大黄素对豚鼠单个心室肌细胞胞浆游离钙浓度及L-型钙电流的影响

目的 研究大黄素 (emodin)对豚鼠心室肌细胞钙信号的影响。方法 酶解法分离豚鼠单个心室肌细胞 ,应用激光扫描共聚焦显微镜联合全细胞膜片钳技术测量豚鼠心室肌细胞钙信号的变化。结果 在静息状态下 ,1～10 0 μmol·L- 1 大黄素对 [Ca2 +]i 均无影响 ;对 6 0mmol·L- 1 KCl诱导的外钙内流引起的胞浆钙升高有不同的影响 ,1μmol·L- 1 表现为促进作用 ;10 μmol·L- 1 无作用 ;10 0 μmol·L- 1 则表现为抑制作用。膜片钳研究结果表明 ,1μmol·L- 1 大黄素可明显促进L 型钙电流 ,10 μmol·L- 1 对L 型钙电流无影响 ;10 0 μmol·L- 1 明显抑制L 型钙电流。结论 大黄素对心肌细胞内钙及L

呼吸衰竭患儿红细胞胞浆游离钙的观察

本文采用新型Ca^(2+)荧光指示剂Fura-2法,观察了16例呼吸衰竭患儿和20例健康对照儿红细胞胞浆游离钙浓度变化,结果显示患儿红细胞胞浆游离钙浓度明显高于健康对照儿(P<0.001)。9例抢救成活患儿恢复期红细胞胞浆游离钙浓度明显下降(与呼衰期比较,P<0.001)。机体严重缺氧或缺血缺氧可能是导致细胞内胞浆游离钙浓度异常升高的重要原因。

钩藤碱对家兔血小板聚集及胞浆游离钙离子浓度的影响

目的研究钩藤碱(Rhy)对兔血小板细胞内游离钙离子浓度及血小板聚集的影响。方法 56只雄性家兔的血样随机分为正常对照组,阿司匹林0.85,1.69和2.78 mmol.L-1组,Rhy 0.33,0.65和1.30mmol.L-1组。Born法测定血小板聚集率,双波长Fura-2荧光分光光度法测定血小板胞浆游离钙离子浓度([Ca2+]i)。结果与正常对照组ADP诱导的血小板聚集百分率(59.6±0.6)%相比,Rhy 0.33,0.65和1.30 mmol.L-1组血小板最大聚集百分率明显降低,分别为(35.4±7.7)%,(18.2±4.8)%和(6.9±0.9)%(P<0.05);Rhy 0.65和1.30 mmol.L-1对凝血酶诱导的血小板最大聚集率分别为(42.8±3.9)%和(18.9±5.5)%,明显低于正常对照组的(80.8±1.5)%(P<0.05)。有Ca2+存在的情况下,与正常对照组家兔血小板胞浆钙离子内流(528±25)nmo.lL-1相比,Rhy 0.33,0.65和1.30 mmol.L-1使血小板胞浆钙离子内流明显降低(P<0.05),分别为418±27,303±7和(257±25)nmol.L-1;ADP和凝血酶诱导后,对照组的血小板胞浆钙离子浓度分别为751±29和(982±50)nmol.L-1,Rhy 0.65和1.30 mmol.L-1作用后,ADP诱导的家兔血小板胞浆钙离子浓度分别降至620±37和(528±17)nmol.L-1(P<0.05),凝血酶诱导的家兔血小板胞浆钙离子浓度分别降至777±29和(658±23)nmol.L-1(P<0.05)。无胞外Ca2+情况下,Rhy对血小板胞浆钙离子浓度无影响。结论 Rhy抑制ADP和凝血酶诱导兔血小板聚集的作用机制与其抑制兔血小板钙离子内流,从而抑制血小板胞浆游离钙离子浓度升高有关。

