胞质分裂阻滞微核法对AT细胞高辐射敏感性的研究

目的 研究源于毛细血管扩张性共济失调症 (ataxia telangiectasia ,AT)患者皮肤的成纤维细胞系AT5BIVA(AT细胞 )的辐射敏感性。方法 本实验以源于正常人皮肤的成纤维细胞系GM0 63 9(GM细胞 )为对照 ,采用胞质分裂阻滞微核法 (Cytokinesis Blockmicronucleusmethod) ,在AT细胞和GM细胞经60 Coγ射线 0、1、2、3、4Gy照射后 ,观察比较AT细胞和GM细胞之间微核率及微核细胞率的差异 ,并分别进行曲线拟合。结果 在 1、2、3、4Gy剂量照射下 ,AT细胞微核率及微核细胞率均明显高于GM细胞 ,其差异有非常显著性 (P <0 0 1) ,并且两者微核率及微核细胞率均与剂量呈正相关 ,均可拟合成剂量效应直线方程y =a +bx ,微核率及微核细胞率直线回归方程斜率AT细胞明显大于GM细胞 (P <0 0 1)。结论 辐射敏感性AT细胞显著高于GM细胞 ,AT患者AT细胞具有高辐射敏感性。

民航飞行人员外周血淋巴细胞的胞质分裂阻滞微核率

[目的 ]用胞质分裂阻滞微核法观察宇宙辐射对民用航空飞行人员外周血淋巴细胞微核率的影响。 [方法 ]采集 15 0名健康飞行人员和 32名地面对照人员的外周静脉血 ,在含植物血凝素 (PHA)的RPMI 16 40培养基中 37℃培养38～ 44h ,加入细胞松弛素 B继续培养至 72h。经低渗、固定、涂片、染色 ,每例观察 5 0 0个双核淋巴细胞中的微核。 [结果 ]飞行人员的双核淋巴细胞微核率 (MNF) ( 16 15‰± 0 33‰ )、微核细胞率 (MNCF) ( 13 6 6‰± 0 2 1‰ )与地面人员的MNF( 11 48‰± 0 5 0‰ )、MNCF( 10 42‰± 0 5 7‰ )相比 ,差异有非常显著意义 (P <0 0 1)。飞行人员的MNF、MNCF与年飞行小时呈线性相关 ,MNF、MNCF随飞行人员的工龄、累积飞行小时和年龄呈反相变化。飞行人员经一个月的休假后 ,MNF、MNCF均低于连续飞行组 ,与连续飞行组比较 ,两组间差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,但近一个月未飞行组的MNF、MNCF仍显著高于地面组。在去除年龄、性别等影响因素后 ,没有发现吸烟增加飞行人员的微核。无论飞行组还是地面组 ,男女性别间微核差异无显著性 (P >0 0 5 )。 [结论 ]宇宙辐射可能引起民航飞行人员染色体损伤。胞质分裂阻滞微核法能够灵敏的反映近期内飞行负荷的差别 。

检测比较微核直径和微核率探讨胞质分裂阻滞微核测试法的敏感性

检测比较微核直径和微核率探讨胞质分裂阻滞微核测试法的敏感性沈宗丽，薛开先（江苏省肿瘤防治研究所南京２１０００９）胞质分裂阻滞微核测试法（ＣＢ─ＭＮＴ）具有仅在经过一次分裂的双核细胞中计数微核（ＭＮ）的优点。ＣＢ法是否较常规微核测试法更敏感，文献有不同...

胞质分裂阻滞微核自动化分析技术的研究进展

在辐射生物剂量估算方面,胞质分裂阻滞微核分析(CB微核法)是除染色体畸变之外被国际公认的好方法。为解决CB微核法人工检测的主观性及其费时费力问题,不少学者正在探索自动化方法来实现双核细胞微核的检测。本文通过分析国内外相关文献,将CB微核自动化分析的研究内容进行梳理和归纳,以全面展现当前CB微核自动化分析的研究现状和特点。在此基础上,预测其未来发展趋势,以期对相关领域的同行提供有益的参考。

