一锅法全细胞催化合成胞苷三磷酸的研究

分别在大肠杆菌BL21(DE3)中构建胞苷激酶(CDK)与乙酸激酶(ACK)的共表达及融合表达体系和胞苷酸激酶(CMK)与乙酸激酶(ACK)的融合表达体系,其中融合菌株SUMO-CDK-L2-ACK与CMK-L2-ACK构成的双融合催化体系具有较好的催化活性。搭建了双融合菌全细胞一锅法催化合成胞苷三磷酸(CTP)反应体系,并对其温度、pH、金属离子、乙酰磷酸投加量及菌粉投加量等进行优化。结果表明,在优化反应体系中,反应75 min时CTP产量达到最高为108 mmol/L,总收率达86.4%,实现了CTP的一锅法高效合成。

甲基赤藓糖醇磷酸胞苷酰转移酶及其抑制剂研究进展

甲基赤藓糖醇磷酸(methylerythritol phosphate,MEP)途径是生产萜类化合物前体异戊二烯基二磷酸(isopentenyl diphosphate,IPP)和二甲基烯丙基二磷酸(dimethylallyl diphosphate,DMAPP)必要的生化途径之一,该途径广泛存在于植物、细菌及病原体体内,而哺乳动物中不存在。MEP途径包含的7个关键酶都可以作为新型农药和医药的作用靶标。甲基赤藓糖醇磷酸胞苷酰转移酶(2-C-methyl-D-erythritol-4-phosphate cytidyltransferase,IspD)是MEP途径的第三个关键酶,它的活性位点亲脂性低,但拥有独特的变构位点,近年来引起研究人员的广泛关注。利用IspD小分子抑制剂来阻断MEP通路,从而间接地抑制萜类化合物的生成,可以造成病菌和植物的死亡,达到杀菌或除草目的。本文对IspD结构、催化机理、IspD抑制剂及其作用机制等内容进行了综述,可为以IspD作为靶标的抑制剂的筛选以及新型农药和医药的开发提供指导。

注射用三磷酸胞苷二钠细菌内毒素检查法的研究

目的建立注射用三磷酸胞苷二钠细菌内毒素检查方法。方法按《中国药典》2020年版四部通则1143细菌内毒素检查法,从严确定注射用三磷酸胞苷二钠的限值,用凝胶法进行方法学验证和细菌内毒素检查。结果两个厂家的4批供试品在0.2 mg/ml浓度下对两个厂家的鲎试剂不存在干扰,细菌内毒素的限值设定为2.5 EU/mg,4批注射用三磷酸胞苷二钠细菌内毒素的检查结果均符合规定。结论本研究建立的细菌内毒素检查方法可用于替代家兔热原检查法,满足对注射用三磷酸胞苷二钠的质量控制要求。

消瘀康胶囊联合三磷酸胞苷二钠治疗脑出血恢复期的临床研究

探讨脑出血恢复期患者的临床治疗中选用消瘀康胶囊联合三磷酸胞苷二钠的具体效果和临床应用价值。方法 选取2021年10月~2023年3月就诊于我院的脑出血恢复期患者为观察对象,入组并符合标准的患者共62例,以等量随机法完成分组,分为常规与联合两组,每组各31例。治疗方案选择上,常规组选择三磷酸胞苷二钠注射液静脉滴注,联合组选择三磷酸胞苷二钠联合消瘀康胶囊,比较临床疗效指标。结果 与常规组治疗总有效率比较,联合组更高(P<0.05);与常规组疾病症状缓解时间比较,联合组各症状缓解时间更短(P<0.05);两组别NIHSS评分与Barthel评分比较,联合组两项评分均优于常规组(P<0.05);两组别IL-6、S100B、Hcy、BDNF水平比较,联合组四项指标水平均优于常规组(P<0.05)。结论 脑出血恢复期治疗方案选择消瘀康胶囊联合三磷酸胞苷二钠,能够强化临床治疗效果,在短时间内改善疾病相关症状,同时在促进脑神经功能恢复、降低炎性水平方面具有显著的优势,具有较强的临床应用价值。

环状RNA-胞裂蛋白2/miR-150-5p/聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1分子轴在重症急性胰腺炎中的作用及机制研究

