日本血吸虫胞外囊泡的提取、鉴定及对人肝星状细胞影响的初探

旨在探讨日本血吸虫(Schistosoma japonicum)胞外囊泡(Extracellular vesicles,EVs)的提取方法及特性。本研究利用尺寸排阻法收集Sj EVs,通过透射电镜、蛋白质谱对Sj EVs的形态学、蛋白谱进行解析并对鉴定到的蛋白进行生物信息学分析。将PKH67绿色荧光标记的Sj EVs与人肝星状细胞LX-2共孵育,观察细胞摄取Sj EVs的情况,并对细胞中虫源miRNAs及细胞内纤维化因子进行检测,初步探讨Sj EVs对肝星状细胞的影响。结果表明:Sj EVs呈圆形或椭圆形囊泡结构,内含EVs标志蛋白。生物信息学分析结果显示,Sj EVs蛋白可能与细胞进程、代谢等途径密切相关。Sj EVs与人肝星状细胞LX-2共孵育结果显示,LX-2细胞可成功摄取Sj EVs,且定量反转录PCR(RT-qPCR)结果显示LX-2细胞中部分虫源miRNAs显著升高,纤维化因子α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原纤维α1(Collagen typeⅠalpha 1,Col1α1)和Ⅲ型胶原纤维α1(Collagen typeⅢalpha 1,Col3α1)极显著升高,提示肝星状细胞活化。综上,本研究为解析Sj EVs在宿主肝纤维化中的作用提供了依据,为进一步探究Sj EVs的潜在功能奠定了基础。

AnxA5在成骨细胞胞外囊泡介导骨形成中的作用及机制研究

目的骨质疏松是一种以骨量减少、骨密度降低为主要特征的疾病,常伴随着骨组织中力学微环境的改变。胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)是胞间通讯的重要信使,在骨形成过程中发挥至关重要的作用。本研究拟基于骨质疏松模型探索成骨细胞EVs在骨形成中的作用及其机制。方法通过双侧去卵巢构建骨质疏松小鼠模型,收集正常和骨质疏松成骨细胞释放EVs与骨髓间充质干细胞共培养,通过茜素红染色检测其成骨能力的变化。蛋白质组学检测EVs内容物组分变化。采用MC3T3-E1构建敲降膜联蛋白A5(Annexin A5,Anx A5)的成骨细胞株,通过Western blot检测成骨分化标志物的表达,通过NTA和BCA检测EVs的释放,通过TEM、免疫荧光检测EVs的黏附。通过尾静脉给骨质疏松小鼠注射Anx A5重组蛋白检测骨质量的变化。结果发生骨质疏松后,成骨细胞EVs的促矿化能力显著减弱。内容物组分分析发现,与正常小鼠相比,骨质疏松小鼠成骨细胞EVs中Anx A5表达显著减少。敲除Anx A5后,成骨细胞MC3T3-E1形成矿化结节的数量显著减少;EVs的释放数量减少,EVs的ALP活性减弱,EVs与细胞外基质的黏附数量也明显变少。将Anx A5注射入骨质疏松小鼠后,小鼠的骨密度、骨小梁数量等均显著增加。结论Anx A5通过介导骨矿化过程中胞外囊泡的释放和黏附促进骨形成。

十溴联苯醚暴露通过胞外囊泡装载miR-221促进三阴性乳腺癌细胞转移

目的:探讨环境污染物十溴联苯醚(BDE-209)暴露促进三阴性乳腺癌(TNBC)恶性进展的机制。方法:将TBNC细胞分为空白对照组和BDE-209暴露组。超速离心法提取胞外囊泡,分别应用扫描电子显微镜和蛋白质印迹法对提取的胞外囊泡进行鉴定,采用纳米颗粒跟踪技术检测胞外囊泡生成量,细胞划痕实验和Transwell小室实验检测与胞外囊泡共培养后TNBC细胞的迁移能力和扩散能力,定量逆转录PCR(qRT-PCR)检测囊泡中的miR-221表达水平,蛋白质印迹法检测共培养后TNBC细胞中基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达水平。结果:与空白对照组比较,2.00、20.00和200.00 ng/mL BDE-209暴露可显著增加胞外囊泡的生成(均P<0.05),其中200.00 ng/mL BDE-209暴露诱导释放的胞外囊泡共培养的细胞迁移率较空白对照组提高86%,穿膜细胞数提高至1.32倍,miR-221表达水平提高至2.71倍,MMP9表达水平提高至1.62倍(均P<0.05)。转染抗miR-221抗体能降低BDE-209暴露诱导生成的胞外囊泡内miR-221表达水平,使BDE-209促进MDA-MB-231细胞迁移的能力被显著抑制。结论:BDE-209暴露可通过增加胞外囊泡的生成及装载miR-221增强TNBC细胞的迁移能力,促进TNBC细胞转移。

