期刊文献+
共找到30篇文章
< 1 2 >
每页显示 20 50 100
幽门螺杆菌vacA基因及其细胞空泡毒素的研究进展 被引量:1
1
作者 孙剑刚 叶嗣颖 《咸宁学院学报(医学版)》 2010年第3期268-270,共3页
关键词 幽门螺杆菌 空泡毒素 vaca基因 上消化道疾病 慢性消化性溃疡 消化系统疾病 分子流行病学 发展中国家
下载PDF
幽门螺杆菌vacA基因及其细胞空泡毒素的研究进展 被引量:8
2
作者 梁怀盼 《山西医药杂志》 CAS 2015年第20期2386-2388,共3页
幽门螺杆菌(H.pylori,HP)是引起人类上消化道疾病的主要致病菌。近20多年来,随着分子流行病学、分子免疫学、分子生物学等相关学科的建立及相关技术的出现,人们对H.pylori毒力的研究也越来越深入,现已发现H.pylori有许多致病因子,如... 幽门螺杆菌(H.pylori,HP)是引起人类上消化道疾病的主要致病菌。近20多年来,随着分子流行病学、分子免疫学、分子生物学等相关学科的建立及相关技术的出现,人们对H.pylori毒力的研究也越来越深入,现已发现H.pylori有许多致病因子,如细胞空泡毒素(vacuolating cytotoxin A,VacA)、细胞毒素相关蛋白(CagA)、热休克蛋白、尿素酶等。 展开更多
关键词 空泡毒素 幽门螺杆菌 vaca基因 H.PYLORI 毒素相关蛋白 上消化道疾病 分子流行病学 分子免疫学
下载PDF
幽门螺杆菌空泡细胞毒素与细胞毒素相关蛋白 被引量:7
3
作者 郭飞 胡伏莲 贾博琦 《胃肠病学》 1997年第2期113-116,共4页
研究证明幽门螺杆菌(Hp)是人类慢性B型胃炎的主要致病因素,与消化性溃疡密切相关,近年的研究提示Hp与胃癌的发生也有密切关系。关于Hp的致病机理还不是很清楚,现有的资料表明Hp分泌的毒素与其致病性有较密切的关系。本文就这一方面的研... 研究证明幽门螺杆菌(Hp)是人类慢性B型胃炎的主要致病因素,与消化性溃疡密切相关,近年的研究提示Hp与胃癌的发生也有密切关系。关于Hp的致病机理还不是很清楚,现有的资料表明Hp分泌的毒素与其致病性有较密切的关系。本文就这一方面的研究作一简要综述。 1988年。 展开更多
关键词 空泡毒素 CAGA蛋白 vaca基因 毒素相关蛋白 CAGA基因 vaca 幽门螺杆菌 菌株 产毒 致病机理
下载PDF
细胞内空泡毒素(VacA)可有效预测幽门螺杆菌可否引起与胃癌发生相关的进展性萎缩性胃炎
4
作者 Karita M Teramukai S +2 位作者 Matsumoto S Shibuta H 朱国栋 《世界核心医学期刊文摘(胃肠病学分册)》 2005年第8期7-8,共2页
VacA was histochemically stained in biopsy specimen and was intracellularly an d mainly located in fundic gland area. It is recognized gastric atrophy was obse rved in the H. pylori-positive patients with intracellula... VacA was histochemically stained in biopsy specimen and was intracellularly an d mainly located in fundic gland area. It is recognized gastric atrophy was obse rved in the H. pylori-positive patients with intracellular VacA compared with o thers.The aim of study is to understand the