目的探讨环状RNA(circRNA)-胞裂蛋白2(SEPT2)/miR-150-5p/聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)分子轴在重症急性胰腺炎(SAP)中的作用及机制。方法选取2019年12月至2021年12月赣南医学院第一附属医院收治的46例SAP患者作为重症组;并选取本院同期收治的41例轻症急性胰腺炎(MAP)患者作为轻症组;另选取本院同期35名健康体检者作为对照组。3组均采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定血清circRNA-SEPT2、miR-150-5p、PARP-1基因表达量,采用急性生理和慢性健康评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评估病情严重程度;采用重组慢病毒包装合成有效感染序列sh-SEPT2(干扰组)与过表达序列oe-SEPT2(过表达组)建立动物模型,采用酶联免疫吸附试验测定大鼠生化指标[白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、D乳酸及二胺氧化酶(DAO)],采用RT-PCR及Western blot法检测大鼠circRNA-SEPT2、miR-150-5p、PARP-1及细胞凋亡相关基因半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-9 mRNA表达。比较3组circRNA-SEPT2、miR-150-5p、PARP-1基因表达量及APACHEⅡ评分,采用Pearson相关性分析SAP患者PARP-1与circRNA-SEPT2、miR-150-5p及APACHEⅡ评分的相关性;比较干扰组与过表达组大鼠苏木精-伊红染色法(HE)结果、肠黏膜损伤评分、炎症因子水平及cir-cRNA-SEPT2、miR-150-5p、PARP-1和Caspase-3、Caspase-9 mRNA表达量。结果重症组circRNA-SEPT2、miR-150-5p、PARP-1基因表达量及APACHEⅡ评分均高于轻症组和对照组,且轻症组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性结果显示,SAP患者PARP-1与circRNA-SEPT2、miR-150-5p及APACHEⅡ评分均呈正相关(r>0,P<0.05)。干扰组HE染色下胰岛细胞界限清晰,胰岛丰富,胞浆丰富,形态完整;过表达组大鼠胰岛细胞界限不清,胰岛数量较少,细胞形态不规则,细胞体积较大,边缘不齐;干扰组胰腺损伤评分为(2.58±0.16)分,低于过表达组的(3.95±0.53)分,差异有统计学意义(P<0.05)。干扰组IL-1β、IL-18、TNF-α、D乳酸及DAO水平均低于过表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。干扰组大鼠circRNA-SEPT2、miR-150-5p、PARP-1 mRNA表达及细胞凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-9 mRNA表达量均低于过表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PARP-1通过靶向作用于circRNA-SEPT2/miR-150-5p参与SAP的发生与发展,抑制circRNA-SEPT2表达,可减轻SAP肠黏膜屏障损伤,能为SAP治疗提供新的靶点。

三磷酸胞苷加地塞米松等综合治疗突发性聋的临床观察

目的 对三磷酸胞苷 (cyntridinitriphosphatis ,CTP)加地塞米松等综合治疗突发性聋的疗效进行临床观察。方法 将 2 0 7例 (312耳 )突发性聋患者按照就诊顺序分成CTP组 10 6例 (15 9耳 )和对照组 10 1例 (15 3耳 )。CTP组使用CTP治疗 ,对照组采用传统的ATP、辅酶A、肌苷 0 4g和维生素C治疗 ;两组还同时加用地塞米松、维生素B、吸氧、丹参等完全相同的治疗。如有明确的感冒受凉史(CTP组 2 5例 ,对照组 2 7例 ) ,则加用抗病毒药及干扰素。两组在治疗前和治疗后 2d开始每 4d用纯音电测听测试患者的听力。结果 CTP组和对照组在治疗前平均听阈分别为 (76 5 6± 19 0 4 )dBHL和 (74 0 1± 17 0 7)dBHL(P >0 0 5 ) ;治疗后 ,CTP组 10 6例中痊愈 6 7例 (94耳 )、显效 2 1例 (35耳 )、有效 16例 (2 7耳 )及无效 2例 (3耳 ) ,治愈率 5 9 12 % ,平均听阈为 (43 0 8± 2 1 4 7)dBHL ,听力平均提高(2 7 39± 18 4 4 )dB ,未见任何副作用 ;对照组 10 1例 (15 3耳 )中痊愈 16例 (2 5耳 )、显效 19例 (32耳 )、有效 5 1例 (73耳 )及无效 15例 (2 3耳 ) ,治愈率 16 34% ,平均听阈分别为 (5 7 13± 32 4 1)dBHL ,平均听力提高 (19 4 5± 19 12 )dB。两组经统计学处理差异有显著性 (P <0 0 5 )。