细菌胞外囊泡与宿主的互作机制研究进展

细菌胞外囊泡(BEVs)是一类由细菌分泌的可携带和转运各种物质的纳米级颗粒,在母源细菌与宿主互作中发挥重要作用。研究发现,BEVs可携带母源细菌源抗原成分参与免疫反应信号通路,实现对宿主的免疫调节作用,为疫苗开发提供了新思路;肠道中的BEVs可刺激黏蛋白产生,增强肠道屏障效应、降低肠道炎症,既能作为修复肠炎患者肠道屏障功能的潜在药物,也可作为评估肠道损伤情况的标志物;BEVs还可通过调节糖和脂质代谢的信号通路调节宿主代谢。反过来,宿主也能影响细菌及其BEVs的分泌。本文综述了BEVs的组成及其在宿主免疫调节、肠道屏障功能和代谢过程中作用机制,以期为BEVs在临床和生产应用中提供参考。

肿瘤细胞胞外囊泡DNA特征分析

从肺腺癌A549细胞培养上清液中分离胞外囊泡(EVs),通过动态光散射(DLS)和透射电镜(TEM)分析得到EVs的大小约为100 nm,并在样品中检测到EVs的特异性标记TSG101。通过琼脂糖凝胶电泳检测发现,胞外囊泡DNA(evDNA)分子片段的大小在12 kb左右。根据evDNA测序数据选择特定evDNA开展PCR试验,实现其有效检测。对EVs进行脱氧核糖核酸酶Ⅰ(DNase I)或ATP依赖的DNA酶(PS酶)处理,证实evDNA以线性方式存在于囊泡外侧。通过末端转移酶(TdT)向evDNA末端添加poly-dA,使用oligo-dT珠对其进行捕获,进一步证明其线性表面分布。此外,建立TetO-DNA/TetR-GFP可视化系统,在荧光显微镜下观察到TetR-GFP蛋白与EVs上TetO-DNA的结合。流式细胞术和PCR试验证实,可用TetR-GFP蛋白实现对携带TetO-DNA EVs的富集。本研究证实了evDNA以线性的形式分布在EVs表面,为进一步研究其生物学功能提供了重要基础。

原代成骨细胞来源胞外囊泡促进破骨细胞分化

目的:观察原代成骨细胞来源胞外囊泡(OB-EV)对破骨细胞增殖、分化的作用,探究胞外囊泡参与成骨细胞和破骨细胞之间通信的可能分子机制。方法:采用酶消化法分离原代成骨细胞,并以β-甘油磷酸钠、抗坏血酸、地塞米松成骨诱导液诱导培养,通过碱性磷酸酶染色及茜素红S染色鉴定成骨细胞分化及矿化功能。收集成骨细胞培养上清液,采用超速离心法提取囊泡分泌物,并通过透射电镜观察囊泡形态,蛋白质印迹法鉴定胞外囊泡表面特征性标志物肿瘤易感基因101(TSG101)、ALG-2相互作用蛋白X(Alix)和分化抗原9(CD9)。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)实验检测OB-EV对RAW264.7的增殖作用。进一步通过蛋白质印迹法检测OB-EV与核因子κB受体活化因子配体(RANKL)联合作用后RAW264.7破骨分化标志物的表达水平。将OB-EV处理的小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMM)通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察并比较破骨细胞数,明确OB-EV对破骨细胞分化的影响。结果:透射电镜观察提取的OB-EV呈直径为30~150 nm的双层杯状结构,且TSG101、Alix、CD9呈阳性表达。CCK-8实验结果显示高浓度(20μg/mL以上)OB-EV抑制RAW264.7增殖(P<0.05)。蛋白质印迹法检测发现RAW264.7中c-Fos、活化T细胞核因子(NFATc1)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)等破骨细胞分化标志蛋白表达明显增加,且随OB-EV浓度增加而增加(P<0.05)。此外,将OB-EV与RANKL联合作用于BMM,结果显示TRAP阳性细胞较RANKL对照组显著增多(P<0.05)。结论:OB-EV可促进破骨前体细胞向破骨细胞分化,但高浓度OB-EV会抑制细胞增殖。

