产胞外淀粉酶枯草芽孢杆菌的分离筛选及其紫外诱变育种

为提高枯草芽孢杆菌产生淀粉酶能力,从养虾池、混养池及污染河流的底质活性污泥中分离到12株枯草芽孢杆菌,通过淀粉降解试验筛选到产酶能力较高的菌株H4和H5,菌株淀粉酶活性分别为38.66,37.10 U/mL。以筛选到H4和H5为原始菌株,采用紫外诱变的方法对H4和H5进行连续诱变筛选产淀粉酶高的突变株。结果发现,第一次诱变后突变株的酶活分别为原始菌株的107%和111%;经过第二次诱变后,H4的突变株H4Ⅱa,H5的突变株H5Ⅱa和H5Ⅱb的产酶能力有很大程度的提高,分别为原始菌株的147%,136%和135%,酶活达56.95,50.47和50.02 U/mL,说明紫外连续诱变有利于突变株产酶能力的提高。

嗜盐古菌CY产胞外淀粉酶的培养基优化

在嗜盐古菌通用的MGM培养基的基础上,通过改变碳氮源对Halorubrum sp.CY产胞外淀粉酶的培养基进行了优化。以产胞外淀粉酶活性的大小确定产酶的最优碳氮源以及最适碳氮源浓度,从而确定CY菌株产胞外淀粉酶的最优培养基成分及最佳浓度。结果显示,其产酶最优碳氮源及浓度分别为1.5 g/L麦芽糖、4.0 g/L色氨酸。经优化后,酶活力达到15.80 U/mL,较原培养基的产酶活力提高了54.14%。这为嗜盐古菌胞外淀粉的大规模生产发酵提供了支持。

嗜盐菌Haloferax mediterranei R4胞外淀粉酶的研究

HaloferaxmediterraneiR4是从地中海分离得到的一株极端嗜盐古生菌,属于富盐菌属(Haloferax)。该菌在适当条件下可以产胞外淀粉酶,此酶需要高浓度NaCl维持其活性及稳定性,在NaCl浓度为2～5mol·L-1时维持较高活性。在NaCl浓度为3mol·L-1时该酶的最适反应pH为6.0～7.0,最适反应温度为50℃,且最适反应温度与NaCl浓度有一定的相关性。Ca2+对酶反应活性有影响。用KCl代替NaCl,该酶可以保留约50%活性,而用Na2SO4代替NaCl则完全失活。

嗜盐古菌Halorubrum sp. CY的分离、鉴定及胞外淀粉酶特性初步研究

本研究从云南一平浪盐矿分离到一株产胞外淀粉酶的嗜盐古菌,通过形态观察,生理生化特性实验,并结合16SrRNA序列分析,初步鉴定为嗜盐古菌Halorubrum属,命名为Halorubrum sp.CY。另外对该菌产生的胞外淀粉酶的性质进行初步研究,结果显示其胞外淀粉酶发挥最大活性的pH值和温度分别为6.0和60oC,Zn2+、Cu2+、Al3+、SO32?对胞外淀粉酶的活性有抑制作用,而Mn2+则有促进作用。

腐植酸钠对杏鲍菇菌胞外淀粉酶和胞外蛋白酶活力的影响

胞外淀粉酶和胞外蛋白酶是真菌进行胞外消化的主要催化酶,对杏鲍菇的营养吸收具有十分重要的作用。通过向液体培养基和固体培养基中添加腐植酸钠,观察其对杏鲍菇菌胞外酶活性的影响,为杏鲍菇生产提供理论依据。腐植酸钠对杏鲍菇胞外淀粉酶和胞外蛋白酶有显著的促进作用,当培养基中腐植酸钠含量为0.08%时胞外淀粉酶活力达到最高,比对照组提高了287%;当培养基中腐植酸钠含量为0.05%时胞外蛋白酶活力达到最高,比对照组提高了555%。

古菌Pyrococcus furiosus嗜热α-淀粉酶基因在酿酒酵母中的表达

用PCR方法从嗜热古菌Pyrococcusfuriosus的基因组DNA中扩增出胞外α 淀粉酶成熟肽结构基因 ,插入 pUC19中构建成质粒 pUC19 amy。将 pUC19 amy外源片段接入酿酒酵母表达载体 pYX2 12多克隆位点 ,构建成载体 pYX2 12 amy ,电转化酿酒酵母W 30 3 1A。转化子成功表达出有活性的高嗜热α 淀粉酶。重组酶具有与P furiosus产生的胞外α 淀粉酶相似的酶学性质 :最适 pH为 5 0 ,最适温度约为 90℃ ,在 12 1℃下热处理 30min酶活仍能保持 5 0