丹参对肝星状细胞胞浆游离钙的影响

目的 研究丹参药物血清对肝星状细胞 (HSCs)胞浆游离钙 ([Ca2 + ]i)的影响。方法 制备肝纤维化模型鼠。造模毕 ,药物组以每天 2 0 m l/ kg剂量分 2次灌服丹参 ,对照组灌以等量生理盐水。连续给药 6 d后经下腔静脉取血并分离血清。采用盲法 ,用上述 10 %药物血清培养 HSCs2 4 h,再将经药物血清预处理的细胞及对照组细胞负载 Fluo- 3/ AM后使用激光扫描共聚焦显微镜 (L SCM)检测 [Ca2 + ]i。结果 1正常丹参药物血清及肝纤维化药物血清预处理后均可明显减低活化的 HSCs的 [Ca2 + ]i,其荧光强度相对值与病理模型对照组的差异有统计学意义 (P<0 .0 5 ) ;且两者与正常对照组的差异也有统计学意义 (P<0 .0 5 )。 2正常丹参药物血清预处理后加入血管紧张素 (Ang- ) ,[Ca2 + ]i荧光强度变化百分数显著低于病理模型对照组 (P<0 .0 5 ) ;肝纤维化药物血清组荧光强度变化百分数也显著低于病理模型对照组 (P<0 .0 5 )。结论 丹参能抑制肝星状细胞 [Ca2 + ]i的升高 ,可能是其发挥抗肝纤维化作用的重要途径之一。

脾虚大鼠胃壁细胞胞浆游离钙离子浓度及黄芪对其调节作用的研究

目的 :检测脾虚模型大鼠胃壁细胞胞内 [Ca2 +]i及黄芪对 [Ca2 +]i的调节作用。方法 :SD大鼠用大黄造成脾虚模型 ,并用黄芪注射液治疗 4日 ,用Fura 2 /AM荧光分光光度法检测壁细胞静息状态下和胃泌素刺激下 [Ca2 +]i。结果 :脾虚模型大鼠壁细胞静息状态下 [Ca2 +]i明显低于正常大鼠 ,胃泌素刺激后 [Ca2 +]i升高幅度亦明显低于正常组 ;脾虚黄芪治疗组大鼠静息状态下[Ca2 +]i有一定升高 ,胃泌素刺激下黄芪治疗组壁细胞 [Ca2 +]i升高幅度明显高于模型组并与正常组比较无明显差异。结论 :脾虚大鼠胃壁细胞静息状态下和胃泌素刺激下 [Ca2 +]i明显低于正常大鼠 ,说明脾虚证时壁细胞功能处于一种低代谢状态 ,推测胞内钙库容量可能降低 ,而且壁细胞表面胃泌素受体数下调或 /和功能下降 ,不能正常介导胞外信号。黄芪能够使低下的胞内代谢水平有一定程度恢复 ,胞内钙库容量有一定增大 ,并能使胃泌素受体数上调和 /或功能加强 。

国产温石棉对肺泡巨噬细胞胞浆游离钙的影响

利用Ｆｕｒａ２—ＡＭ钙荧光指示剂，探讨了茫崖及涞源温石棉在生理钙介质中对肺泡巨噬细胞胞浆游离钙的影响。结果表明，两种温石棉均可致胞浆游离钙浓度明显升高，并且具有时间及剂量依赖关系。在受试剂量范围内，两种温石棉对胞浆游离钙的影响无明显差别。经柠檬酸铝处埋后，两种温石棉对胞浆游离钙的干扰作用减弱。

亚低温对大鼠缺血再灌注海马区线粒体钙及胞浆游离钙的影响

目的探讨亚低温对脑缺血／再灌注（I／R）损伤的保护作用机制，为临床脑缺血患者亚低温治疗提供理论依据。方法采用改良线栓法建立局灶性大鼠大脑中动脉I／R模型，将健康Wistar大鼠随机分为假手术组、常温（36．0℃～37．0℃）缺血组、亚低温（32．0℃～33．℃0）缺血组，其中后两组又根据观察时间点不同分为缺血2h再灌注2、4、6h三个亚组，观察各时间点大鼠缺血侧脑海马区线粒体钙含量（[MCa]）及胞浆游离钙含量（[Ca^2＋]．）的变化。结果与假手术组比较，常温缺血组和亚低温缺血组各观察时间点缺血侧脑海马区[MCa]显著降低，而[Ca^2＋]；明显增高（P〈0．05）；与常温组比较，亚低温缺血组大鼠缺血侧海马区[MCa]显著增高，[Ca^2＋]；明显降低（P〈0．05）。结论亚低温能有效抑制I／R损伤后海马区神经元细胞的钙超载．恢复线粒体能量代谢，从而稳定线粒体贮钙功能。