relationship between intracellular V acA and the progression of gastric atrophy that is associated with gastric cance r. Biopsy specimens and sera were obtained from 364 people in their 50s and 60s without gastric cancer diagnosed at first endoscopy undergoing diagnostic endosc opy, for H. pylori infection, histology, and the histochemical status of intrace llular VacA using anti-VacA Ab during the follow-up period (mean, 7.3 years). Three hundred eleven of 364 enrolled patients were H. pylori positive and 53 pat ients were H. pylori negative at first endoscopy. VacA was intracellularly stain ed with vacuolation and cell de struction in the fundic gland in 98 of 311 H. pylori-positive patients and no t stained in another 213 H. pylori-positive patients plus 53 H.pylori-negative patients at first endoscopy. Gastric atrophy has significantly progressed in th e H. pylori-positive patints with intracellular VacA with gastric ulcers compar ed with the others and six gastric cancers have developed in this group during t he follow-up period (mean, 7.3 years). Intracellular VacA is a valuable marker to predict whether Helicobacter pylori induces progressive atrophic gastritis th at is associated with the development of gastric cancer. 展开更多
关键词 萎缩性胃炎 空泡毒素 幽门螺杆菌阳性 vaca 胃黏膜萎缩 胃溃疡患者 胃底腺 内镜活检 活检标本 阴性患者
下载PDF
幽门螺杆菌空泡毒素对人牙周膜成纤维细胞的增殖和凋亡的影响 被引量:8
5
作者 马玲 许丹 任吉芳 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2016年第5期272-276,共5页
