小鼠血管内皮生长因子受体2胞外片段重组蛋白的制备及其初步应用

目的 :用基因工程方法获得小鼠VEGFR - 2 (Flk - 1)胞外段与配体结合区域的重组蛋白 ,并对其应用进行初步的探讨。方法 :将经PT -PCR扩增的目的序列组建到原核表达载体并诱导目的蛋白的表达 ,经纯化后的重组蛋白制备成疫苗 ,免疫兔 ,获得抗血清 ,用ELISA和Westernblot方法对抗血清进行分析。结果 :目的蛋白在原核表达系统中得到了高效的表达 ,该疫苗能刺激兔产生抗重组蛋白和天然Flk - 1的抗体。结论 :该抗血清可用于Flk - 1的免疫学检测 ,也为该疫苗用于抗肿瘤血管生成治疗奠定了基础。

鸡Tie-2受体胞外片段的原核表达及目的蛋白免疫原性的研究

目的 研究鸡 Tie- 2受体胞外片段 (配体结合域 )的原核表达以及目的蛋白对小鼠的抗原性。方法 用 PCR方法从既往构建的包含鸡 Tie- 2受体胞外段基因的表达质粒扩增目的片段 ,进而构建 PQE原核表达载体并诱导其目的蛋白的表达 ,将目的蛋白进一步纯化、复性并免疫小鼠 ,获得抗血清 ,用 EL ISA和 Western blotting检测抗血清中抗体的存在。结果 经酶切分析及测序鉴定表明获得了鸡 Tie- 2受体胞外目的片段的 PQE原核表达载体 ,能高效表达目的蛋白 ,将其免疫小鼠可产生抗重组蛋白的抗体。结论 用原核表达的方式可成功的获得鸡Tie- 2受体胞外目的片段的蛋白 。

人高密度脂蛋白受体胞外片段在甲醇酵母中的表达

高密度脂蛋白受体在胆固醇逆向运输中起重要作用 ,并且其可以做为动脉粥样硬化的新型治疗靶点。为了构建以竞争性受体 -配体相互作用为基础的体外高通量药物筛选模型 ,在甲醇酵母中表达了高密度脂蛋白受体胞外结构域。应用RT -PCR方法从人肝癌Bel- 740 2总RNA中扩增了编码高密度脂蛋白受体胞外结构域的基因片段 ,此基因片段经测序证实后亚克隆至甲醇酵母分泌表达质粒pPIC9K中。经测序验证读码框正确后将重组质粒电转至PichiapastorisGS115中。应用PCR方法确定目的基因的整合和Mut+ 表型。重组菌株用 1%甲醇诱导 5天后取发酵上清进行SDS -PAGE和Westernblot分析。结果表明 ,在分子量约 64 5kDa处有sHDLR表达。随后应用DiI-AcLDL为配体证明了表达的sHDLR具有结合其配体AcLDL的生物学活性。

Claudin-1胞外片段Cldn-1 50～80的作用在乳腺癌转移机制中的研究

目的观察Claudin-1在乳腺癌组织中的表达与临床病理特征的关系，探讨Claudin－1的胞外区Cldn-1 50～80片段在乳腺癌转移中的作用机制。方法（1）应用免疫组织化学技术检测108例乳腺癌标本中Claudin-1的表达情况，并分析其与乳腺癌淋巴结转移、TNM分期和分子分型间的关系；（2）在乳腺癌细胞株中掺入Cldn-1 50～80片段，应用Western blot技术检测紧密连接蛋白Claudiml、Claudin-2的表达。结果（1）以是否淋巴结转移、临床分期、分子分型等病理特征为依据分组中，Claudin-1的表达强度在淋巴结转移组（χ^2=6．279，P=0．012）、TNM分期Ⅲ、Ⅳ期（χ^2=7．419，P=0．024）及分子分型为Her-2过表达型（χ^2=10．830，P=0．013）组中显著降低，差异有统计学意义；（2）Cldn-1 50～80片段的掺入可导致乳腺癌细胞中紧密连接蛋白Claudin-1及Claudin-2的表达下降，在转移性高的乳腺癌细胞株MDA-MB-231中，这种抑制作用更为显著。结论紧密连接蛋白Claudin-1的表达降低与乳腺癌的进展和转移密切相关，而Cldn-1 50～80片段通过调控紧密连接蛋白的表达在乳腺癌细胞侵袭、转移过程中发挥重要作用。