原儿茶醛对人红细胞胞浆游离钙浓度的影响

目的观察丹参水溶性有效成分原儿茶醛对人红细胞胞浆游离钙浓度的影响。方法采用Fura-2定量分析法观测原儿茶醛对人红细胞胞浆Ca2+浓度的影响。结果原儿茶醛能够降低人红细胞胞浆Ca2+浓度,并呈剂量依赖性。结论丹参注射液增强红细胞变形能力的作用可能与其有效成分原儿茶醛降低红细胞胞浆Ca2+浓度有关。

重组人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体的溶栓作用及对血小板聚集和胞浆游离钙离子浓度的影响

目的 研究重组人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体(reteplase,Ret)的溶栓作用以及对离体家兔血小板聚集功能和对血小板静息状态胞浆内游离钙浓度的影响。方法 家兔血栓模型采用动-静脉旁路法,血小板聚集实验采用比浊法,血小板静息状态胞浆内游离钙浓度采用Fura-2荧光测定法。结果Ret(3.75×105,7.50× 105,15.0×105U·kg-1)对家兔动-静脉旁路所形成的血栓有明显溶栓作用,可明显减轻血栓干湿重量,并呈一定的剂量依赖性。Ret(1 000,3 000,10 000 U·mL-1)对ADP诱导的血小板聚集可产生浓度依赖性的抑制作用,并可明显降低血小板静息状态的[Ca2+]i,并呈一定的浓度依赖性。结论Ret具有明显的血栓溶解作用,可明显抑制ADP诱导的血小板聚集,并明显降低血小板静息状态的[Ca2+]i。

益肝康药物血清对大鼠肝星状细胞胞浆游离钙效应的抑制作用

目的研究益肝康药物血清是否具有抑制肝星状细胞(HSCs)胞浆游离钙([Ca2+]i)增高的作用。方法将32只健康雄性SD大鼠按随机数字表分为4组:肝纤维化模型益肝康组(8只)皮下注射用精制橄榄油配制的40%CCL4溶液9周,然后灌服益肝康6d;肝纤维化模型对照组(8只)皮下注射用精制橄榄油配制的40%CCL4溶液9周,然后灌服0·9%氯化钠溶液6d;正常大鼠益肝康组(8只)皮下注射等量精制橄榄油9周,然后灌服益肝康6d;正常对照组(8只)皮下注射等量精制橄榄油9周,然后灌服0·9%氯化钠溶液6d。结束后经下腔静脉取血并分离血清。用盲法,采用上述10%血清培养HSCs24h并负载好Fluo-3/AM后,使用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测HSCs[Ca2+]i。结果(1)经正常大鼠益肝康组及肝纤维化模型益肝康组大鼠血清预处理的HSCs,其[Ca2+]i荧光强度相对值均明显低于肝纤维化模型对照组(P<0·05);且两者与正常对照组间差别均有显著性意义(P<0·05)。结论益肝康能抑制肝星状细胞[Ca2+]i的升高,这可能是其发挥抗肝纤维化作用的重要途径之一。

应用Frua-2测定人腹腔巨噬细胞胞浆游离钙浓度

为了解子宫内膜异位症患者腹腔巨噬细胞活性变化，建立了应用Ｆｒｕａ－２测定人腹腔巨噬细胞胞浆游离钙浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）的方法。结果显示，正常盆腔患者腹腔巨噬细胞［Ｃａ２＋］ｉ为（１００．３２±５．６９）ｎｍｏｌ／Ｌ，而子宫内膜异位症患者腹腔巨噬细胞较正常盆腔者显著升高。

单纯性收缩期高血压患者心脏损害及其与细胞内胞浆游离钙的关系

目的 :探讨细胞内胞浆游离钙在单纯性收缩期高血压 (ISH)患者心脏损害中的作用。方法 :检测ISH患者 ,原发性收缩期、舒张期均增高之“经典”高血压患者及血压正常者细胞内胞浆游离钙浓度 ([Ca2 +]i) ,左心室重量指数 (LVMI)及左心室收缩和舒张功能。结果 :ISH患者和经典高血压患者均较血压正常者的 [Ca2 +]i和LVMI明显升高 ,左心室舒张功能明显下降 ,收缩功能参数无显著改变。ISH和经典高血压患者的 [Ca2 +]i与收缩压值和LVMI呈正相关。结论 :ISH患者与经典高血压患者同样存在严重的钙代谢紊乱及心脏损害 ,其心脏损害和高血压的发生可能与钙代谢紊乱有关 ,可考虑用钙离子拮抗剂作为ISH的一线药物治疗。