三磷酸胞苷二钠防治草酸铂外周神经毒性的临床观察

目的 寻找预防和治疗奥沙利铂 (草酸铂 )外周神经毒性的有效药物。方法 对 70例使用草酸铂治疗的胃癌和大肠癌患者 ,于给草酸铂前一天使用三磷酸胞苷二钠作预防组 (30例 ) ,另收集以草酸铂治疗的胃肠癌症患者 4 0例 ,于草酸铂开始治疗的第 4周起使用三磷酸胞苷二钠作为对照组 ,观察并对比两组外周神经毒性发生情况。结果 预防组较对照组毒性反应明显减少 ,对照组中出现外周神经毒性的 15例患者 ,在使用三磷酸胞苷二钠后 ,外周神经毒性的发生率显著降低 ,程度明显减轻。

前列地尔联合三磷酸胞苷二钠治疗军事噪声性耳聋的临床疗效观察

目的评价前列地尔联合三磷酸胞苷二钠治疗军事噪声性耳聋的疗效及安全性。方法将由军事噪声引发的78例耳聋患者随机分为两组,对照组给予糖皮质激素、B族维生素、高压氧等常规治疗;治疗组在常规治疗的基础上加用前列地尔联合三磷酸胞苷二钠治疗,疗程均为2周。结果对照组有效率为69.23%,治疗组有效率为89.74%,两组差异具有统计学意义(P<0.05)。全部病例治疗期间没有发生药品不良反应。结论在常规治疗的基础上加用前列地尔联合三磷酸胞苷二钠,对治疗军事噪声性耳聋科有明显疗效,值得临床推广应用。

利用啤酒酵母生物合成胞苷三磷酸的研究

研究了利用游离的啤酒酵母将胞苷一磷酸(CMP)合成为胞苷三磷酸(CTP),采用HPLC法分析反应过程中各工艺参数对转化率的影响并对其主要因素进行了正交优化。结果表明,在25g酵母量中加入20mL底物溶液,其中包括CMP60mmol/L、葡萄糖150mmol/L、磷酸盐缓冲液(钠盐)250mmol/L、氯化镁8mmol/L、pH为6.0,温度35℃、反应时间2.0h,在此反应体系下,通过添加适量ATP、吐温,CTP的转化率可维持在80%以上。

三磷酸胞苷二钠诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的实验研究

目的探讨三磷酸胞苷二钠(CTP)诱导骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的作用。方法取成年SD大鼠,用贴壁培养法分离纯化骨髓间充质干细胞(BMSCs),传代扩增,连续观察细胞形态及生长特性。用不同浓度(0.05、0.10、0.20、0.40和0.80mg/mL)CTP对BMSCs进行诱导;诱导后用免疫组织化学检测细胞神经微丝蛋白(NF)、胶质原性纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元烯醇化酶(NSE)的表达。计算阳性细胞比例,进行统计学分析,选出合适的诱导剂量。结果随CTP浓度增高,经免疫组织化学检测NF、GFAP和NSE阳性细胞比例也呈现逐步增高趋势,到一定浓度后又有所下降,统计学分析,CTP浓度为0.2mg/mL时,能够诱导NF、GFAP和NSE阳性细胞比例为(32.73±0.63)%、(62.77±2.45)%和(30.41±0.65)%,显著高于对照组(P<0.01)。结论 CTP是一种很好的体外诱导剂,可以诱导MSCs向神经细胞分化,以0.2mg/mLCTP作诱导剂,能够获得较明显的诱导MSCs向神经细胞和神经胶质细胞分化的结果。