母乳胞外囊泡促进乳双歧杆菌BB-12生长的转录组学分析

胞外囊泡是母乳中的重要功能成分之一,作者所在实验室前期研究发现,母乳胞外囊泡能够显著促进乳双歧杆菌BB-12的生长,但具体机制不清楚。作者采用超速离心法与超滤法相结合从母乳中提取胞外囊泡,通过纳米颗粒追踪技术、透射电镜以及蛋白质免疫印迹法对母乳胞外囊泡进行了鉴定表征。利用转录组学技术分析母乳胞外囊泡促进乳双歧杆菌BB-12生长的关键基因。研究发现,添加母乳胞外囊泡后,乳双歧杆菌BB-12菌体中ABC寡肽转运系统相关基因pstC、pstA、metI,淀粉和蔗糖代谢相关基因BIF_02090,磷酸戊糖途径相关基因prsA、BIF_01321,D-氨基酸代谢相关基因murD、BIF_02122,乙醛酸和二羧酸代谢相关基因pccA的表达显著上升。结果表明,母乳胞外囊泡可能作为一种新型益生元促进婴幼儿肠道中双歧杆菌的生长,为母乳胞外囊泡在新一代母乳化奶粉中的开发应用提供了理论依据。

人脐带间充质干细胞源胞外囊泡对屋尘螨诱导的哮喘小鼠气道炎症的影响

目的:探讨人脐带间充质干细胞源胞外囊泡(human umbilical cord mesenchymal stem cells-derived extracellular vesicles, hUCMSC-EVs)对屋尘螨(house dust mite, HDM)诱导的哮喘小鼠气道炎症的影响。方法:超高速离心法提取hUCMSC-EVs;透射电镜观察hUCMSC-EVs形态;蛋白质印迹法检测胞外囊泡标志物肿瘤易感基因101(tumor susceptibility gene 101,TSG101)和热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)表达。将15只雌性BALB/C小鼠随机均分为3组,每组5只,分别为对照组(不做任何处理)、HDM组(HDM处理)和HDM+EVs组(HDM+hUCMSC-EVs处理);苏木精-伊红(HE)和过碘酸-雪夫(PAS)染色法分别观察各组小鼠肺脏气道炎性细胞浸润和杯状细胞化生;收集各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)并对总细胞和嗜酸性粒细胞进行计数;ELISA法检测BALF中IL-4和IL-13含量;蛋白质印迹法检测肺脏中E-钙黏蛋白(E-cadherin)和闭锁连接蛋白1(ZO-1)表达。将人支气管上皮BEAS-2B细胞株分为对照组和EVs组(DIO标记的hUCMSC-EVs处理),共聚焦显微镜观察细胞对DIO标记的hUCMSC-EVs的内吞情况。另将BEAS-2B细胞分为3组:对照组、HDM组(HDM处理)、HDM+EVs组(HDM+hUCMSC-EVs处理),蛋白质印迹法检测细胞中E-cadherin和ZO-1表达。结果:hUCMSC-EVs呈杯托样膜性结构且表达HSP70和TSG101。与HDM组相比,HDM+EVs组小鼠气道炎性评分、PAS评分、BALF中总细胞和嗜酸性粒细胞数、IL-4和IL-13含量均显著下调(P均<0.01),而肺脏组织中E-cadherin和ZO-1表达明显增加(P<0.05)。体外实验显示hUCMSC-EVs可被人支气管上皮BEAS-2B细胞内吞;与HDM组相比,HDM+EVs组BEAS-2B细胞中E-cadherin和ZO-1表达明显增加(P<0.01或<0.05)。结论:hUCMSC-EVs可显著改善HDM诱导的小鼠气道周围炎性细胞浸润和气道杯状细胞化生。

