蜜环菌胞外漆酶的合成、纯化及性质研究

研究了蜜环菌胞外漆酶合成条件和酶学性质。实验表明 ,培养基初始pH5 .5、培养温度 2 5℃有利于菌株产酶 ;与麦芽糖、山梨糖和半乳糖相比 ,纤维二糖和棉子糖作为碳源时漆酶产量更高 ;有机氮源比无机氮源有利于漆酶合成。泥炭提取液可显著诱导漆酶生成 ,当其含量为 5 0 %时 ,菌株漆酶最高产量是对照组的 7倍。在蜜环菌发酵上清液中检测到 3个漆酶同功酶组分 ,其主要活性 (约占 75 % )组份漆酶A经 (NH4) 2 SO4沉淀、制备级PAGE电泳和阴离子交换柱层析被分离纯化至电泳均一 ,SDS PAGE法测得酶亚基分子量 5 9kD ,凝胶过滤色谱法测定活性酶分子量 5 8kD。纯化的漆酶A等电点pI为 4.0 ,氧化愈创木酚的最适反应pH为 5 6 ,最适温度为 6 0℃ ,在 6 0℃和6 5℃时半衰期分别为 45min和 36 8min ,在pH5 2～ 7 2范围内稳定性较好。 10 0mmol LCl- 对该酶有显著抑制作用 ,1mmol LSO2 -4 对漆酶有激活作用 ,1mmol LNaN3 可完全抑制酶活性 ,10mmol LEDTA对漆酶活没有明显影响 ,1mmol LCu2 +对漆酶有激活作用。以愈创木酚为底物时 ,测得酶的Km =1 0 2 6mmol L ,Vmax=5 μmol (min·mg) ;以ABTS为底物时 ,测得其Km=0 2 2mmol L ,Vmax=6 9μmol (min·mg)。

红栓菌胞外漆酶的诱导、纯化及部分特性研究

红栓菌(pycnoporus cinnabarius)在发酵培养3d后出现胞外漆酶活性峰。木素类似物对红栓菌胞外漆酶活性有诱导作用,阿魏酸、香兰素,愈创木酚和DL-β-苯丙氨酸诱导24h后,发酵液中漆酶活性分别是对照的2.8、4.3、3.5和1.7倍。发酵液经(NH_4)_2S0_4沉淀,Sephadex G-150、DEAE-Sephadex A-25、Sephadex G-25柱层析纯化后,冷冻干燥。高效液相色谱(HPLC)检测为一单峰,分子量为26000,含17种氨基酸,氨基酸总量占酶组成的64.27％。等离子光谱(ICP)分析表明漆酶含有铜。该酶反应的最适温度为30℃,与邻联苯甲胺反应最适pH为4.0,Km值为385μmol/L;与丁香醛连氮反应最适pH为5.8,Km值为833μmol/L。

彩绒革盖菌CV-8胞外漆酶的诱导、纯化及部分性质研究

为探讨彩绒革盖菌(Coriolus versicolor)漆酶的生产条件和性质,对其进行了硫酸铵盐析、半透膜透析、DEAE-纤维素离子交换、Sephadex G100柱层析纯化,粗酶液被纯化36.1倍,比活力10180u/mg,回收率44.6%。凝胶过滤法测定酶的分子量为62kDa。研究了漆酶的产酶曲线及酶作用最适条件。结果表明在该培养条件下,彩绒革盖菌第11d达产酶高峰,峰值酶活为398u/ml,酶作用的最适pH值为4.6,最适温度为25℃,Mg2+、Mn2+、Cu2+对漆酶有激活作用,而Ag+、Fe3+和Cl-则抑制漆酶活性。以邻联甲苯胺为底物的表观Km值为892×10-3mol/L。该菌可作为木质素降解和环保工业漆酶生产菌种。