目的:观察幽门螺杆菌空泡毒素(HP Vac A)对人牙周膜成纤维细胞(h PDLFs)增殖和凋亡的影响。方法:人牙周膜成纤维细胞株(h PDLFs100),分别与不同浓度的HP Vac A(0.1、0.2、0.3 mg/m L)共培养,CCK-8方法检测细胞的增殖情况;倒置显微镜观... 目的:观察幽门螺杆菌空泡毒素(HP Vac A)对人牙周膜成纤维细胞(h PDLFs)增殖和凋亡的影响。方法:人牙周膜成纤维细胞株(h PDLFs100),分别与不同浓度的HP Vac A(0.1、0.2、0.3 mg/m L)共培养,CCK-8方法检测细胞的增殖情况;倒置显微镜观察细胞的形态变化;流式细胞仪检测细胞的凋亡情况;透射电镜观察细胞超微结构的改变。结果:随着HP Vac A浓度的增大和培养时间的延长,h PDLFs的增殖明显受到抑制;贴壁的PDLFs数量递减,细胞由长梭形逐渐变为圆形,折光性不断减弱,悬浮细胞和凋亡细胞增多;胞浆内大量空泡形成,细胞染色体聚集于核膜,呈块状、浓集和边缘化,表现出典型的凋亡特征。结论:HP Vac A对PDLFs有明显的细胞毒作用,能抑制细胞增殖,并引起细胞凋亡。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌(HP) 空泡毒素(vaca) 人牙周膜成纤维细(hDPLFs) 凋亡
下载PDF
噬菌体展示技术筛选幽门螺杆菌空泡毒素(VacA)基因结合蛋白 被引量:1
6
作者 陈琳 王克霞 《第四军医大学学报》 北大核心 2007年第18期1724-1725,共2页
关键词 噬菌体展示 幽门螺杆菌 空泡毒素(vaca) 结合蛋白
下载PDF
幽门螺杆菌空泡毒素VacA致病机制研究 被引量:2
7
作者 陈圣敏 《中西医结合研究》 2010年第1期41-43,共3页
关键词 幽门螺杆菌 vaca 空泡毒素 致病机制 H.PYLORI 革兰阴性杆菌 消化性溃疡 慢性胃炎
下载PDF
检测血清幽门螺杆菌细胞空泡毒素抗体的间接ELISA法初步建立
8
作者 刘淼 沈继龙 +1 位作者 汪学龙 江宝玲 《安徽卫生职业技术学院学报》 2005年第3期58-60,共3页
目的:以重组细胞空泡毒素(VacA)蛋白为抗原初步建立检测血清VacA抗体间接ELISA法,为制备检测Hp毒株感染的试剂盒奠定基础。方法:Ni-NTA2+树脂纯化重组VacA蛋白,用重组蛋白免疫兔,HelicoBlot试剂盒检测兔血清VacA抗体以鉴定其免疫原性。W... 目的:以重组细胞空泡毒素(VacA)蛋白为抗原初步建立检测血清VacA抗体间接ELISA法,为制备检测Hp毒株感染的试剂盒奠定基础。方法:Ni-NTA2+树脂纯化重组VacA蛋白,用重组蛋白免疫兔,HelicoBlot试剂盒检测兔血清VacA抗体以鉴定其免疫原性。Westernblot检测其抗原性。并以纯化的重组蛋白为抗原,建立检测血清VacA抗体间接ELISA法,以HelicoBlot试剂盒为标准,确定该方法的特异性与敏感性。结果:以重组蛋白为抗原建立的检测血清VacA抗体的间接ELISA法,敏感性与特异性分别是93.1%和92.5%。结论:以重组蛋白为抗原初步建立检测血清VacA抗体的间接ELISA法,敏感性、特异性高,为制备商品化的试剂盒奠定了基础。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌(Hp) 空泡毒素(vaca) ELISA
下载PDF
幽门螺杆菌细胞空泡毒素与胃上皮细胞的表皮生长因子信号转导
9
作者 杜奕奇 许国铭 李兆申 《国外医学(微生物学分册)》 2003年第4期26-27,30,共3页
细胞空泡毒素是幽门螺杆菌的一种重要的外分泌毒素,但其确定的致病机制尚不清楚。近年来研究发现,细胞空泡毒素不仅直接导致细胞的空泡毒性,还可能通过干扰胃黏膜上皮细胞内及细胞间的信息传递,尤其是与表皮生长因子有关的信号转导过程... 细胞空泡毒素是幽门螺杆菌的一种重要的外分泌毒素,但其确定的致病机制尚不清楚。近年来研究发现,细胞空泡毒素不仅直接导致细胞的空泡毒性,还可能通过干扰胃黏膜上皮细胞内及细胞间的信息传递,尤其是与表皮生长因子有关的信号转导过程,影响上皮细胞的生长、增殖及组织的修复,是幽门螺杆菌致病机制的重要环节之一。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌细空泡毒素 胃上皮细 表皮生长因子 消化内科 HP vaca毒素 EGF信号转导