应用胞质分裂阻滞微核细胞组学法评价三溴乙酸的遗传毒性

[目的]应用胞质分裂阻滞微核细胞组学方法[cytokinesis-block micronucleus cytome(CBMN-cyt)assay]评价三溴乙酸的遗传毒性。[方法]以小鼠淋巴瘤(L5178Y)细胞为受试细胞,分为2组。一组暴露于终浓度分别为0(阴性对照)、7.81、15.62、31.25、62.50、125.00、175.00、250.00μg/mL的三溴乙酸溶液24h,采用噻唑蓝比色法(MTT法)检测细胞毒性,并计算半数致死浓度(median lethal dose,LC50);另一组暴露于终浓度分别为0(阴性对照)、31.25、62.50、125.00、175.00μg/mL的三溴乙酸溶液24h,并设阳性对照(终浓度为0.10μg/mL丝裂霉素C),采用CBMN-cyt试验检测遗传毒性。[结果]与阴性对照组相比,31.25、62.50,125.00,175.00,250.00μg/mL三溴乙酸染毒组L5178Y细胞的存活率均较低,差异有统计学意义(P<0.05);且随着三溴乙酸染毒浓度的升高,L5178Y细胞的存活率呈明显的下降趋势(P<0.01)。三溴乙酸对该细胞的LC50为135.7μg/mL。与阴性对照比较,125.00、175.00μg/mL三溴乙酸染毒L5178Y细胞的微核率均升高,各浓度三溴乙酸染毒L5178Y细胞的核质桥率也均升高,差异有统计学意义(P<0.05);而各浓度三溴乙酸染毒L5178Y细胞的核芽率和核分裂指数(nucleus divided index,NDI)无显著改变。Pearson相关分析显示,随着三溴乙酸染毒剂量的升高,L5178Y细胞的微核率、核质桥率、核芽率均呈明显的上升趋势(P<0.01)。[结论]三溴乙酸的遗传毒性,可能与染色体损伤、DNA错误修复、染色体重组或端粒末端融合损伤有关。

微核胞质分裂阻滞细胞(CB-MNT)方法学探讨和比较

目的微核胞质分裂阻滞细胞(CB-MNT)实验方法学探讨,对CB-MNT和常规法微核(C-MNT)两种检测方法进行比较。方法选取85名从事放射作业人员外周血标本,分别采用CB-MNT法和常规法两种方法培养微核细胞。通过制片染片及镜下检查,识别双核淋巴细胞微核和转化的单核淋巴细胞微核;比较两种方法培养出的淋巴细胞的自发微核细胞率,并进行统计分析。结果采用淋巴细胞微核自发率CB法制片的结果是3.85±8.43;采用常规法制片的结果是1.13±1.60。两种方法得到的自发率差异有统计学意义(t=-6.17,P<0.01)。采用CB法制片获得的双核淋巴细胞核完整膨大,胞质清晰,微核易识别。结论胞质分裂阻滞法优于常规培养法;胞质分裂阻滞法对毒性损伤反映更加敏感;微核细胞更易识别;能减少阅片误差,结果准确可靠。建议作为职业健康体检对遗传损伤监护中实验室中的优先检查方法。

宇宙辐射对民航飞行人员淋巴细胞微核率的影响

目的探讨宇宙辐射对民航飞行人员细胞遗传学指标的影响,为辐射防护提供依据。方法用胞质分裂阻滞微核法观察宇宙辐射对外周血淋巴细胞微核率的影响。采集150名健康飞行人员和32名地面对照人员的外周静脉血,在含植物血凝素的RPMI1640培养基中37℃培养38～44h,加入细胞松弛素-B继续培养至72h。经低渗、固定、涂片、染色,每例观察500个双核淋巴细胞中的微核。结果(1)飞行人员双核淋巴细胞微核率(MNF)(16.15±0.33)‰、微核细胞率(MNCF)(13.66±0.21)‰与地面人员MNF(11.48±0.50)‰、MNCF(10.42±0.57)‰相比,差异有显著性(P<0.01);(2)MNF、MNCF与飞行人员的工龄、累积飞行小时和年龄呈反相变化;(3)飞行人员经1个月的休假后,MNF、MNCF均低于连续飞行组,与连续飞行组比较,两组间差异有显著性(P<0.05),但近1个月未飞行组的MNF、MNCF仍显著高于地面组;(4)在去除年龄、性别等影响因素后,未发现吸烟增加飞行人员的微核;(5)无论飞行组还是地面组,男女性别间微核差异无显著性(P>0.05)。结论宇宙辐射能引起民航飞行人员遗传学指标变化;胞质分裂阻滞微核法能够灵敏地反映近期内飞行负荷的差别,可用于监测辐射损伤。

