孤核受体NR4A1通过线粒体机制调控细胞凋亡

孤核受体NR4A1参与调节细胞生存和凋亡。亚细胞定位研究发现,NR4A1定位于细胞核,表明其核因子的功能;在细胞质中也存在NR4A1,主要定位在线粒体,提示其通过线粒体机制调节细胞凋亡和自噬功能。在细胞核内,NR4A1作为一种促进细胞增殖的核因子发挥功能;在细胞质中,NR4A1与Bcl-2家族基因相互作用,通过直接或间接影响线粒体功能,导致细胞色素C释放入胞质,经线粒体相关的信号机制促进细胞凋亡,或在细胞自噬过程中发挥作用。现综述NR4A1通过线粒体参与细胞内的凋亡和自噬过程,探讨NR4A1在细胞质中的功能。

妊娠期高血压疾病患者外周血单个核细胞及胎盘晚期糖基化终末产物受体表达及与氧化应激的关系

目的探讨外周血单个核细胞(PBMCs)及胎盘晚期糖基化终末产物受体(RAGE)表达及其与氧化应激的关系,了解其在妊娠期高血压疾病发生、发展中的作用。方法同期收治的轻、中度妊娠期高血压疾病患者15例,重度妊娠期高血压疾病患者15例,正常晚期妊娠20例,抽取肘静脉血及留取胎盘,用蛋白质免疫印迹法(Westernblot)测定PBMCs及胎盘RAGE蛋白的表达,并测定血浆及胎盘丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果妊高征患者血浆及胎盘MDA水平高于正常晚期妊娠组,且重度妊娠期高血压疾病患者较轻、中度妊娠期高血压疾病患者升高(P均<0.01);轻、中度妊娠期高血压疾病组血浆及胎盘SOD活性低于正常晚期妊娠组(血浆P<0.01,胎盘P<0.05),在重度妊娠期高血压疾病组血浆及胎盘SOD活性进一步降低,低于轻、中度妊娠期高血压疾病组(血浆P<0.05,胎盘P<0.01);RAGE蛋白在正常晚期妊娠组、轻、中度妊娠期高血压疾病组和重度妊娠期高血压疾病组胎盘中的表达量分别为0.305±0.045、0.439±0.047、0.975±0.057,在PBMCs中的表达量分别为0.301±0.067、0.399±0.062、0.572±0.089,RAGE蛋白在轻、中度妊娠期高血压疾病组胎盘和PBMCs中的表达高于正常晚期妊娠组(P均<0.01),在重度妊娠期高血压疾病组中的表达高于正常晚期妊娠组及轻、中度妊娠期高血压疾病组(P均<0.01);PBMCs内RAGE蛋白表达与血浆MDA水平呈中度正相关(轻、中度妊娠期高血压疾病组:r=0.46,P<0.05;重度妊娠期高血压疾病组:r=0.47,P<0.05);胎盘RAGE蛋白表达与胎盘MDA水平呈高度正相关(轻、中度妊娠期高血压疾病组:r=0.82,P<0.01;重度妊娠期高血压疾病组:r=0.88,P<0.01)。结论 PBMCs及胎盘RAGE表达与氧化应激相互关联,共同在妊高征的发病机制中发挥了重要作用。

金属离子刺激单核-巨噬细胞核因子κB受体活化子的研究

目的:探讨Cr3+、Co2+对体外培养的小鼠单核-巨噬细胞(RAW264.7)的细胞毒性以及刺激单核-巨噬细胞表达核因子κB受体活化子(RANK)在人工关节术后引起骨溶解的分子生物学机制。方法:在体外培养单核-巨噬细胞(RAW264.7)。用Co2+、Cr3+分别干预单核-巨噬细胞,不同时间用噻唑蓝(MTT)比色法检测其细胞活性。将细胞分为5组,A组为单纯单核-巨噬细胞,B组为单核-巨噬细胞+500mg/LCr3+,C组为单核-巨噬细胞+500mg/LCr3++20μmol/LSP600125,D组为单核-巨噬细胞+10mg/LCo2+,E组为单核-巨噬细胞+10mg/LCo2++20μmol/LSP600125。用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)在24h、48h检测各组细胞的RANK mRNA的表达量。结果:与A组相比,B组和D组单核-巨噬细胞的细胞活力明显下降。在24h、48h时,Co2+和Cr3+均能刺激单核-巨噬细胞使其细胞RANK mRNA表达量增强(P<0.05),且SP600125可抑制Cr3+、Co2+刺激的单核-巨噬细胞RANK mRNA表达(P<0.05)。结论:金属离子对单核-巨噬细胞有细胞毒性,且能够诱导单核-巨噬细胞RANK mRNA的表达,此外JNK通路参与金属离子刺激单核-巨噬细胞表面RANK的表达。