下载PDF
幽门螺杆菌细胞空泡毒素细胞毒作用机制研究进展
10
作者 刘淼 《国外医学(临床生物化学与检验学分册)》 2003年第2期70-71,86,共3页
细胞空泡毒素 (VacA)是幽门螺杆菌 (HP)的重要致病因子。VacA先与细胞表面的受体蛋白酪氨酸磷酸酶 β(RPTPβ)结合 ,经受体内吞作用进入细胞内 ,引起晚期溶酶体与胞内体的融合与积累 ,而形成空泡。其原因是VacA作用于细胞内的酶和引起... 细胞空泡毒素 (VacA)是幽门螺杆菌 (HP)的重要致病因子。VacA先与细胞表面的受体蛋白酪氨酸磷酸酶 β(RPTPβ)结合 ,经受体内吞作用进入细胞内 ,引起晚期溶酶体与胞内体的融合与积累 ,而形成空泡。其原因是VacA作用于细胞内的酶和引起脂质双分子层离子通道形成。VacA还可导致细胞间的紧密连接松弛 ,增强极化上皮单层细胞的渗透性。同时也通过干扰EGF介导的细胞信号转导通路和破坏上皮细胞的正常细胞骨架来抑制细胞的增殖。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 空泡毒素 vaca 毒作用 综述 生物学特性 基因 增殖 极化上皮单层细
下载PDF
硒对幽门螺杆菌空泡毒素及其重组影响 被引量:4
11
作者 段秀杰 王文凯 +1 位作者 邵世和 刘继斌 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期833-835,共3页
目的研究硒(Se)对幽门螺杆菌(Hp)空泡毒素(VacA)及重组VacA的影响。方法采用盐析、透析、柱层析、浓缩、抽滤等方法提纯幽门螺杆菌分泌的空泡毒素。通过琼脂糖凝胶电泳、基因序列分析鉴定重组载体,重组VacA产物经Ni-TEDTM蛋白纯化系统纯... 目的研究硒(Se)对幽门螺杆菌(Hp)空泡毒素(VacA)及重组VacA的影响。方法采用盐析、透析、柱层析、浓缩、抽滤等方法提纯幽门螺杆菌分泌的空泡毒素。通过琼脂糖凝胶电泳、基因序列分析鉴定重组载体,重组VacA产物经Ni-TEDTM蛋白纯化系统纯化,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、及免疫印迹(Western blot)鉴定,间接酶联免疫吸附(ELISA)法检测其抗原特异性。进行细胞培养、细胞爬片;采用分光光度计、倒置显微镜、透射电镜及流式细胞仪等方法检测硒对幽门螺杆菌分泌的VacA及重组毒素蛋白功能的影响。结果12 mmol/L硒即可使幽门螺杆菌形态发生球形变,鞭毛及菌毛出现脱落,溶血作用减弱,硒对VacA空泡毒作用无直接影响(P>0.05);硒通过抑制Hp生长减少VacA产生量从而使空泡毒作用减弱;通过抑制表达VacA的大肠埃希菌生长,减少重组VacA表达量;能增强重组VacA对人胃上皮癌细胞株(SGC-7901)生长抑制作用,使细胞分裂指数、集落形成率、S期细胞数量降低,G1期细胞总数增加;使表达重组VacA的大肠埃希菌产生脂溶性砖红色色素,并随硒浓度增加颜色加深。结论硒能抑制Hp生长,改变Hp的形态及结构;可使重组VacA表达量减少;能增强重组VacA对SGC-7901细胞的生长抑制及诱导细胞凋亡作用;可使表达重组VacA的大肠埃希菌产生脂溶性砖红色色素;不能直接抑制VacA的空泡毒作用。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌(Hp) 空泡毒素(vaca) 重组空泡毒素 提纯
下载PDF
幽门螺杆菌空泡毒素的作用机制研究进展 被引量:1
12
作者 唐清 王琳琳 《广西医科大学学报》 CAS 北大核心 2006年第1期162-164,共3页
关键词 空泡毒素 幽门螺杆菌 机制研究 胃黏膜相关淋巴瘤 HELA细 vaca基因 致癌因子 消化性溃疡 培养基 慢性胃炎
下载PDF
