球孢白僵菌两种胞外几丁质酶的诱导和纯化

球孢白僵菌突变株CH-1316在完全培养基中培养至对数前期后转入以胶体几丁质为唯一碳、氮源的液体诱导培养基中继续培养20～25h,几丁质酶被诱导产生;在对数生长期胞外几丁质酶活力最高。发酵液经(NH_4)_2SO_4沉淀、DEAE-纤维素层析和凝胶过滤分离出二种几丁质酶组分,在聚丙烯酰胺凝胶电泳图上显示出两条均一的带,并且每条带都具有几丁质酶活力。几丁质酶1既是外切酶又是内切酶,而几丁质酶2只表现内切酶活力。分子排阻法测得这两种酶的分子量分别为52000和39000。

球孢白僵菌胞外蛋白酶和几丁质酶活性与对亚洲玉米螟毒力的相关性分析

以振荡摇瓶培养法培养17株球孢白僵菌(Beauveria bassiana),分析其总胞外蛋白酶和几丁质酶的产生水平,同时用这些菌株的分生孢子粉作为样品,用人工饲养的亚洲玉米螟5 d龄幼虫作为试虫,作毒力生物测定.并分析各个因素之间的相关性,验证各个酶活性指标作为毒力的生物测定的替代或者补充指标的可能性.结果表明,菌株间同代毒力、酶活之间的差异比较大,LT50的变化范围为4.82～10.06 d,胞外蛋白酶活性的变化范围是0.86×10-2～3.66×10-2 IU/mL,胞外几丁质酶活性的变化范围是0.012～1.47 IU/mL.将后二者分别与各个菌株对玉米螟的LT50进行回归分析,结果发现胞外蛋白酶活性和胞外几丁质酶活性以及测定胞外蛋白酶活性时的干物质增重3个指标,与感染的亚洲玉米螟幼虫的死亡率及LT50的相关性都不显著,不能作为对亚洲玉米螟毒力的生物测定的替代或补充指标.

产组成型几丁质酶菌株的筛选及产酶条件优化

利用两次平板透明圈筛选,结合液体培养,从土壤中分离出1株产几丁质酶细菌,命名为CCB-1.该菌株产几丁质酶不需要几丁质诱导,而且高浓度的葡萄糖不抑制该菌株产几丁质酶,因此该菌株是组成型产几丁质酶.形态学观察和生理生化测定结果表明CCB-1是浸麻芽孢杆菌(Bacillus macerans).在250 mL摇瓶中研究了氮、葡萄糖浓度、pH值、培养温度、几丁质类型和培养时间对CCB-1生长及产酶的影响.CCB-1菌最适产酶条件为:温度37℃;pH 6-pH 7之间;起始葡萄糖浓度8g/L;0.4%的有机氮(如蛋白胨、牛肉膏、酵母膏);0.3%的胶体几丁质或细粉几丁质.CCB-1在优化培养条件下振荡培养60 h产酶最高,达4.23 U/mL.