式细胞术检测细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP),Western blot检测ERK1/2磷酸化的水平。结果Hcy(2.5～20mmol/L)作用24h后,可浓度依赖性地抑制PC12细胞的存活率;10mmol/L Hcy处理24h后,PC12细胞出现核固缩等典型的凋亡特征;Hcy能明显地降低PC12细胞的MMP;Hcy能诱导ERK1/2磷酸化,特异性的ERK1/2阻断剂U0126可显著抑制Hcy对PC12细胞的损伤作用。结论Hcy可引起PC12细胞损伤,此作用与其抑制MMP及诱导ERK1/2磷酸化有关。

不同中医证型骨质疏松性髋部骨折患者ERK1/2通路表达

目的探讨不同中医证型骨质疏松性髋部骨折患者胞外信号调节激酶(ERK1/2)信号通路的表达变化。方法前瞻性选取华中科技大学同济医学院附属梨园医院和湖北省中医院2018年11月-2021年12月收治的120例因骨质疏松性髋部骨折、行全髋关节置换术患者。根据骨质疏松症中医辨证分型标准,分为肝肾阴虚证、脾肾阳虚证、肾阳虚衰证、气滞血瘀证4个证型,所有患者均检测组织ERK1/2 mRNA和ERK1/2蛋白表达水平,分析不同证型患者ERK1/2表达差异。结果120例患者的中医证型中肝肾阴虚型占比较高,其次为脾肾阳虚型、肾阳虚型,血瘀气滞型占比最低,男性多为肾阳虚型,女性多为肾阴虚型,气滞血型患者平均年龄高于其他证型(P<0.05);不同中医证型患者的L 2~4、股骨颈、转子区、Wards区骨密度值比较,血瘀气滞型<肾阳虚型、脾肾阳虚型<肝肾阴虚型(P<0.05);不同中医证型患者的ERK1/2 mRNA、ERK1/2蛋白表达水平比较,血瘀气滞型<肾阳虚型、脾肾阳虚型<肝肾阴虚型(P<0.05);Pearson相关性分析结果显示,受试者的L 2~4、股骨颈、转子区、Wards区骨密度平均值与ERK1 mRNA、ERK2 mRNA、ERK1蛋白、ERK2蛋白表达水平呈正相关(r=0.251、0.306、0.318、0.270,P均<0.05)。结论血瘀气滞型骨质疏松症患者的ERK1/2 mRNA和蛋白表达水平低于肾阳虚者,肾阳虚者低于肾阴虚者,且表达水平与患者骨密度呈正相关。

灯盏花素对肝纤维化大鼠的干预作用及机制

目的基于转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad2/胞外信号调节激酶1(ERK1)通路和Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)/核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)通路,探讨灯盏花素对肝纤维化(HF)大鼠的干预作用及潜在机制。方法将60只大鼠随机分为正常对照组,模型组,灯盏花素低、中、高剂量组(5.4、10.8、21.6 mg/kg)和秋水仙碱组(阳性对照,0.45 mg/kg),每组10只,雌雄各半。除正常对照组外,其余各组大鼠均以四氯化碳诱导构建HF模型。随后,各药物组大鼠灌胃相应药液,每天1次,连续28 d。观察各组大鼠的肝脏外观并计算其肝脏系数,检测其血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平和肝组织中ALT、AST、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,观察其肝组织炎症和纤维化情况,检测肝组织中TGF-β1、Smad、ERK1、Nrf2、Keap1、HO-1蛋白及mRNA的表达情况。结果与正常对照组比较,模型组大鼠肝脏可见大面积的白色结节灶、明显的炎症细胞浸润和胶原纤维沉积;其体重,肝组织中SOD、GSH-Px水平和Nrf2、HO-1蛋白及mRNA的表达水平均显著降低(P<0.05);肝脏系数,Masson染色阳性面积百分比,血清及肝组织中ALT、AST水平,肝组织中MDA水平和TGF-β1、Smad2、ERK1、Keap1蛋白及mRNA的表达水平显著升高(P<0.05)。与模型组比较,各药物组大鼠肝组织病变均有所改善,上述定量指标普遍逆转(P<0.05)。结论灯盏花素对大鼠HF有较好的干预作用,其作用可能与抑制TGF-β1/Smad2/ERK1通路来抗纤维化,调控Keap1/Nrf2/HO-1通路来抑制氧化应激有关。

骨质疏松分子生物学研究专家共识

骨质疏松分子生物学研究在骨代谢分子信号通路、骨质疏松易感基因、骨质疏松相关蛋白、骨质疏松靶向治疗等方向取得了很大进展。核因子κB受体活化因子/核因子κB受体活化因子配体/骨保护素(RANK/RANKL/OPG)信号通路、核因子κB受体活化因子(NF-κB)信号通路、丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶(MAPK/ERK)信号通路、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)信号通路、钙离子(Ca^(2+))信号通路、酪氨酸激酶、蛋白激酶B(Src、Akt)信号通路、蛋白激酶C(PKC)信号通路等骨代谢重要通路,维生素D受体(VDR)基因、低密度脂蛋白相关蛋白5(LRP5)基因、亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因、雌激素受体(ER)基因等易感基因,载脂蛋白E(Apo E)、Klotho蛋白(Klotho)、骨形态发生蛋白(BMP)、骨涎蛋白(BSP)等相关蛋白,以直接或间接的方式参与调控骨代谢,作用重叠相互联系,互为结果,已在本专业领域达成共识。