幽门螺杆菌空泡毒素及其致病性 被引量:2
13
作者 邵世和 段秀杰 李凡 《国外医学(流行病学.传染病学分册)》 2003年第4期236-239,共4页
幽门螺杆菌感染呈全球性分布,与多种胃部疾病有密切关系,人群感染率在50%以上。该菌分泌的空泡毒素VacA在其致病过程中起重要作用。不同幽门螺杆菌菌株的VacA存在基因型和表型的差异。不同基因型的致病性不同,不同地区的基因型分布亦... 幽门螺杆菌感染呈全球性分布,与多种胃部疾病有密切关系,人群感染率在50%以上。该菌分泌的空泡毒素VacA在其致病过程中起重要作用。不同幽门螺杆菌菌株的VacA存在基因型和表型的差异。不同基因型的致病性不同,不同地区的基因型分布亦不同。研究该菌VacA基因(vac4)及其产物,以及不同基因型与疾病的关系,对于进一步阐明幽门螺杆菌与临床症状的关系、幽门螺杆菌感染性疾病的防治都有十分重要的意义。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 空泡毒素 vaca基因 致病机制
下载PDF
幽门螺杆菌空泡毒素分子生物学研究进展
14
作者 陈全 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2001年第4期467-470,共4页
关键词 出门螺杆菌 空泡毒素 分子生物学 vaca基因 基因多态性
下载PDF
浙江地区幽门螺杆菌临床菌株空泡毒素基因的变异及其表达活性分析
15
作者 陈学军 沈月芳 程永樟 《浙江检验医学》 2004年第4期32-35,共4页
目的了解浙江地区消化性溃疡和慢性胃炎患者感染的幽门螺杆菌(Hp)vacA基因的变异及其空泡毒素表达情况。方法用细胞培养的方法检测70株Hp菌株的空泡毒性,选择部分菌株测定其vacA基因的s区和m区核苷酸序列并比较其同源性。结果任选6株sla... 目的了解浙江地区消化性溃疡和慢性胃炎患者感染的幽门螺杆菌(Hp)vacA基因的变异及其空泡毒素表达情况。方法用细胞培养的方法检测70株Hp菌株的空泡毒性,选择部分菌株测定其vacA基因的s区和m区核苷酸序列并比较其同源性。结果任选6株sla型Hp菌株的s区扩增产物与报道的sla型60190株核苷酸序列同源性为93.2%~94.9%,4株m2型Hp菌株的m区扩增产物与报道的m2型87-203株核苷酸序列之间同源性为93.6%~97.6%。1株m1b型Hp菌株的m区扩增产物与报道的m1型60190株相应序列同源性为87.3%,与m2型87-203株相应序列之间同源性为71.7%。所有5株sla/ml型Hp对HeLa、RK-13和SGC-7901三种细胞均有明显的空泡毒作用;仅27.9%(12/43)的sla/m2型菌株对HeLa细胞表现为空泡毒作用,但分别有65.1%(28/43)和62.8%(27/43)的菌株对RK-13细胞和SGC-7901细胞有空泡毒作用;所有s1a/m1b和s1a/m1b-m2型Hp菌株对三种细胞均有明显的空泡毒作用,以其中的RK-13细胞计,81.0%(17、21)的sla/mlb型Hp菌株和1株sla/mlb-m2型有空泡毒性。消化性溃疡组感染的Hp菌株空泡毒性(84.4%)强于慢性胃炎组(60.5%),有显著性差异(P【0.05)。结论浙江地区患者感染的Hp菌株vacA基因变异主要在于m区。vacA基因空泡毒性的表达活性可能与作用细胞的受体不同有关,在HeLa细胞中低毒性的sla/m2型菌株在RK-13和SGC-7901细胞中仍有较高的空泡毒性。mlb型Hp空泡毒性强度介于ml和m2型之间。消化性溃疡患者感染的Hp菌株其空泡毒性明显强于慢性胃炎组。 展开更多
关键词 螺杆菌 幽门 vaca基因 空泡毒素 消化性溃疡病
下载PDF
幽门螺杆菌空泡毒素受体的研究进展
16
作者 杜奕奇 许国铭 屠振兴 《国外医学(消化系疾病分册)》 2001年第3期131-134,共4页