氨力农对培养乳鼠心肌细胞环核苷酸和胞浆游离钙的影响

国产氨力农使培养乳鼠心肌细胞环腺苷酸含量和胞浆游离钙浓度显著升高且呈剂量依赖性；普萘洛尔不能阻止氨力农所致的环腺苷酸含量上升。

活细胞胞浆游离钙的测定方法

人们早已认识到胞浆游离钙(〔Ca^(++)〕_i)是细胞内第二信使,但近十余年来才出现数种较可靠的〔Ca^(++)〕_i测定方法,由此大大提高了人们对〔Ca^(++)〕_i的研究能力。细胞静息时〔Ca^(++)〕_i只有10^(-7)～10^(-8)mol/L,细胞激活后〔Ca^(++)〕_i可迅速大幅度变化。因此,〔Ca^(++)〕_i测定方法应达到以下要求:①很高的灵敏度和较大的检测范围;

尼莫地平对缺氧缺血性脑病患儿红细胞胞浆游离钙及脑实质密度的影响

目的探讨缺氧缺血性脑病(HIE)患儿体内红细胞胞浆游离钙(RBC[Ca2+]i)水平的变化及尼莫地平治疗后对RBC[Ca2+]i及脑实质密度的影响及意义。方法将58例中、重度HIE随机分成HIE常规组(28例)和尼莫地平组(30例),以20例新生儿为健康对照组,尼莫地平组入院后在常规治疗的基础上给予尼莫地平治疗,连用10～14d。HIE患儿于治疗前、治疗3d和10～14d后各采集静脉血2ml,采用Fura-2/AM法检测RBC[Ca2+]i水平。HIE患儿均于生后第3～5d及10～14d行影像学检查。结果①HIE患儿RBC[Ca2+]i水平(2.81±0.43)显著高于对照组(2.15±0.18),P<0.01。HIE程度与患儿体内RBC[Ca2+]i水平有相关性。②HIE常规组和尼莫地平组患儿RBC[Ca2+]i水平于生后72h达到较高水平,然后逐渐恢复,至治疗10～14d后尼莫地平组患儿RBC[Ca2+]i水平(2.32±0.10)与HIE常规组(2.68±0.14)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。③尼莫地平组与HIE常规组在额叶皮质及枕叶皮质处CT值变化比较差异有统计学意义(P<0.01),在额叶髓质及基底神经节处差异无统计学意义(P>0.05)。结论RBC[Ca2+]i参与了HIE的病理生理过程,在HIE发病机制中可能起重要作用;尼莫地平能显著降低RBC[Ca2+]i水平,减轻脑损伤,且额叶皮质及枕叶皮质处脑实质密度恢复显著,提示尼莫地平对缺氧缺血性脑损伤具有保护作用;动态监测RBC[Ca2+]i水平可能有助于HIE的早期诊断和对预后的判断。

缺氧时单个肺动脉内皮细胞胞浆游离钙的动态变化

本室已测得缺氧使悬液状态肺动脉内皮细胞胞浆游离钙增加。而在体血管内皮细胞是以单层形式贴于血管内壁,故本实验进一步用双波长显微荧光测量系统观察单个贴壁肺动脉内皮细胞[Ca2+]i的动态变化。 1 材料与方法 1.1 肺动脉内皮细胞分离、培养及鉴定:猪肺动脉内皮细胞（PAEC）培养用胰酶消化法。倒置显微镜见细胞形态呈鹅卵石样,单层融合;间接免疫荧光示胞浆中存在Ⅷ因子相关抗原,证明为内皮细胞。

