日本血吸虫Mf1和胞质氨基肽酶基因的亚克隆表达与免疫保护效果测定

目的 在大肠杆菌中高效表达日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)Mf1蛋白和胞质氨基肽酶 (cytosolaminopeptidase ,CA) ,并对表达产物进行免疫保护效果测定。 方法 将SjMf1基因和SjCA基因亚克隆至 pGEX - 5X - 3载体 ,转化入感受态大肠杆菌ER2 688,在IPTG诱导下进行表达 ,表达产物免疫小鼠 ,免疫用抗原剂量为 50 μg/次 /鼠 ,免疫 3次后进行攻击感染 ,观察诱导产生的减虫效果。结果 在IPTG诱导下 ,表达载体中的SjGST基因与重组的SjMf1基因和SjCA基因在大肠杆菌中获得了高效表达 ,形成SjGST -Mf1和SjGST -CA融虫蛋白 ,用这两种融合蛋白免疫小鼠 ,分别诱导产生了 39 1 5 %和 2 6 57%的减虫率。结论 SjMf1和SjCA基因亚克隆至pGEX - 5X - 3载体后可在大肠杆菌中高效表达 。

重组日本血吸虫胞质氨基肽酶粘膜免疫诱导小鼠抗攻击感染保护力的研究

目的 探讨重组日本血吸虫胞质氨基肽酶粘膜免疫诱导小鼠抗攻击感染的保护力。 方法 实验小鼠分成 4组 ,每组 11只 ,包括CTB、rSjGST2 6+CTB、rSjGST -CA +CTB滴鼻免疫组和PBS滴鼻免疫为对照组。在第 3次免疫后 2周 ,每只经腹部感染 (4 0± 1)条尾蚴。 45d宰杀动物 ,观察减虫率和减卵率。在初次免疫前和攻击感染前采集唾液和尾静脉采血 ,ELISA检测血清及唾液内特异抗体水平。 结果 血清特异IgA和IgG及唾液内sIgA水平升高。rSjGST -CA +CTB和rSjGST2 6+CTB滴鼻免疫组减虫率分别为 2 9 62 %和 3 1 5 5 %。每克肝减卵率分别为 45 0 0 %和63 3 4%。

核酸疫苗SjCA/pc和SjMf1/pc在小鼠体内的表达

为了观察核酸疫苗 Sj CA / pc和 Sj Mf1/ pc在小鼠体内的表达 ,取昆明鼠 ,于其后腿外侧肌注免疫 Sj CA/ pc和 Sj Mf1/ pc,2 d后剖杀动物 .取注射部位肌肉作石蜡切片 ,免疫组化分析 ,荧光显微镜下镜检 .结果表明 ,Sj CA/ pc和 Sj Mf1/ pc在小鼠注射部位肌肉可见黄绿色荧光 ,而对照组无此现象 .可见 ,Sj CA/ pc和 Sj Mf1/ pc可在小鼠体内表达 .