空泡变性细胞毒素(VacA)是幽门螺杆茵(Hp)的主要毒力因子,VacA受体的研究成为近年来Hp致病机制研究的新热点。本文综述了初步确认的VacA受体(RPTPβ)的特性及其可能的作用机制。
关键词 幽门螺杆菌 胃炎 空泡变性细毒素 vaca受体 消化性溃疡 研究进展 分子生物学
下载PDF
慢性萎缩性胃炎与幽门螺杆菌cagA、vacA基因相关性研究 被引量:3
17
作者 韩梅娇 金晓明 +2 位作者 牟海滨 姜洋 贺岩 《哈尔滨医科大学学报》 CAS 2003年第6期497-499,F003,共4页
目的 探讨幽门螺杆菌 (Hp)菌株中cagA和vacA基因对慢性萎缩性胃炎的致病作用及其检测的意义。方法 胃镜下诊断慢性胃炎的病例 ,钳取活组织标本 ,组织学检查 ;快速尿素酶法和PCR检测。结果  30例标本经组织学检查慢性萎缩性胃炎 1 9... 目的 探讨幽门螺杆菌 (Hp)菌株中cagA和vacA基因对慢性萎缩性胃炎的致病作用及其检测的意义。方法 胃镜下诊断慢性胃炎的病例 ,钳取活组织标本 ,组织学检查 ;快速尿素酶法和PCR检测。结果  30例标本经组织学检查慢性萎缩性胃炎 1 9例 ,慢性浅表性胃炎 1 1例。经快速尿素酶法检测 ,慢性萎缩性胃炎中 ,8例Hp“ +” ,1 1例Hp“ -” ;慢性浅表性胃炎中 ,1例Hp“ +” ,1 0例Hp“ -”。经PCR检测 ,慢性萎缩性胃炎中 ,1 5例cagA“ +” ,4例cagA“ -” ,1 1例vacA“ +” ,8例vacA“ -” ;慢性浅表性胃炎中 ,2例cagA“ +” ,9例cagA“ -” ,1例vacA“ +” ,1 0例vacA“ -”。结论 Hp是慢性萎缩性胃炎的重要致病因素 ,Ⅰ型菌株致病力更强。PCR检测较快速尿素酶法准确。检测cagA和vacA基因对了解Hp菌株的致病性、估计疾病程度。 展开更多
关键词 慢性萎缩性胃炎 幽门螺杆菌 CAGA vaca 基因 相关性 毒素相关基因 空泡毒素基因
下载PDF
幽门螺杆菌vacA基因的克隆和序列分析 被引量:1
18
作者 刘纯杰 张兆山 +5 位作者 陶好霞 李淑琴 李眅 刘秀丽 段海清 黄翠芬 《生物技术通讯》 CAS 2002年第2期126-127,131,共3页
空泡毒素是幽门螺杆菌产生的已知的唯一蛋白毒素,该毒素与感染者胃肠上皮损伤和溃疡形成密切相关,同时也是幽门螺杆菌免疫预防和免疫治疗的重要候选组分。从幽门螺杆菌NCTC11637染色体DNA中经PCR方法获得了2.9kb的该基因成熟肽全长序列... 空泡毒素是幽门螺杆菌产生的已知的唯一蛋白毒素,该毒素与感染者胃肠上皮损伤和溃疡形成密切相关,同时也是幽门螺杆菌免疫预防和免疫治疗的重要候选组分。从幽门螺杆菌NCTC11637染色体DNA中经PCR方法获得了2.9kb的该基因成熟肽全长序列,将该基因克隆至载体pET22b+,经PCR扩增和酶切鉴定后序列分析表明,该基因与已知序列完全一致。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 空泡毒素A基因 克隆 测序 vaca基因
下载PDF
聚合酶链反应法测定幽门螺杆菌的VacA、CagA基因 被引量:1
19
作者 张志强 张金芳 许树长 《同济大学学报(医学版)》 CAS 2003年第5期388-390,394,共4页