白腐菌混合培养在胞外漆酶分泌上的种属互惠性

香菇、平菇、灵芝既是著名的食用菌 ,也是研究得相当广泛的白腐菌。香菇A3、平菇B2、灵芝KG菌株间两两混合培养 ,在胞外漆酶分泌状况上表现了较好的种属互惠性。研究结果显示 :A3+B2、B2 +KG的混合培养体系表现了漆酶峰值提高、峰面积增大的优势 ,其中峰值情况为A3第 12d达 2 0 0单位 /g ,B2第 6d达 6 0 6单位 /g、KG第 10d达 5 76单位 /g ,A3+B2第 8d达 72 8单位 /g、B2 +KG第 12d达 2 16 5单位 /g ;A3+KG的混合培养也在后、末期表现优于相应单株纯培养的漆酶状况。实验表明 ,不同种属白腐菌株混合培养对体系的漆酶分泌存在重要影响。

Paecilomyces sp. S152胞外漆酶的合成调控

探索了不同碳氮源营养条件下,Paecilomyces sp.S152胞外漆酶的分泌情况,发现麦芽糖(20 g/L)、大豆蛋白胨(10 g/L)及酵母粉(1 g/L)最适于Paecilomyces sp.S152胞外漆酶的合成,发酵7～8 d后,漆酶酶活达到5064 U/L。研究发现Paecilomyces sp.S152漆酶在细胞内及细胞外均有分布,添加1.5 g/L的Tween 80可促进胞内漆酶的释放,提高胞外漆酶酶活,缩短发酵周期(6 d),生产强度提高至946 U/(L·d)。

三色革裥菌胞外漆酶纯化及部分动力学性质测定

采用两种不同的介质组合对三色革裥菌(Lenzites tricolor)胞外漆酶进行分离纯化,第一种组合方式为:(NH4)2SO4盐析,透析,聚乙二醇(PEG20000)浓缩,SephadexG-150柱层析(1.6cm×60cm),DEAE-Sepha-dexA-25离子交换层析(2.6cm×40cm);第二种组合方式为:(NH4)2SO4盐析、透析、超滤浓缩、DEAE-Sepha-roseFF离子交换层析(1.6cm×60cm)、SephadexG-75凝胶层析(1.6cm×60cm)。测定结果表明,第二种组合方式较高效、合理。该漆酶反应活力最高时温度为60℃、最适pH值为4.6。所测试浓度下,Fe2+、Fe3+、硫脲、叠氮化钠和二硫苏糖醇对漆酶活性有一定抑制作用;Ca2+、乙二氨四乙酸及其二钠盐对漆酶活性具明显的促进作用。氧化丁香醛连氮的米氏常数Km值为43.4μmol/L。

天麻提取物及其3种主要成分对灰树花产胞外漆酶和菌丝体的影响

以天麻提取物为外源添加物,加至灰树花液体深层发酵体系中,通过外源诱导实验,考察天麻提取物对灰树花液体发酵产菌丝体及胞外漆酶的影响,并进一步重点研究起显著影响作用的关键成分。研究表明,天麻提取物及单一成分天麻素(gastrodin,GA)、对羟基苯甲醛(p-hydroxylbenzaldehyde,HBA)、对羟基苯甲醇(p-hydroxybenzyl alcohol,HA)均对灰树花菌丝体和胞外漆酶活力有显著的促进作用。结果显示,当添加3 g/L的天麻醇提物时,对灰树花菌丝体生物量和胞外漆酶活力有最大的促进作用,与对照组相比,分别提高了1.62倍和7.41倍(P<0.05)。同时,利用高效液相色谱对3 g/L天麻醇提物中的GA、HBA、HA含量进行分析,以相应量添加到灰树花发酵体系中。结果表明,HA和HBA均能显著提高灰树花漆酶活力和菌丝体生物量,与添加3 g/L天麻醇提物实验组相比,添加HA使酶活力提高10.25%,生物量增加9.17%。本研究可为中药提取物及成分促进真菌生长和产漆酶提供理论依据。