脂肪间充质干细胞来源的胞外囊泡治疗急慢性肝损伤研究进展

肝病包括急性肝衰竭(ALF)、慢性肝病以及终末期肝病等,各类肝病极大危害了人类健康,目前ALF和终末期肝病治疗的金标准仍是肝移植,但受到供肝短缺、免疫排斥、终身免疫抑制治疗等限制,急需寻找新的替代疗法。间充质干细胞(MSCs)具有强大的增殖能力与多向分化潜能,可以减轻肝损伤、修复肝组织,具有良好的应用前景。

基于胞外囊泡治疗诊断学智能药物递送工具

胞外囊泡(EVs)作为细胞外的膜颗粒,在细胞间信号传导中起着至关重要的作用。研究表明,EVs有可能用作特定器官(如内耳)的生物标志物或药物递送系统。在压力与健康状态下,EVs释放的分子不同,这些活性分子能够识别机体的患病状态。研究表明,可以利用EVs将药物输送到难以到达的器官,如耳蜗感觉毛细胞和大脑,因为它们能够穿过血迷路和血脑屏障。在本综述中,我们总结了有关EVs的生物组成和发生、分离技术、表征手段、作为药物输送载体的潜在治疗应用、药物加载方法及在听觉系统内耳治疗的应用潜力。

植源性和乳源性胞外囊泡对慢性炎症的调控机制

胞外囊泡(EVs)是由动、植物细胞所分泌的一种囊泡复合体,富含不同种类脂质、蛋白质和RNA等活性组分,使其具有多种生理活性。炎症是机体在外界刺激下所表现出的一种免疫反应,当促炎因子和抗炎因子比例失衡时,机体会表现为慢性炎症。研究表明,植源性EVs中的外泌体样纳米囊泡(ELNs)和乳源性EVs因内含不同种类活性组分,故可通过抑制促炎细胞因子的分泌,上调抗炎因子及免疫细胞因子的表达,延缓机体慢性炎症反应及相关炎症性疾病的发生。基于此,本文归纳多种植源性ELNs和乳源性EVs的提取及表征方法,重点探讨植源性ELNs和乳源性EVs对机体炎症的调控作用,即从抑制核因子-κB(NF-κB)、氧化应激及相关丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路传导,调节肠道微生物组成及促进肠道干细胞生长,调控巨噬细胞相关通路的传导等方面进行综述,为植源性ELNs和乳源性EVs生物活性相关研究提供借鉴。

间充质干细胞来源的胞外囊泡治疗新生儿支气管肺发育不良的研究进展

支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)是早产儿的慢性肺部疾病,尤其是极早产儿(出生胎龄小于32周)最常见的并发症。尽管围产期救治及护理取得了进步,但现代临床管理仍然缺乏专门促进肺修复和肺生长的疗法。间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是一类具有多向分化潜能的干细胞,其最新进展揭示了干细胞/祖细胞修复受损器官的前景。但MSCs本身存在的临床风险导致其无法实现更加广泛的应用。研究表明,在BPD动物模型中,MSCs来源的细胞外囊泡(MSCs-derived extracellular vesicles,MSC-EVs)可以通过下调纤维化因子、减轻炎症反应、促进血管生成、抗细胞凋亡、抗氧化应激等途径促进肺血管生成和肺泡的发育,减少肺动脉高压和炎症,在BPD肺损伤修复中发挥重要作用。本文主要综述了MSC-EVs治疗早产儿BPD的有潜力的临床前证据及可能机制,为今后其在BPD的临床应用提供新的治疗思路。

用于炎症治疗的磷脂酰丝氨酸修饰胞外囊泡纳米递药系统的初步构建与评价

目的:初步构建与评价递送槲皮素(quercetin,Que)的磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)修饰的巨噬细胞源的胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)纳米载体(PS-EVs@Que),并研究PS-EVs@Que在炎症治疗中的作用。方法:利用超速离心法从巨噬细胞提取EVs,采用超声法将Que载入EVs中(EVs@Que),最后将PS加入EVs@Que溶液中孵育后制备得到PS-EVs@Que,并对其形貌、粒径、载药量和包封率进行制剂学评价;通过免疫荧光观察EVs及PS修饰的EVs的细胞摄取情况。分别设置LPS组、LPS+EVs@Que组、LPS+PS-EVs@Que组以及对照组作用于巨噬细胞,蛋白质印迹实验检测巨噬细胞表面标志物iNOS的表达情况;ELISA法检测炎性因子TNF-α与IL-6的表达情况。结果:制备得到的PS-EVs@Que呈类圆形囊泡结构,平均粒径为(118.45±0.97)nm,载药量为(8.59±0.16)%,包封率为(20.08±0.52)%。摄取结果表明,PS的修饰使EVs更好地被巨噬细胞吞噬,增强了巨噬细胞对EVs的摄取。与其他组相比,PS-EVs@Que组巨噬细胞iNOS蛋白表达减少(P<0.01),并且炎症因子TNF-α及IL-6的表达也受到了明显抑制(P<0.01)。结论:本研究成功构建了一种纳米药物递药系统,其能提高Que的生物利用度,抑制巨噬细胞的促炎M1表型极化,降低促炎因子的分泌,为新型纳米药物治疗炎症疾病提供了参考。