人前列腺癌细胞中肝X受体特异性激动剂GW3965对核受体结合蛋白1的影响

目的探讨人前列腺癌细胞系DU145细胞中肝X受体(liver X receptor,LXR)特异性激动剂GW3965对核受体结合蛋白1(nuclear receptor binding protein 1,NRBP1)的表达调控作用。方法采用MTT法检测不同浓度GW3965(浓度分别为0.5、5、10μmol/L)作用24 h后对DU145细胞增殖的影响。在人前列腺癌DU145细胞中用LXR的特异性激动剂GW3965处理24 h后,经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测LXR特异性靶基因三磷腺苷结合A1(ATP-bindingcassette A1,ABCA1)转录水平的表达情况;随后在转录水平和翻译水平检测NRBP1的表达。结果 LXR特异性激动剂GW3965各实验组对细胞的活性和增殖无影响(P>0.05)。GW3965作用于DU145细胞后,ABCA1转录水平呈剂量依赖性升高,表明LXR在DU145细胞中具有功能活性。LXR经过活化后在转录和翻译水平对NRBP1的抑制作用呈剂量依赖性降低。结论 LXR在DU145细胞中可抑制NRBP1的表达。

GW4064在人前列腺癌细胞中对核受体结合蛋白1的影响

目的探讨在人前列腺癌细胞DU145中法尼酯X受体(farnesoid X receptor,FXR)的特异性激动剂GW4064对核受体结合蛋白1(nuclear receptor binding protein 1,NRBP1)的表达调控作用。方法采用MTT法检测不同浓度GW4064(浓度分别为0.5、5.0、10.0μmol/L)作用24 h后对DU145细胞增殖的影响。用FXR的特异性激动剂GW4064处理DU145细胞24 h后,经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测FXR的特异性靶基因小异二聚体伴侣分子(small het-erodimer partner,SHP)转录水平的表达情况;随后在转录水平和蛋白水平检测NRBP1的表达。结果 FXR的特异性配体GW4064各浓度实验组对细胞的活性和增殖无影响(P>0.05)。GW4064作用于DU145细胞后,SHP转录水平呈剂量依赖性升高,表明FXR在DU145细胞中具有功能活性。FXR经过活化后在转录水平和翻译水平对NRBP1的抑制作用呈剂量依赖性。结论 FXR在DU145细胞中可抑制NRBP1的表达。

曲格列酮在人前列腺癌细胞中对核受体结合蛋白1表达调控的影响

目的探讨在人前列腺癌株DU145细胞中过氧化物酶体增殖活化受体γ(PPARγ)的特异性激动剂曲格列酮对核受体结合蛋白1(NRBP1)的表达调控作用。方法 MTT法检测不同浓度曲格列酮(浓度分别为0.5、5.0、10.0μmol/L)作用24 h后对DU145细胞增殖的影响。在DU145细胞中用PPARγ的特异性激动剂曲格列酮处理24 h后,在转录水平和翻译水平检测NRBP1的表达。结果曲格列酮各浓度实验组对细胞的活性和增殖无影响(P>0.05)。曲格列酮作用于DU145细胞后在转录水平和翻译水平对NRBP1有明显抑制作用。结论 PPARγ在DU145细胞中可抑制NRBP1的表达。