内嵌纳米粒阴离子交换聚甲基丙烯酸羟乙酯复合晶胶分离三磷酸胞苷

用结晶致孔法制备了内嵌SiO2颗粒的聚甲基丙烯酸羟乙酯基复合晶胶,经甲基丙烯酸二甲氨乙酯接枝修饰后,得到了阴离子交换复合晶胶介质,用于从啤酒酵母转化液中色谱分离三磷酸胞苷。色谱分离过程以0.01 mol·L-1HCl为平衡液,以0.02 mol·L-1和0.1 mol·L-1的NaCl溶液(用平衡液配制)分步洗脱。通过高效液相色谱定量分析,所得三磷酸胞苷的纯度达97.2%,回收率82.5%。与其他分离方法相比,本法过程简单、分离迅速高效,在核苷酸药物的分离领域具有很好的应用前景。

磷酸肌酸联合三磷酸胞苷二钠治疗新生儿缺氧缺血性脑病合并心肌损害的临床研究

目的观察磷酸肌酸(Pcr)联合三磷酸胞苷二钠(CTP)治疗新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)合并心肌损害的疗效。方法62例HIE合并心肌损害的患儿随机分为治疗组32例,对照组30例。两组常规治疗相同,对照组加用复方丹参注射液,治疗组加用Pcr和CTP。对两组患儿的心电图和心肌酶谱恢复正常率、神经行为评分(NB-NA)、主要症状与体征恢复时间及住院时间等进行比较分析。结果治疗组患者的心电图恢复正常率、心肌酶谱恢复正常率、NBNA评分、症状体征恢复时间及住院时间与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论Pcr联合CTP治疗HIE合并心肌损害疗效显著,安全有效。

三磷酸胞苷二钠对脑缺血大鼠海马CA_3区突触体素表达的影响

目的 研究局灶性脑缺血后海马 CA3 区突触体素的动态表达及其三磷酸胞苷二钠对其干预的影响。方法 选取 SD大鼠 60只 ,随机分为脑缺血后自然恢复组、药物干预组和假手术对照组。采用线栓法建立大脑中动脉脑缺血大鼠模型 ,应用免疫组化技术观察海马 CA3 区突触体素的表达。结果 脑缺血后自然恢复组大鼠突触体素的表达较对照组明显降低 (P<0 .0 1) ;但 7～ 2 1d突触体素的表达逐渐上调 (P<0 .0 1)。应用三磷酸胞苷二钠干预后 ,突触体素表达与自然恢复组相比明显升高。结论 脑缺血损伤后海马 CA3 区突触体素表达减少 ,但机体自身存在着神经元的修复和再生 ;三磷酸胞苷二钠可上调突触体素的表达 ,具有促进缺血神经元的修复、再生及突触重塑作用。

三磷酸胞苷二钠治疗头孢菌素致双硫仑样反应疗效观察

双硫仑样反应是指双硫仑作为戒酒药在服药后一定时间内饮酒，引起面部潮红、发热、头痛、恶心、呕吐、口中有大蒜样气味等症状，甚至发生休克，严重者导致呼吸抑制、心肌梗死、急性心力衰竭、惊厥和死亡，其机制为双硫仑能抑制乙醛脱氢酶活性，使乙醛蓄积，乙醛经过乙醛脱氢酶催化生成乙酸，

尿苷二磷酸-葡萄糖4-差向异构酶编码基因galE影响甘薯青枯菌致病性和碳代谢

为明确尿苷二磷酸(uridine diphosphate,UDP)-葡萄糖4-差向异构酶编码基因galE的功能,通过构建甘薯青枯菌galE基因敲除菌株ΔgalE及回补菌株CΔgalE,探索galE基因与甘薯青枯菌致病相关表型间的关联及对甘薯青枯菌生理代谢的影响。结果表明:galE基因缺失显著降低了青枯菌对甘薯的致病性,并且影响了致病相关表型。ΔgalE菌落流动性、菌体泳动能力、胞外多糖含量和生物膜形成量均明显低于野生型SPRS911和CΔgalE。在半乳糖代谢途径中,galE基因缺失后,参与尿苷二磷酸葡糖与葡萄糖之间代谢的galU、pgm、glk基因表达量降低,D-葡萄糖-6-磷酸累积;与UDP-半乳糖代谢有关的dgoK、dgoAa、dgoAb、malZ和galM基因表达量升高。galE基因缺失还加强了甘薯青枯菌对于苹果酸的同化作用。上述研究结果说明,galE基因对青枯菌的致病性与碳代谢水平均有明显影响。