不同乳腺癌细胞株胞外囊泡特性和差异miRNA自噬通路靶基因分析

目的 研究不同乳腺癌细胞株EVs特性和所含miRNA的数量和功能差异。方法 采用无血清培养基对正常乳腺上皮细胞HMEC和乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MCF-7进行培养,通过纳米粒径分析对胞外囊泡颗粒大小和含量分布,利用投射电镜观察胞外囊泡形态,采用Western bolt检测胞外囊泡膜蛋白标记物CD63。通过转录组测序对胞外囊泡中miRNA进行差异分析,利用GO和KEGG分析差异miRNA靶基因。结果 通过多峰粒径分析显示,HMEC与MDA-MB-231、MCF-7胞外囊泡粒径分布、含量有所不同。三株细胞均可检测到具有典型特征胞外囊泡和标记物CD63的表达。HMEC、MCF-7、MDA-MB-231胞外囊泡中共有已知miRNA分别为613、333、698个。以HMEC为对照,进行差异比较分析发现,MCF-7的胞外囊泡中显著上调和下调的miRNA分别为108个和86个,MDA-MB-231的胞外囊泡中显著上调和下调的miRNA分别为135个和246个。GO和KEGG富集分析发现差异miRNA的靶基因涉及多种生物学功能,尤其细胞自噬。结论 不同乳腺癌细胞株胞外囊泡从直径、数量分布、所含miRNA都与正常乳腺上皮细胞存在差异,不同乳腺癌细胞株之间也存在差异。乳腺癌细胞株胞外囊泡的差异miRNA可能对其自身或作用的靶细胞的自噬水平产生不同影响,其机制有待进一步研究揭示。

间充质干细胞来源的胞外囊泡通过装载miR-375对结直肠癌发生的影响机制

目的探究间充质干细胞来源的胞外囊泡通过装载miR-375对结直肠癌发生的影响机制。方法分离培养并鉴定结直肠癌组织中间充质干细胞,从间充质干细胞中分离并鉴定胞外囊泡。将胞外囊泡装载miR-375过表达模拟物,qRT-聚合酶链反应(PCR)检测细胞中miR-375的表达情况。培养结直肠癌细胞系SW480,将胞外囊泡和SW480细胞共培养。双荧光素酶报告分析miR-375和同源框蛋白(HOX)A3的靶向关系。qRT-PCR检测共培养后,细胞中miR-375和HOXA3 mRNA的表达情况。Western印迹检测HOXA3蛋白的表达情况。对细胞分别进行miR-375和HOXA3过表达处理,CCK-8法、Transwell实验分别检测各组细胞增殖和侵袭能力变化情况。流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果成功分离间充质干细胞来源的胞外囊泡,并将miR-375过表达模拟物装载至胞外囊泡。miR-375可靶向负调控HOXA3的表达。过表达miR-375后抑制SW480细胞增殖、侵袭,促进细胞凋亡,而过表达HOXA3则会促进SW480细胞增殖、侵袭,抑制细胞凋亡,且过表达HOXA3后,会阻断miR-375对SW480细胞增殖和侵袭的抑制作用及对细胞凋亡的促进作用。结论间充质干细胞来源的胞外囊泡通过装载miR-375,进入结直肠癌细胞后,通过靶向抑制HOXA3的表达,进而抑制结直肠癌细胞增殖、侵袭,并促进细胞凋亡。