朱砂安神丸、朱砂、硫化汞和氯化汞对大鼠肝脏细胞色素P450酶的影响

目的探讨硫化汞(HgS)、氯化汞(HgCl2)、朱砂及其复方朱砂安神丸对肝细胞色素P450酶的影响。方法雄性SD大鼠ig给予朱砂安神丸1.4 g.kg-1、朱砂0.15 g.kg-1、HgS 0.15 g.kg-1和HgCl20.02 g.kg-1,每天1次,连续21 d,观察大鼠日常行为变化,记录体质量,末次给药后处死大鼠,检测血清谷丙转氨酶(ALT)、肝指数和肝汞蓄积量;RT-PCR法检测肝金属硫蛋白-2(MT-2),CYP1A1,CYP1A2,CYP3A2,CYP4A10,CYP2B1和结构型雄烷受体(CAR)基因的表达。结果与正常对照组相比,HgCl2组大鼠饮食、活动减少,精神较差,体质量明显降低,肝有增大趋势,肝汞蓄积量明显升高(P<0.05),MT-2,CYP1A1,CYP1A2基因表达明显升高(P<0.05),CYP4A10有增高趋势,CAR基因表达明显降低。与正常对照组相比,朱砂、朱砂安神丸和HgS组的肝指数、ALT和汞蓄积量没有明显差异,同时朱砂安神丸、朱砂和HgS组的MT-2,CYP1A1,CYP1A2,CYP3A2,CYP4A10,CAR及CYP2B1基因表达没有明显变化,但朱砂可明显上调CYP3A2基因表达。结论朱砂安神丸、朱砂和HgS短期给药肝组织汞蓄积量远小于HgCl2,未改变MT-2、CYP酶、CAR基因的表达,但朱砂可上调CYP3A2基因表达,而HgCl2可明显影响MT-2、CYP酶、CAR的基因表达。

胆汁酸核受体FXR在非酒精性脂肪性肝病中的作用

背景：肝细胞内三酰甘油堆积和胰岛素抵抗是非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的基本特征，贯穿NAFLD的整个病程。胆汁酸对食物性脂类的吸收和胆固醇代谢具有重要调控作用，亦是平衡糖脂代谢的重要信号分子，其主要通过法尼酯衍生物x受体（FXR）发挥作用。目的：评估FXR激动剂GW4064对肝细胞内脂质堆积和三酰甘油含量的潜在作用．同时探讨FXR在NAFLD患者肝组织中的表达情况。方法：以软脂酸和油酸（2：1）混合液处理人张氏肝细胞株，建立肝细胞脂肪变性模型，干预组予FXR激活剂GW4064（10μmol／L）处理。以油红染色测定细胞内脂质含量．并检测三酰甘油含量。以免疫组化法检测正常对照组和NAFLD患者肝组织中的FXR表达情况。结果：FXR激活剂GW4064可明显减少脂肪变肝细胞中脂滴和三酰甘油含量。FXR在NAFLD患者肝组织中的表达率显著低于正常对照组（P〈0．01）。结论：FXR激动剂GW4064可有效缓解肝细胞的脂肪变程度；FXR在NAFLD患者中的表达受抑制。FXR改善NAFLD的分子机制值得进一步研究。

孕烷X受体介导佐米曲坦对大鼠肝细胞色素P450 CYP 3A的诱导作用

目的:考察佐米曲坦对大鼠肝细胞色素P450 CYP3A1/2的诱导是否由孕烷X受体(PXR)介导。方法:在构建的基于PXR的荧光素酶报告基因上,观察不同浓度佐米曲坦(10、50、100μmol.L-1)对大鼠肝细胞色素P450 CYP3A1/2的诱导作用。以经典的诱导剂16α-氰基孕烯醇酮(PCN)作为阳性对照,空白溶剂(DMSO)作为阴性对照。结果:与阴性对照组相比,阳性对照组、佐米曲坦在100μmol.L-1浓度时,对CYP3A1有明显的诱导作用,活性分别增加了1.93、1.96倍(P<0.05);阳性对照组、佐米曲坦10μmol.L-1、50μmol.L-1浓度组对CYP3A2也有明显的诱导作用,其活性分别增加了2.51、2.10、1.63倍(P<0.01、<0.05)。结论:PXR通路是佐米曲坦诱导大鼠CYP3A1/2的一个重要途径。