用HPRT基因突变及CBMN研究AT细胞高辐射敏感性

研究了毛细血管扩张性共济失调症(Ataxia?telangiectasia,AT)患者皮肤的成纤维细胞系AT5BIVA(AT细胞)的高辐射敏感性。以源于正常人皮肤的成纤维细胞系GM0639(GM细胞)为对照,利用次黄嘌呤磷酸核糖转移酶基因(Hypoxanthinephospho?ribosyltransferase,hprt)位点突变分析技术及胞质分裂阻滞微核法(Cytokinesis?Blockmicronucleusmethod,CBMN),在AT细胞和GM细胞经Coγ射线0、1、2、3、4Gy60照射后,观察比较AT细胞和GM细胞之间hprt基因位点突变频率(hprtMF)、微核率(MNF)及微核细胞率(MNCF)的差异,并分别进行曲线拟合。在各剂量点,AT细胞hprt基因突变频率、微核率及微核细胞率均明显高于GM细胞,其差别具有显著性统计意义(p<0.01);AT和GM细胞hprt基因突变频率、微核率及微核细胞率均与照射剂量呈正相关,可拟合成剂量效应直线方程y=a+bx。结果表明,毛细血管扩张性共济失调症患者AT细胞辐射敏感性显著高于GM细胞,具有高辐射敏感性。

二溴乙腈对L5178Y细胞的遗传毒性及促凋亡作用

目的:研究饮用水中消毒副产物二溴乙腈对小鼠淋巴瘤L5178Y细胞的遗传毒性及促凋亡作用。方法:以L5178Y细胞为靶细胞,采用胞质分裂阻滞微核组学法(CBMN-cyt)和流式细胞术(FCM)分别检测不同浓度(0.1、1、5和10μmol/L)二溴乙腈对L5178Y细胞的遗传毒性及凋亡诱导作用。结果:与阴性对照比较,1和5μmol/L二溴乙腈染毒L5178Y细胞的微核率显著升高(P<0.05);1和10μmol/L二溴乙腈染毒L5178Y细胞的核质桥率显著升高(P<0.05);10μmol/L二溴乙腈染毒L5178Y细胞的核芽率升高(P<0.05);5和10μmol/L二溴乙腈染毒L5178Y细胞的核分裂指数率显著下降(P<0.05)。二溴乙腈各剂量组L5178Y细胞凋亡率均明显高于对照组,差异均具有统计学意义(P均<0.05)。结论:二溴乙腈可致L5178Y细胞遗传毒性并诱导其凋亡。

1,2,4-苯三酚与氢醌对人外周淋巴细胞染色体的损伤研究

目的 研究苯的两种代谢产物氢醌、1,2 ,4-苯三酚对人外周淋巴细胞的染色体损伤。 方法 用不同浓度的氢醌、1,2 ,4-苯三酚与联合对人外周淋巴细胞染毒 72h ,计算 10 0 0个双核细胞中含有微核的细胞数 (BNMN/10 0 0 )。 结果 大于 5 0 μmol/L染毒剂量的氢醌、1,2 ,4-苯三酚BNMN/10 0 0与染毒剂量存在明显的剂量 -效应关系 ,联合染毒与两种代谢物单独染毒之间比较 ,呈显著性增高 ,表明这两种代谢物之间存在协同作用。 结论 氢醌、1,2 ,4-苯三酚可致人外周淋巴细胞染色体损伤 ,两者之间存在协同作用。