鉴定侧耳属种的方法──胞外漆酶同工酶和单孢配对亲和性测定

对侧耳属８个形态种及待定种名的１８个菌株的胞外漆酶（ＥＣＬ）同工酶进行了测定，其中的５个形态种及待定种名的３个菌株也分别进行了单孢配对亲和性测定。结果表明糙皮侧耳、美味侧耳、白黄侧耳、佛罗里达侧耳４个形态种的ＥＣＬ同工酶酶谱相同，而凤尾菇、金顶侧耳、桃红侧耳、盖囊侧耳４个形态种有各自特定的ＥＣＬ同工酶谱；从单孢配对行为分析，糙皮侧耳、美味侧耳、白黄侧耳和佛罗里达侧耳为同一可交配群体，其性因子基因型多至１１对复等位基因（Ａ１Ｂ１—Ａ１１Ｂ１１），该群体杂交种显示杂种性状稳定；而凤尾菇与上述４个形态种都存在着生殖隔离。结果表明糙皮侧耳、美味侧耳、白黄侧耳和佛罗里达侧耳及１８个待定种名的菌株都应属于糙皮侧耳生物种群。文中还对侧耳属种的分类问题进行了讨论。

毛栓菌胞外漆酶的纯化及部分性质研究

毛栓菌胞外漆酶经盐析、透析、sephadexG75和G2 5四步纯化 ,粗酶液被纯化了 39 1倍 ,比活力 12 152 ,回收率 4 5 3%。漆酶最适pH值为 4 0 ,最适反应温度为 30℃。K+ Cu+ 2 、Zn2 + 离子可激活漆酶 ,而Ag+ 、Fe3+ 离子可抑制漆酶的活性。漆酶的Km值为 1 81× 10 3mol/L。

平菇胞外漆酶同工酶测定与鉴别

平菇是侧耳属食用真菌的俗称.据报道,侧耳属(Pleurotus)全世界育100多个种,我国约有20个种,其中糙皮侧耳、美味侧耳、佛罗里达平菇(F)、凤尾菇等已广为栽培.由于胞外漆酶(ECL)同工酶的表达与种分化相关(Wood 1979, kerrigan 1988),我们对收集到的40个菌株中的30个进行了胞外漆酶同工酶的测定,并结合子实体形态等性状对菌株进行鉴别.

碳、氮源对云芝胞外漆酶分泌的影响

研究了不同碳源、氮源对云芝漆酶分泌的影响。实验表明,淀粉和麸皮是最好的碳源,干酪素和大豆粉是最好的氮源。

安徽农业大学在胞外漆酶诱导腐殖化改善畜禽粪便堆肥终产物农艺质量研究方面取得重要进展

近日,国际高水平期刊《环境科学与技术》(中科院一区,IF_(2021)=9.028)刊发我校资源与环境学院与安徽大学资源与环境工程学院合作开展的题为“胞外漆酶诱导腐殖化在畜禽粪便堆肥中的应用研究”。该论文探索了胞外漆酶诱导腐殖化过程及维持酶活性和原位生产的优化策略,揭示了胞外漆酶在畜禽粪便(LM)堆肥中消除有毒微污染物和封存营养物质的关键机制。

不同化学物质对银耳孢子细胞膜通透性影响

为了提高外源基因表达胞外分泌水平,本研究通过测定不同化学物质对银耳孢子转化子细胞生物量、培养液电导率及胞外漆酶酶活的影响,探索不同化学物质对银耳孢子细胞膜通透性的影响。结果表明,浓度分别为1%、0.3%、0.2%和0.1%的二甲基亚砜、triton X‐100、氯化钾、两性霉素B均可显著提高电导率;同时银耳孢子胞外漆酶酶活分别提高至7.00U/L、6.67U/L、5.00U/L和5.00U/L,与对照达到显著差异。而表面活性剂(SDS)及有机溶剂(甲苯、戊二醛)则不利于银耳孢子的生长及漆酶的分泌。该研究结果显示,添加一定的化学物质对促进目标产物的外泌有较为明显的作用,这将为银耳孢子作为生物反应器高效表达外源基因提供科学依据。