胞苷三磷酸的分离纯化

研究了离子交换色谱分离纯化胞苷三磷酸(CTP)的工艺条件,从4种强碱性阴离子交换树脂中选择了201×7型树脂,依次用0.4mol/L、1mol/L氯化钠溶液非连续梯度洗脱。以HPLC法测定CTP含量,采用WAX-1色谱柱,流动相为480mmol/L磷酸盐缓冲液(pH6.0),检测波长260nm,柱温35℃,测得CTP含量为75%。

三磷酸胞苷二钠对局灶性脑缺血大鼠海马CA3区脑源性神经生长因子表达的影响

目的:观察三磷酸胞苷二钠(CTP)对缺血神经元修复、再生及结构重建的影响及其作用机制。方法:实验于2002-03/10在河北医科大学组胚教研室及河北医科大学第三医院中心实验室进行。选取SD大鼠60只,随机分为脑缺血自然恢复组、药物干预组和假手术对照组,每组20只。采用线栓法建立大脑中动脉脑缺血大鼠模型,药物干预组大鼠术后立即将三磷酸胞苷二钠(70mg/kg体质量)经1mL生理盐水溶解后给予腹腔注射,此后以相同剂量每日一次腹腔注射;自然恢复组及假手术组大鼠给予生理盐水1mL每日一次腹腔注射,分别于术后7、14、21及30d时各取5只大鼠处死,应用苏木精-伊红染色、免疫组化技术观察海马CA3区脑源性神经生长因子的表达,比较各组脑缺血后脑源性神经生长因子阳性细胞吸光度值。结果:实验选取的各组大鼠全部进入结果分析。①各组大鼠脑缺血后细胞形态观察结果:假手术组大鼠顶叶及海马区神经元排列整齐,形态完整,细胞数量较多,细胞核圆大且核仁明显。缺血组可见梗死灶,表现为正常结构消失,排列紊乱,细胞数量减少,胞核浓缩呈梭形或三角形,细胞质深染。②免疫组化染色及图像分析结果:光镜下观察,假手术组海马CA3区脑源性神经生长因子免疫组化染色阳性细胞神经元的胞浆内充满弥漫性的棕黄色颗粒,但其表达数量较少、染色较浅,自然恢复组脑源性神经生长因子表达与假手术组相比逐渐增多,第21天时达到高峰,并且免疫反应产物染色较深,部分神经元可见长的轴突,三磷酸胞苷二钠干预组脑源性神经生长因子阳性表达同自然恢复组相比均明显增加。③脑缺血后各组脑源性神经生长因子阳性细胞吸光度值的比较:与假手术组相比,自然恢复组脑源性神经生长因子吸光度值明显升高且差异有显著性(P<0.01),与自然恢复组相比,三磷酸胞苷二钠干预组各时间点吸光度值均升高,而且7d和14d时同自然恢复组比较差异有显著性(P<0.01)。结论:脑缺血损伤可诱导海马CA3区脑源性神经生长因子表达增多。三磷酸胞苷二钠可上调脑缺血后脑源性神经生长因子的表达,具有促进缺血神经元的修复、再生及结构重建的作用。

磷酸胞尿苷二钠肌肉注射治疗糖尿病周围神经病变30例疗效

目的:观察磷酸胞尿苷二钠肌肉注射治疗糖尿病周围神经病变(DPN)的疗效.方法:将60例2型DPN患者随机分为2组,在常规降糖、降压等治疗基础上,治疗组30例采用注射用磷酸胞尿苷二钠20mg加入生理盐水2mL中溶解肌肉注射,1次/d;对照组30例采用安慰剂,以21d为一个疗程.通过肌电图仪测定两组患者治疗前后主侧肢体的正中神经、腓总神经的运动传导速度(MNCV)和感觉传导速度(SNCV),并记录临床症状、体征变化,从而观察磷酸胞尿苷二钠治疗2型DPN的疗效.结果:治疗组总有效率为86.7%,对照组为53.3%(P<0.01).患者肌电图改善治疗组优于对照组(P<0.05).结论:磷酸胞尿苷二钠肌肉注射治疗DPN有较好疗效,且使用方便.