体外与体内肝细胞微核检测方法研究

目的：分别利用遗传毒性阳性剂开展体外微核细胞组学和SD大鼠体内肝细胞微核试验,对2种评价方法进行探讨。方法：①体外肝细胞微核细胞组学：在无S9代谢活化条件下使用不同浓度环磷酰胺（CPA,10或40μg·m L^-1）或丝裂霉素C（MMC,0.05,0.1或0.2μg·m L^-1）与HepaRG或HepG2细胞作用4或24 h,开展胞质分裂阻滞法微核细胞组学试验。计算每个剂量胞质分裂增殖指数（CBPI）和复制指数（RI）、坏死（Nec）和凋亡（Apop）细胞的千分率以及双核细胞中微核（MN）、核芽（NBUD）和核质桥（NPB）出现的千分率。②体内骨髓微核与肝微核试验：使用6~7周龄SD大鼠,连续3 d分别在0,24和45 h经口灌胃dd H2O,CPA（10,20或40 mg·kg^-1）或EMS（200 mg·kg^-1）。末次给药后取单侧股骨和肝左叶中间约5 mm3大小组织分别制作骨髓和肝细胞微核涂片。镜检计数每组动物的嗜多染红细胞微核率（MNPCE‰）和肝细胞微核率（LMN‰）的平均值与标准差。结果：① HepaRG细胞经CPA或MMC处理可见MN‰,NBUD‰及NPB‰呈剂量相关性增加,中高剂量组与对照组比较有显著差异（P〈0.05或P〈0.01）;HepG2细胞NBUD‰和NPB‰背景值较高,在高背景值的基础上经CPA或MMC处理均见统计学意义上的显著增加,且增加幅度较大（P〈0.01）;MMC处理组以上2项指标的增幅较CPA处理组更显著。NPB‰不是HepG2细胞的染色体损伤敏感指标。②连续3 d经口灌胃CPA或EMS均可引起SD大鼠MNPCE‰和LMN‰升高。结论：利用HepaRG开展体外微核细胞组学,可在不添加S9的条件下经阳性剂CPA或MMC处理4 h获得阳性结果,是开展体外肝细胞微核试验的理想研究对象。体内肝细胞微核实验的敏感性和特异性较好,该方法与SD大鼠重复给药毒性实验结合,可对药物肝毒和遗传毒性进行综合预测。

职业接触抗癌药物护士的外周血淋巴细胞微核组学分析

目的通过对配置处理抗癌药物的护士进行外周血淋巴细胞微核组学分析,评估职业暴露于抗癌药物的遗传毒性危害。方法采用目的抽样方法,根据是否接触抗癌药物,选取2019年3—5月在深圳市龙岗中心医院和龙岗区人民医院常规使用抗癌药物治疗的肿瘤内科、血液内科、妇科、输液室、心胸外科以及甲乳外科的82名女性护士为暴露组,选取90名未接触抗癌药物的护士作为非暴露组,问卷调查两组调查对象个人资料,胞质分裂阻滞微核细胞组学试验检测其遗传毒性损伤。结果暴露组平均微核细胞率、平均微核率分别为(5.07±2.62)‰和(5.71±3.29)‰,显著高于非暴露组[(3.70±2.51)‰和(4.06±2.88)‰],差异均有统计学意义(均P<0.05);暴露组平均微核细胞率和平均微核率在不同年龄、工龄、接触抗癌药物年限以及不同专科间比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论长期职业接触抗癌药物的护士潜在遗传毒性损伤,危害程度可能随暴露时间的增加而递增,应重视抗癌药物对肿瘤相关科室护士的职业健康危害,建议增加外周血淋巴细胞微核组学体检项目,及时发现异常检测结果,实现预防职业伤害,促进职业健康的目的。

云南正常人群基因组健康初探

人类基因组稳定性与人类健康具有密切的联系,基因组健康水平降低,可导致神经系统、循环系统、免疫系统等多类退行性病变危险度升高。本研究采用胞质分裂阻滞微核分析(CBMN),评价了云南正常人群淋巴细胞的基因组健康水平。研究发现,人类淋巴细胞自发微核频率随年龄增加而升高(r=0.468,p<0.001),且女性平均微核率显著高于男性(r=2.438,p<0.05)。云南籍不同年龄和性别的正常人群基因组健康的基础数据结构,为基于基因组健康的个性化营养干预提供了科学依据。

温室作业人员农药暴露致外周血淋巴细胞基因组不稳定表型

[目的]分析温室作业农药暴露对菜农外周血淋巴细胞基因组不稳定性的影响及其细胞毒作用。[方法]对安丘市从事温室蔬菜大棚种植者583名及普通农民576名进行问卷调查,根据农药暴露强度,将蔬菜大棚种植组所有调查对象分为低(n=175)、中(n=181)、高(n=212)3个暴露组。利用胞质分裂阻滞法微核细胞组学试验评价温室农药暴露所致菜农基因组不稳定性和细胞毒性。[结果]随着农药暴露水平的增加,微核率、核质桥、核芽发生率、细胞坏死率均有增加趋势(均P<0.01),双核细胞率和核分裂指数具有降低趋势(P<0.01),而凋亡细胞未发现明显的变化趋势。与对照组比较,中、高暴露组上述各指标差异皆具有统计学意义(均P<0.05)。[结论]温室作业人群农药暴露会诱发基因组不稳定表型,并具有较强的细胞毒性。