核受体在原发性胆汁性胆管炎发生发展中的作用

原发性胆汁性胆管炎(PBC)是一种原因不明的慢性进行性肝内胆汁淤积性自身免疫性肝病。目前PBC的病因和发病机制尚不完全清楚。核受体是配体依赖性转录因子超家族,通过信号分子与转录应答间构建联系,调控细胞的生长和分化。人类中核受体家族包含48个成员,如过氧化物酶体增殖物激活受体、孕烷X受体、组成型雄烷受体、肝X受体、法尼醇X受体、维生素D受体、糖皮质激素受体等,受到广泛关注。这些核受体在转录水平调节胆汁酸代谢的关键酶和转运体基因,从而调节体内胆汁酸水平及参与炎症反应。而胆汁酸代谢紊乱和炎症的持续可能是PBC发生发展的关键因素。就核受体在PBC发生发展中的研究进展作一综述,为PBC的发病机制和寻找新的治疗靶点提供理论基础。

维甲酸相关孤核受体α抗肝纤维化作用研究进展

肝纤维化是肝脏对各种致病因子（相关肝炎病毒、慢性酒精中毒、脂肪性肝炎等）所致的慢性损伤的一种慢性炎性反应过程，

维甲酸相关孤核受体α及其激动剂SR1078的研究进展

在过去的一段时间,一些关于维甲酸相关孤核受体α（retinoid acid receptor related orphan receptorα,RORα）研究迅速增加。RORα在一些病理生理功能中的潜在作用机制,特别是ROR缺陷小鼠和基因表达分析的特性RORα的关键功能,为其各种生理过程的调节提供了解释。RORα进一步参与各种代谢途径的调节,使体内能量平衡。此外，ROR（x调节生物钟几个组件的表达，可能参与生物钟的整合和节奏下游（代谢）基因的表达模式。

雌激素受体相关受体α和雌激素受体α在子宫内膜癌中的表达及临床意义

目的：探讨孤儿核受体-雌激素受体相关受体（ERR）α及雌激素受体（ER）α在子宫内膜癌发生、发展中的作用以及临床应用价值。方法：采用免疫组化法检测35例子宫内膜腺癌组织中ERα和ERRα的表达，评估其与临床病理参数之间的关系。结果：Ⅰ期子宫内膜癌组织中ERα的阳性表达率明显高于Ⅱ-Ⅳ期者（P=0．005）；而ERRα的阳性表达率明显低于Ⅱ～Ⅳ期者（P=0．007）。ERα（＋）和ERRα（-）组中Ⅰ期子宫内膜癌的比例、G1～2级者及肌层浸润深度〈1／2者的数目均明显高于ERα（-）ERRα（＋）组（P=0．000，P=0．031和P=0．022）。结论：ERα可作为子宫内膜癌预后良好的指标，而ERRα可能是子宫内膜癌预后不良的指标，二者联合监测有可能提高临床预测价值。

RNA干扰技术在药物转运体研究中的应用

RNA干扰是一种利用双链RNA分子特异的沉默靶基因表达的技术,目前已广泛用于基础生物医学研究。作为一种高选择性和有效的基因调控手段,这一技术也已用于临床疾病的治疗研究和药物转运体的研究。药物转运体是一类细胞膜蛋白,在药物的吸收、分布和排泄中发挥重要作用。转运体功能的抑制或缺失将改变药物的清除和药代动力学,导致药效降低或毒性增加。因此,在新药研发以及药物临床应用中,研究药物转运体在药物跨膜转运、组织分布、排泄清除和药-药相互作用中的作用,对于药物的有效安全使用,具有重要意义。RNA干扰技术在药物转运体介导的药物转运和药-药相互作用研究方面,具有明显的优势。本文对近年来RNA干扰技术在药物转运体研究中的应用进行综述,重点阐述这一技术在药物转运体介导的肿瘤耐药、药物体内转运、清除和相互作用研究中的应用,为药物转运体的功能和调节研究提供参考。

急性肺损伤大鼠肺组织PPARαmRNA表达的变化

目的:观察内毒素(LPS)复制的急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织过氧化物酶增殖体激活受体α(PPARα)mR-NA表达的变化,探讨PPARα在ALI中可能的作用。方法:将40只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、LPS致伤1h组、2h组、4h组和8h组。用LPS(5mg/kg)静脉注射复制大鼠ALI模型,分别在LPS致伤后1h、2h、4h、8h时处死大鼠,采用RT-PCR与ELISA法检测肺组织中PPARα和肿瘤坏死因子α(TNFα)mRNA的表达及肺组织匀浆中TNFα浓度。结果:LPS致伤后2h、4h、8h肺组织病理积分较对照组明显升高(P均<0.01);LPS致伤后2h、4hPPARαmRNA表达(IOD值)较对照组显著降低(P均<0.05);而LPS致伤后1h、2h、4h、8hTNFαmRNA(IOD值)和蛋白水平表达均较对照组显著升高(P均<0.01)。结论:PPARαmRNA在ALI大鼠肺组织表达降低;而肺组织TNFαmRNA和蛋白水平均升高。该研究提示PPARα在ALI的发病机制中具有一定的作用。

