胞苷三磷酸合成酶在过敏性哮喘肺部炎症中的表达变化

目的探讨胞苷三磷酸合成酶(cytidine triphosphate synthase,CTPS)在过敏性哮喘发生的致敏和激发两个阶段肺组织内的变化情况。方法将36只BALB/c雌性小鼠随机分为卵清蛋白(ovalbumin,OVA)哮喘组、OVA致敏组和健康对照组,每组12只。采用HE和PAS染色法分析肺组织炎症和粘液分泌量,血球分析仪检测肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中白细胞分类及计数,ELISA法检测肺匀浆IL-5、IL-13和补体因子D(complement factor D,CFD)水平,RT-PCR、Western blot和免疫荧光法检测肺内CTPS mRNA和蛋白的表达及定位。结果OVA致敏和哮喘组的小鼠肺部炎症、粘液分泌、IL-5和CFD的水平都显著高于健康对照组(P<0.05),且OVA哮喘组高于OVA致敏组(P<0.05)。与健康对照组相比,OVA哮喘组BALF中白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞和嗜酸性粒细胞数量及肺匀浆IL-13表达量均显著升高(P<0.05),且肺组织、肺内气道上皮细胞、肺部炎症区域内的细胞以及BALF中CD3^(+)T细胞内的CTPS蛋白表达量都显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05),部分细胞内CTPS蛋白呈棒状、条状、“C”型或月牙形等“细胞蛇”结构。结论CTPS仅在OVA诱导的激发哮喘阶段发生显著升高,其表达量的增加及形成的“细胞蛇”结构可能与肺部炎症细胞尤其是CD3^(+)T细胞的增多密切相关。

细胞蛇的研究进展

细胞蛇是近年来细胞生物学研究的热门方向之一,由于其在细胞的增殖、代谢和发育上具有一定的生物学功能,因此,对一些疾病如癌症等的临床诊断或治疗具有一定的指导意义。细胞蛇是由三磷酸胞苷合成酶(cytidine triphosphate synthetase, CTPS)聚合而成的无膜细胞器,其形成过程及功能在不同类型的细胞中不尽相同。例如:细胞蛇能促进癌细胞增殖,并使患者病情恶化;过表达的细胞蛇可抑制神经干细胞增殖,影响大脑皮层发育;在卵泡细胞中,细胞蛇相当于CTPS的存储库,在卵子发生过程起到促进细胞增殖和代谢的作用。本文就细胞蛇的形成过程及其在不同类型细胞中的功能进行阐述,以期人们进一步认识细胞蛇,并探索其潜在作用机制和应用价值。

白血病

0205944 环戊烯基胞嘧啶在小儿急性非淋巴细胞性白血病时可抑制胞苷三磷酸合成酶:化疗的相容性靶标/Verschuur A C//Eur J Cancer.-2000,36(5).-627-635医科图0205945 用小剂量甲氨蝶呤治疗与类风湿性关节炎有关的大颗粒淋巴细胞性白血病/Hamidou M A//Am J Med.-2000.108(9).-730～732

pyrG基因的克隆表达及CTPS的活性测定

为提高乳清酸到三磷酸胞苷(CTp)的转化效率,克隆并表达了编码CTP合成酶(CTPS)的基因pyrG。根据Genbank的资料,设计了pyrG的引物,经PCR扩增、酶切后,将pyrG插入到表达载体pET-28a中,构建了重组质粒pET28a-pyrG,然后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,乳糖诱导表达后,经SDS-PAGE对表达产物进行分子量鉴定。分离纯化后,对表达产物CTPS进行活性测定,并对转化工艺进行初步研究。结果:构建的工程菌产生了一种相对分子质量在60.0k的蛋白,该蛋白显示出CTPS的活性,并且可以转化乳清酸为CTP。