血清HER2 ECD+VEGF+HE4对乳腺癌术后复发转移的诊断价值

目的比较血清人类表皮生长因子受体2胞外片段(HER2 ECD)、人附睾蛋白4(HE4)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)和HER2 ECD+VEGF+HE4在乳腺癌术后复发转移中的诊断价值,以期选择最佳的检测方法,提高检测乳腺癌术后复发转移的灵敏度。方法选取接受手术治疗的86例乳腺癌患者作为研究对象,其中,术后复发转移患者34例(复发组),术后未复发转移患者52例(未复发组);另选取同期体检的40例健康女性作为对照组。检测3组受试者的血清HER2 ECD、VEGF、HE4水平。以病理学诊断结果作为金标准,分析不同检测方法对乳腺癌术后复发转移的的诊断效能。结果复发组患者的血清HER2 ECD、VEGF、HE4水平均高于未复发组和对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05);未复发组患者的血清VEGF、HE4水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。血清HER2 ECD+VEGF+HE4联合检测乳腺癌术后复发转移的灵敏度为88.24%(30/34),特异度为86.54%(45/52),漏诊率为11.76%(4/34),误诊率为13.46%(7/52)。结论血清HER2 ECD+VEGF+HE4联合检测较三者单独检测能够提高对乳腺癌术后复发转移诊断的灵敏度,具有较高的临床诊断价值。

重组减毒沙门氏菌疫苗SL3261-pcDNA3．1+/flk-1_(n1-4)抗小鼠大肠癌的生长

目的:研究VEGFR2胞外1-4片段(flk-1_(n1-4))抑制肿瘤生长效应.方法:构建DNA疫苗SL3261-pcDNA3.1+/flk- 1_(n1-4),经ig饲服BALB/c小鼠,随机分为3组,疫苗组,载体对照组和NaHCO_3对照组.对小鼠进行基因免疫.ELISA检测小鼠血清中VEGF水平及特异性抗flk-1_(n1-4)-IgG抗体.流式细胞仪分析免疫小鼠淋巴细胞亚群.DNA疫苗免疫结肠癌荷瘤BALB/c小鼠,测量免疫后荷瘤小鼠肿瘤大小,检测肿瘤微血管密度.结果:免疫小鼠血清中VEGF水平明显降低,并产生高水平的抗flk-1_(n1-4)-IgG抗体.免疫后荷瘤小鼠CD4^+T、CD8^+T值维持较高水平,小鼠结肠腺癌皮下肿瘤生长与载体和NaHCO_3对照组相比明显受抑制,疫苗组小鼠肿瘤质量、体积、平均微血管密度与载体和NaHCO_3对照组相比明显降低(3.64±1.34g vs 8.40±0.66g,8.26±0.44g;2.62±0.54mm^3 vs 6.01±0.14mm^3,5.92±0.25 mm^3;2.06±1.02 vs 6.93±2.34.7.34±4.12;P<0.05).疫苗组小鼠中位生存期较两对照组明显延长.结论:flk-1_(n1-4)能够抑制肿瘤血管内皮细胞生长,达到抗大肠癌生长作用.

槐耳颗粒联合TEC新辅助化疗对中晚期乳腺癌患者疾病控制率及血清HER2-ECD、TAP水平的影响

目的探讨槐耳颗粒联合多西他赛+表柔比星+环磷酰胺(TEC)新辅助化疗对中晚期乳腺癌患者疾病控制率及血清人类表皮生长因子受体2胞外片段(HER2-ECD)、肿瘤异常蛋白(TAP)水平的影响。方法选取2013年4月至2016年6月中国医科大学附属盛京医院收治的中晚期乳腺癌患者94例进行前瞻性研究,以简单随机化法分为观察组(n=47)、对照组(n=47)。对照组予以TEC新辅助化疗,观察组予以TEC新辅助化疗联合槐耳颗粒治疗,均治疗12周。对比两组疗效、不良反应发生率与治疗前、治疗12周后细胞免疫功能指标(CD8+、CD4+、CD4+/CD8+)、血清HER2-ECD、TAP水平,治疗后随访3年,对比两组治疗后1年、2年、3年生存率。结果观察组治疗12周后疾病控制率高于对照组(P<0.05);治疗期间,观察组胃肠道反应、中性粒细胞减少、血小板减少、肝功能异常发生率低于对照组(P<0.05);观察组治疗12周后血清CD8+水平低于对照组,血清CD4+、CD4+/CD8+水平高于对照组(P<0.05);观察组治疗12周后血清HER2-ECD、TAP水平低于对照组(P<0.05);观察组治疗后3年生存率高于对照组(P<0.05)。结论槐耳颗粒联合TEC新辅助化疗治疗中晚期乳腺癌患者,可降低患者血清HER2-ECD、TAP水平,增强机体免疫功能,减轻毒副反应,提高远期生存率,疗效显著。