小鼠肝脏内组成型雄烷受体基因表达剪切突变体的研究

目的:研究组成型雄烷受体(CAR)在小鼠肝脏内是否存在剪切突变体。方法:以小鼠的肝脏为原料提取核酸,采用逆转录的方法获得小鼠的组成型雄烷受体的cDNA序列,并将其构建到T载体中进行测序分析。结果:实验发现CAR在小鼠肝脏内有不同的剪切体存在。结论:剪切体的不同主要集中在受体结合部位,估计这种不同与不同外源性物质对受体的调节功能不同有关。

感染和炎症对脂代谢的影响

感染和炎症引起的急性期反应可以导致多种脂质和脂蛋白改变。产生这些变化的分子机制与许多核受体有关，如过氧化物酶增生物激活受体（PPAR）、肝X受体（LXR）、核黄素X受体（RXR）、法尼醇X受体（FXR）。近年来，人们对感染和炎症引起的脂代谢及相关核受体的变化进行了大量研究，现对其进行一简要回顾。

肝X受体与子痫前期关系的研究进展

肝X受体(liver X receptor,LXR)是细胞核受体超家族的成员之一,也曾被称为孤儿受体。现已经明确LXR包括LXRα(NR1H3)和LXRβ(NR1H2)两种同源亚型。研究发现,LXR与甾醇调节元件结合蛋白(SREBP-1)、氧化修饰低密度脂蛋白(oxLDL)、一氧化氮(NO)、基质金属蛋白酶(MMPs)、Endoglin(CD105)、人绒毛膜促性腺激素(hCG)等存在联系,而这些因素又参与子痫前期的发病,证实了LXR与脂类的代谢、血管内皮的损伤、滋养细胞的增殖和侵袭等有关。因此LXR表达异常可能在子痫前期的发生发展中起重要作用。

自动定量分析法测定表皮生长因子受体在口咽癌中的定量表达

目的评价自动定量分析法(automated qua nlitative analysis,AQUA)测定表皮生长因子受体(epidermaI growth factor receptor,EGFR)在口咽部鳞状细胞癌组织中的表达水平,了解其在判定预后中的价值。方法AQUA系统分析了一个由95例口咽癌石蜡标本组成的组织微阵列中EGFR的表达,并进行临床和组织病理学资料的相关性分析,将细胞角蛋白(cytokeratin)设为标志物,将数码相机自动拍摄的显示其表达强度的图像载入自动分析系统,设定了每个微阵列点的肿瘤范围,同时用荧光色素原Cy5的耦连抗体显示靶抗原EGFR,并自动计算EGFR表达的像素密度,将其表达数字化,这样就产生了一个数字化的连续变量,它与单位面积内阳性表达的靶抗原分子数量成正比。按表达变量的中位数划分其表达强弱,分成高、低表达组。结果①5年局部复发率,肿瘤组织中EGFR细胞高表达组为57.8％,而低表达组为17.2％,相比有显著的统计学意义(P＜0.01)；在肿瘤组织中EGFR细胞核高表达组的5年局部复发率为54.4％,低表达组为21.4％,相比也有统计学意义(P＜0.05)；②在5年无瘤生存率方面,EGFR肿瘤细胞高表达组(19.0％)及细胞核高表达组(19.0％),分别与细胞低表达组(43.4％)和细胞核低表达组(44.8％)相比也有显著的统计学差异(P均＜0.05)：③多变量风险回归分析,肿瘤细胞和细胞核EGFR高表达都是一个独立的预后负相关因子,有统计学意义。结论AQUA系统可以有效地对石蜡组织切片中EGFR的表达进行连续变量分析,揭示了EGFR的表达与其产生的生物学作用的联系,EGFR的AQUA数值有望成为能预测EGFR靶向治疗敏感性的一个生物学指标。