高空环境对民航飞行人员细胞遗传学指标的影响

目的探讨宇宙辐射对民航飞行人员遗传学指标的影响,为辐射防护提供理论依据。方法用胞质分裂阻滞微核法观察宇宙辐射对外周血淋巴细胞微核率的影响。采集150名健康飞行人员和32名地面对照人员的外周静脉血,在含植物血凝素(PHA)的RPMI1640培养基中37℃培养38～44h,加入细胞松弛素-B继续培养至72h。经低渗、固定、涂片、染色,每例观察500个双核淋巴细胞中的微核。结果(1)飞行人员的双核淋巴细胞微核率(MNF)(16.15‰±0.33‰)、微核细胞率(MNCF)(13.66‰±0.21‰)与地面人员的MNF(11.48‰±0.50‰).MNCF(10.42‰±0.57‰)相比,差异有非常显著性(P<0.01);(2)飞行人员的MNF、MNCF与年飞行小时呈线性相关;(3)MNF、MNCF随飞行人员的工龄、累积飞行小时和年龄呈反相变化;(4)飞行人员经一个月的休假后,MNF、MNCF均低于连续飞行组,与连续飞行组比较,两组间差异有显著性(P<0.05),但近一个月未飞行组的MNF、MNCF仍显著高于地面组;(5)在去除年龄、性别等影响因素后,没有发现吸烟增加飞行人员的微核;(6)无论飞行组还是地面组,男女性别间微核差异无显著性(P>0.05)。结论宇宙辐射能引起民航飞行人员遗传学指标变化。胞质分裂阻滞微核法能够灵敏的反映近期内飞行负荷的差别,可作为近期辐射损伤的监测指标。

苯作业工人外周血象与染色体损伤的观察

目的探讨苯接触对鞋厂工人外周血象及细胞遗传学损伤效应的影响。方法测定作业场所空气中苯浓度,检查265名苯接触工人与178名对照的外周血WBC、Hb、PLT等指标。应用外周血淋巴细胞＂胞质分裂阻滞微核（CBMN）试验＂评价研究对象外周血淋巴细胞染色体损伤。结果苯接触组工人外周血RBC、HCT、MCH、MCV、PLT、RDW和MCHC异常率与对照组比较,差异具有统计学意义,χ2值分别为36.17、21.05、33.36、12.57、20.56、26.31、39.27,P均〈0.01;其中将接触组按接苯工龄分为≤1年、1~2年和〉2年3组,MCV、Hb异常率随着工龄的增长而有增高的趋势,且差异具有统计学意义（P〈0.05）;进一步按性别分类,发现苯接触组女工HCT、MCH、MCV、PLT、Hb、RDW异常率显著高于男工,χ2值分别为30.66、17.95、32.19、10.28、65.38、26.52,P均〈0.01。苯接触组CBMN率（3.04±1.87）‰,P〈0.001,显著高于对照组[（0.39±0.72）‰]。结论短期苯接触对作业工人的血液系统及染色体损伤有一定影响,并且上述指标的改变早于白细胞的异常,在职业性苯中毒的早期诊断中具有一定意义。

蔬菜大棚土壤有机提取物致基因组不稳定表型研究

目的研究温室土壤中有机提取物(extractable organic matter,EOM)的遗传毒性。方法采集并制备某蔬菜大棚土壤的EOM。40只健康10周龄清洁级昆明雄性小鼠随机分为5组:阴性对照(DMSO)组和低剂量(0.5 g/ml)、中剂量(1.5 g/ml)和高剂量(3 g/ml)EOM染毒组以及阳性对照(环磷酰胺,100 mg/kg体重腹腔注射,染毒2次)组,每组8只。采用灌胃方式进行染毒,每天1次,连续染毒4周。采用胞质分裂阻滞微核细胞组学试验检测有机提取物所致基因组不稳定表型和细胞毒性。结果随着有机提取物染毒浓度的增加,小鼠淋巴细胞微核细胞率、微核率、核质桥率、核芽率、细胞坏死率均呈上升趋势,双核细胞率和核分裂指数呈下降趋势,经相关分析,均P<0.05;而细胞凋亡率呈先升高后下降的趋势。结论温室土壤中有机提取物可以诱使小鼠外周血淋巴细胞产生基因组不稳定表型,并产生较强的细胞毒性,提示具有遗传毒性。