拉西地平对高血压患者脉压的影响及细胞内胞浆游离钙、血管紧张素Ⅱ的关系

目的 观察拉西地平对原发性高血压(EH)患者脉压的影响及淋巴细胞胞浆内游离钙浓度([Ca2+]i)、血管紧张素Ⅱ浓度([AT-Ⅱ])的关系.方法对68例高血压患者及性别年龄严格匹配的正常对照组口服拉西地平治疗,治疗前后检测上述指标.结果EH患者用拉西地平治疗后血压显著下降(p<0.001),脉压明显缩小(p<0.01).治疗前患者([Ca2+]i)和[AT-Ⅱ]比正常对照组显著升高(p<0.001,P<0.01),用拉西地平治疗后([Ca2+]i)和[AT-Ⅱ]显著下降(p<0.01,p<0.01),([Ca2+]i)下降幅度与收缩压下降幅度呈正相关(γ=0.876,p<0.001),([Ca2+]i)的下降幅度与[AT-Ⅱ]的下降幅度呈正相关(γ=0.647).结论拉西地平可降低细胞胞浆内钙浓度及血管紧张索Ⅱ浓度,在降低收缩压的同时,亦可缩小脉压.

原发性高血压患者淋巴细胞胞浆游离钙浓度及尼群地平治疗后的变化

本文检测了22例原发性高血压患者及相应的正常对照之淋巴细胞胞浆游离钙浓度,并观察尼群地平治疗两周后患者淋巴细胞胞浆游离钙浓度的变化。结果表明:原发性高血压患者治疗前淋巴细胞胞浆游离钙浓度显著高于正常对照组。尼群地平治疗后淋巴细胞胞浆游离钙浓度和血压均显著下降。淋巴细胞胞浆游离钙浓度的下降幅度与舒张压及平均动脉压的下降幅度均呈正相关,与收缩压的下降幅度无显著相关。提示原发性高血压患者淋巴细胞胞浆游离钙浓度增高。钙离子拮抗剂尼群地平可能通过降低细胞胞浆游离钙的浓度而降低血管平滑肌张力,发挥其降压作用。

ADP和CPA诱导的高血压病人血小板胞浆游离钙的变化

[目的]探讨高血压病人血小板胞浆游离钙浓度(cytoplasmic free Ca2+ concentration,[Ca2+]i)的变化。[方法]采 用Fura-2／Am荧光双波长测定[Ca2+]i技术,动态观察激动剂二磷酸腺苷(adenosine diphosphate,ADP)和环匹阿尼酸 (cyclepiazonic acid,CPA)对高血压病人血小板[Ca2+]i的影响。[结果]高血压病人静息血小板[Ca2+]i与正常人比较明显增高 (P<0.05);ADP和CPA激动的高血压病人的血小板平台钙与静息钙比较有统计学意义(P<0.05);峰位钙-平台钙的差 (既钙释放)与正常人比较明显增高(P分别<0.05和<0.01);平台钙-静息钙的差(既钙内流)与正常人比较无明显差异 (P>0.05)。[结论]高血压病人静息血小板[Ca2+]i增高,平台钙水平明显增高,血小板呈高反应状态;高血压病人的血小板 被ADP和CPA激活不能恢复至静息动状态;ADP和CPA激动的高血压病人的血小板钙释放增多,钙内流正常。

法舒地尔对肝星状细胞黏附、迁移及胞浆游离钙的影响及机制研究

目的观察法舒地尔(fasudil)通过Rho/Rho激酶(ROCK)信号转导通路对肝星状细胞(HSC)黏附、迁移以及胞浆游离钙([Ca2+]i)的影响。方法将培养的HSC分为5组:对照组;fasudil 12.5μmol/L组;fasudil 25μmol/L组;fasudil 50μmol/L组;fasudil 100μmol/L组。采用甲苯胺兰染色法测定细胞黏附率,Boyden Chamber小室测定HSC跨膜迁移数量,用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检验细胞[Ca2+]i,Western印迹检测HSC磷酸化肌球蛋白轻链〔phosphorylated myosin light chain,p-MLC(Thr18/Ser19)〕和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果Fasudil对HSC的黏附、迁移均具有抑制作用,随着浓度增加,抑制作用加强;fasudil与HSC共同培养后,HSC内[Ca2+]i无明显变化;fasudil抑制HSC的α-SMA表达,并且对Rho/ROCK信号转导通路关键信号分子p-MLC(Thr18/Ser19)的蛋白表达有抑制作用。结论Fasudil通过抑制Rho/ROCK信号通路对细胞骨架的调节作用抑制HSC的黏附、迁移。