目的 用聚合酶链反应法 (polymerasechainreaction ,PCR)测定食管粘膜和胃窦粘膜中幽门螺杆菌 (Heli cobacterpylori,Hp)的两个特征性致病因子 :细胞毒素相关蛋白 (CagA)和细胞空泡毒素 (VacA) ,比较其临床意义。方法 对有典型反流症... 目的 用聚合酶链反应法 (polymerasechainreaction ,PCR)测定食管粘膜和胃窦粘膜中幽门螺杆菌 (Heli cobacterpylori,Hp)的两个特征性致病因子 :细胞毒素相关蛋白 (CagA)和细胞空泡毒素 (VacA) ,比较其临床意义。方法 对有典型反流症状的患者并经胃镜检查诊断为反流性食管炎 (reflaxesophagitis ,RE) 53例作为病例组。无典型反流症状的患者并经胃镜检查诊断为慢性胃炎 2 5例作为对照组 ,分别取食管下端粘膜和胃窦粘膜各 3块 ,并分别行快速尿素酶试验、病理Hp检查和Hp培养 ,从食管及胃窦粘膜中分离Hp菌株 ,应用聚合酶链反应方法行CagA基因、VacA基因检测。 结果 病例组、对照组中食管粘膜的Hp阳性率分别为 14 / 53 (2 6.4%)、8/ 2 5(3 2 %) ,两者差异无显著性 (P >0 .0 5) ;胃窦粘膜的Hp阳性率分别为 2 0 / 53 (3 7.8%)、16/ 2 5(64%) ,两者差异有显著性 (P<0 .0 5) ;病例组中胃窦粘膜Hp的CagA +检出率 (6/ 2 0 ,3 0 %)明显低于对照组 (10 / 16,62 .5%) (P <0 .0 5) ,而Va cA +检出率分别为 6/ 2 0 (3 0 %)、7/ 16(43 .8%) ,两者差异无显著性 (P >0 .0 5)。胃窦粘膜Hp阳性率差异有显著性(P <0 .0 1)。结论 CagA、VacA的测定对Hp的分型有指导意义。Hp与RE关系密切 ,尤其是CagA +的Hp感染可能在RE的发? 展开更多
关键词 聚合酶链反应 幽门螺杆菌 空泡毒素 vaca基因 CAGA基因
下载PDF
人幽门螺杆菌VacA与HspA双价候选疫苗抗原的克隆表达及鉴定
20
作者 姜政 蒲丹 +2 位作者 黄爱龙 陶小红 王丕龙 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第5期48-54,共7页
目的 构建含人幽门螺杆菌 (Hp)热休克蛋白A(HspA)和细胞空泡毒素 (VacA)编码基因的重组载体 ,进行核苷酸序列分析 ,并在E coliBL2 1中表达 ,研究其抗原性 ,为疫苗的开发奠定基础。方法 利用分子克隆技术从HpDNA染色体中 ,扩增HspA、V... 目的 构建含人幽门螺杆菌 (Hp)热休克蛋白A(HspA)和细胞空泡毒素 (VacA)编码基因的重组载体 ,进行核苷酸序列分析 ,并在E coliBL2 1中表达 ,研究其抗原性 ,为疫苗的开发奠定基础。方法 利用分子克隆技术从HpDNA染色体中 ,扩增HspA、VacA编码基因片段 ,将目的基因HspA、VacA与载体 pET32a(+)分别进行双酶切后 ,连接、测序 ;同时将重组载体 pET32a(+) /HspA和 pET32a(+) /VacA分别经Xhol、BamHⅠ双酶切 ,通过凝胶电泳回收 pET32a(+) /HspA和VacADNA片段 ,经T4连接酶将HspA和VacA编码基因通过酶切粘端进行连接 ,而后转化并筛选含有两种目的基因的重组载体 ,并在大肠杆菌BL2 1中表达 ,表达产物经纯化后 ,以Westernblot法检测其抗原性。结果 经酶切、测序分析表明 ,插入的基因片段为HpHspA和VacA编码基因 ,由 10 80bp组成 ,与GenBank报道的相比较 ,本实验克隆的基因有 3 4 0 %的碱基发生变异 ,导致 1 10 %的氨基酸残基改变 ;经SDS -PAGE分析发现 ,融合基因表达的蛋白Mr为 5 9× 10 3 ,其中pET32a(+)表达的蛋白Mr约为 2 0× 10 3 ,可溶性表达产物占全菌总蛋白的 18 96 % ;重组蛋白经Ni2 + -NTA琼脂糖树脂纯化后 ,其纯度达95 %以上 ;用Westernblot法检测显示 ,该重组蛋白可被Hp阳性患者的血清所识别 。 展开更多
关键词 人幽门螺杆菌 vaca HSPA 疫苗 抗原 基因克隆 基因表达 鉴定 热休克蛋白A 空泡毒素 载体
下载PDF
上一页 1 2 下一页 到第
使用帮助 返回顶部