间充质干细胞来源小胞外囊泡对视网膜光损伤的治疗作用及其机制

目的研究间充质干细胞(MSCs)来源小胞外囊泡(sEVs)对小鼠视网膜光损伤的作用及其可能的机制。方法人脐带来源MSCs采用流式细胞术鉴定表面标记蛋白,收集第3~5代MSCs培养上清,超速离心收集sEVs并采用透射电子显微镜鉴定形态。将65只清洁级8~10周龄健康雌性BALB/c小鼠按照随机数字表法随机分为正常组(17只)、磷酸盐缓冲液(PBS)组(24只)和sEVs组(24只)。PBS组和sEVs组小鼠右眼玻璃体腔分别注射2μl PBS和2μl sEVs后,在蓝光照度930 lx的环境下照射6 h;正常组小鼠不做处理。分组处理后3 d,采用苏木精-伊红染色观察视网膜结构,原位末端转移酶标记(TUNEL)染色进行凋亡细胞计数,视网膜电图(ERG)检测小鼠视网膜功能,mRNA转录组测序技术检测PBS组与sEVs组小鼠视网膜mRNA表达差异情况,并进行差异基因KEGG聚类分析,实时荧光定量PCR法进一步验证差异基因表达。结果培养的MSCs中CD90、CD105表达阳性,而CD34、CD45表达阴性,提取的MSC-sEVs呈直径为80~140 nm的双层膜囊泡结构。苏木精-伊红染色结果显示,PBS组小鼠视网膜外核层细胞核排列紊乱,sEVs组视网膜结构紊乱程度轻于PBS组。sEVs组视网膜凋亡细胞计数为(14.60±4.04)个/视野,少于PBS组的(24.00±8.52)个/视野,差异有统计学意义(t=2.37,P<0.05)。sEVs组ERG a波振幅为(64.38±16.70)μV,高于PBS组的(16.78±6.37)μV,差异有统计学意义(P<0.05);PBS组和sEVs组b波振幅分别为(132.40±39.41)μV和(154.86±34.08)μV,明显低于正常组的(338.38±27.41)μV,差异均有统计学意义(均P<0.05)。mRNA测序共发现差异表达基因110个,其中sEVs组下调基因109个。KEGG聚类分析结果提示,差异基因主要集中于炎症性疾病、免疫相关信号通路。PCR结果显示,sEVs组视网膜中趋化因子配体2、趋化因子受体2、白三烯B4、白细胞免疫球蛋白样受体A6和白细胞介素1β的mRNA相对表达水平低于PBS组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论MSC-sEVs可以减轻蓝光造成的视网膜结构和功能损害,这种保护作用可能是通过抑制炎症反应来实现的。

丁酸梭菌及其胞外囊泡对结肠炎小鼠肠道真菌菌群结构的影响

本试验旨在研究丁酸梭菌及其胞外囊泡对小鼠结肠炎的缓解作用以及对肠道真菌结构的影响。试验选用8周龄雄性C57BL/6J小鼠24只,随机分为4组,每组6只。Control组、DSS组、CB组和EV组分别给予正常饮水并灌胃200μL/d生理盐水、3%葡聚糖硫酸钠(DSS)饮水并灌胃200μL/d生理盐水、3%DSS饮水并灌胃200μL/d丁酸梭菌溶液(5×108CFU/mL)、3%DSS饮水并灌胃50μg/d丁酸梭菌胞外囊泡(溶于200μL生理盐水),7 d后各组饮水均换为正常饮水。于第11天停止灌胃,对小鼠进行眼球取血,收集血清,测定炎症因子含量;随后麻醉处死小鼠,解剖后收集结肠组织及其内容物,进行组织病理学分析和真菌测序分析。结果显示:1)相对于Control组,DSS组小鼠血清中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和脂多糖(LPS)的含量显著提高(P<0.05),白细胞介素-10(IL-10)的含量显著下降(P<0.05)。相对于DSS组,CB组和EV组小鼠血清中IL-6、TNF-α和LPS的含量显著下降(P<0.05),IL-10的含量有所提高(P>0.05)。2)经DSS处理的小鼠结肠真菌菌群操作分类单元(OTU)数量、Chao1指数和Shannon指数较Control组显著增加(P<0.05),而灌胃丁酸梭菌或其胞外囊泡使结肠炎小鼠结肠真菌菌群的OTU数量和Chao1指数减小,趋于Control组。在门水平上,DSS处理小鼠结肠中子囊菌门(Ascomycota)的相对丰度下降,担子菌门(Basidiomycota)的相对丰度增加;在属水平上,DSS处理小鼠结肠中哈萨克斯坦酵母属(Kazachstania)的相对丰度下降,枝孢菌属(Cladosporium)、锥盖伞属(Conocybe)和青霉菌属(Penicillium)的相对丰度增加,而灌胃丁酸梭菌或及其胞外囊泡能使这些真菌门和真菌属的相对丰度趋于正常。3)斯皮尔曼相关性分析发现,DSS诱导的结肠炎小鼠结肠中暗梗单孢霉属(Chloridium)、帚霉属(Scopulariopsis)、Conocybe和丝孢菌属(Scedosporium)的相对丰度与血清中IL-6、TNF-α和LPS的含量呈显著或极显著正相关(P<0.05或P<0.01),与血清中IL-10含量呈极显著负相关(P<0.01);而结肠中Kazachstania的相对丰度与血清中IL-6、TNF-α和LPS的含量呈显著或极显著负相关(P<0.05或P<0.01),与血清中IL-10的含量呈极显著正相关(P<0.01)。综上所述,丁酸梭菌及其胞外囊泡能通过调节小鼠的肠道真菌菌群结构对DSS诱导的肠道黏膜损伤和炎症产生缓解作用。

间充质干细胞来源的胞外囊泡在急性肺损伤治疗中的研究进展

急性肺损伤(ALI)是一种病情危重的临床综合征,临床特征是进行性呼吸衰竭和顽固性低氧血症,可发展为高致命性急性呼吸窘迫综合征(ARDS)。尽管对ALI的病理生理学和治疗进行了广泛的研究,但临床上尚缺乏有效的ALI治疗防治方法。间充质干细胞(MSCs)因其分化潜力和低免疫原特性,逐渐被研究用于治疗ALI。MSCs的治疗作用部分是通过释放细胞外囊泡(EVs)发挥作用的,MSC-EVs包含多种mRNA、miRNA、细胞因子和蛋白质等物质,可以促进受损组织的修复和再生,且MSC-EVs免疫排斥性低、易于储存和安全性较高,在ALI的治疗和防治中具有潜在的应用前景。本文主要对MSC-EVs的生物学特性、治疗ALI的作用机制和临床试验的最新进展予以综述,以望MSC-EVs成为ALI未来治疗的新策略。

外源添加胞外囊泡对海假交替单胞菌生物被膜形成及厚壳贻贝附着的影响

为探究胞外囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)对海假交替单胞菌(Pseudoalteromonas marina)生物被膜形成及厚壳贻贝(Mytilus coruscus)(壳长为0.88 mm±0.16 mm,壳高为0.55 mm±0.12 mm)稚贝附着的影响,从海假交替单胞菌中提取并纯化了OMVs,并添加到海假交替单胞菌中共同孵育形成生物被膜,在OMVs终质量浓度为0.1、1、10、20μg/mL时检测形成的生物被膜对贻贝稚贝附着的诱导作用。结果表明:在海假交替单胞菌中成功提取到了OMVs,从菌体中提取获得的OMVs较上清液中更多;添加10μg/mL的OMVs时,形成的生物被膜对贻贝稚贝的附着诱导活性最高,稚贝附着率达到56.42%;随着OMVs添加量的增加,细菌密度和膜厚呈增长趋势,胞外产物中α-多糖、β-多糖、脂质和蛋白质含量呈升高趋势;相关性分析显示,生物被膜中的脂质含量与贻贝附着显著相关(P<0.05)。研究表明,OMVs的添加可促进海假交替单胞菌生物被膜形成,提高生物被膜胞外产物的含量,并推测主要通过增加脂质含量提高生物被膜对贻贝附着的诱导能力。

凋亡胞外囊泡在炎症与肿瘤发生、发展中的作用研究进展

凋亡胞外囊泡(Apo-EVs)是凋亡细胞分解释放的一类细胞外囊泡。近年来,相关研究发现Apo-EVs作为凋亡细胞的代谢产物,依赖体内凋亡程序启动后肌动蛋白参与细胞膜及其内容物的重新分配,表达凋亡细胞特有信号,并携带供体细胞内容物,通过细胞-细胞间信号传递,参与细胞凋亡与再生、免疫调控、肿瘤免疫微环境重塑等过程。本文就Apo-EVs的结构、生物形成过程、生物学功能及其在炎症与肿瘤发生、发展中的作用研究进展作一综述。