磷酯酶C对人血小板细胞质游离钙离子浓度的影响

目的 测定磷酯酶C(phospholipaseC ,简称PLC ,下同 )对静息状态和激活状态下人血小板胞质游离钙离子浓度的影响 ,从而进一步阐明PLC抗血小板聚集作用的机制。方法 将健康成人的洗涤血小板用荧光指示剂Fura 2 /AM进行负载 ,分别用生理盐水、ASA和不同剂量的PLC处理荧光负载后的血小板 ,采用双波长荧光分光光度法分别测定经过不同处理后的血小板在静息状态和以ADP为诱导剂时的激活状态下的胞质游离钙离子浓度 [Ca2 + ]i。结果 以健康成人血为样品时 ,经生理盐水、ASA 334μmol·L-1、2 5、3 75、5、10和 2 0UPLC·ml-1处理后的血小板 ,在静息状态下测得的胞质游离 [Ca2 + ]i 浓度 (nmol·L-1)分别为15 2 5 5± 15 0 7,131 6 3± 15 5 8,14 0 2 7± 12 0 3,139 4 8± 1 73,12 1 11± 9 5 8,116 6 2± 15 96和 10 7 2 0± 17 0 7,而以ADP为诱导剂激活血小板后测得的胞质游离 [Ca2 + ]i(nmol·L-1)分别为 90 2 6 2± 94 74 ,6 87 99± 6 2 86 ,810 99± 72 37,70 1 73± 2 1 37,4 2 9 6 7± 71 5 9,342 82± 4 4 86和 2 6 3 2 7± 2 5 4 6。以生理盐水作为对照 ,ASA 334μmol·L-1、2 5、3 75、5、10和 2 0UPLC·ml-1剂量组对激活状态下血小板胞质 [Ca2 + ]i 的抑制率I(% )分别为 2 5

小麦条锈菌胞质游离钙离子动态检测方法的建立

胞质游离钙离子变化与植物病原真菌侵染寄主的动态过程具有重要的关联性。本研究以侵染小麦叶片的条锈菌31号生理小种(CYR31)为材料,以孵育法将Ca2+荧光探针Fluo-3-AM载入到小麦条锈菌细胞中,并结合激光共聚焦扫描显微技术,建立了测定侵染过程中条锈菌胞质游离Ca2+分布的试验方法。结果表明,采用10μmol/L Fluo-3-AM装载顺次进行低温4℃孵育1h,25℃孵育1h,可获得较为理想的条锈菌胞质游离Ca2+染色结果。该方法可用于检测不同侵染阶段的小麦条锈菌细胞质游离钙离子的分布变化,为进一步研究锈菌胞内钙离子动态与侵染寄主的关联性提供了技术支撑。

奥曲肽对大鼠肝星状细胞胞质内游离钙及细胞增殖的影响

目的:探讨在常氧和低氧条件下奥曲肽(octreotide)对大鼠肝星状细胞(HSC)胞内游离钙[Ca2+]i及增殖的调节.方法:采用钙荧光探针(Fura-2/AM)负载培养的大鼠HSC,观察常氧和低氧条件下培养48h后octreotide对HSC[Ca2+]i的调节,同时用四唑盐(MTT)比色法比较不同浓度的octreotide对大鼠HSC增殖的影响.环磷酸腺苷(cAMP)和环磷酸鸟苷(cGMP)放免分析药盒测cAMP,cGMP浓度.结果:与常氧条件相比,低氧条件下HSC[Ca2+]i显著升高(293.2±12.4nmol/Lvs137.7±7.8nmol/L.P<0.01).500、800和1000μg/Loctreotide在常氧状态下可引起HSCs[Ca2+]i降低(P<0.05),其值分别为92.5±2.5、83.8±2.3和76.6±2.2nmol/L.低氧时500,800和1000gg/Loctreotide可引起HSCs[Ca2+],降低(P<0.01),其值分别为204.3±7.4、174.1±4.8和156.6±6.6nmol/L.常氧对照组A值(0.232±0.016)明显低于低氧对照组(0.533±0.036)(P<0.01);经500、800和1000μg/Loctreotide处理后,无论是常氧还是低氧状态下A值均明显降低(P<0.01).低氧条件下cAMP和cGMP含量不发生改变(P>0.05);无论是常氧还是低氧状态,经过octreotide500μg/L处理后,cAMP和cGMP含量与相应对照组相比增(cAMP:1.69±0.18pmol/mgvs1.10±0.32pmol/mg.1.87±0.30pmol/mgvs1.37±0.25pmol/mg,P<0.05;cGMP:1.08±0.24pmol/mgvs0.86±0.12pmol/mg.1.17±0.53pmol/mgvs0.89±0.20pmol/mg,P<0.05),而Octreotide800,1000μg/L组更高(cAMP:1.99±0.27,2.48±0.37pmol/mgvs1.10±0.32pmol/mg,P<0.01:2.09±0.35.2.24±0.15pmol/mgvs1.37±0.25pmol/mg,P<0.01:cGMp:1.24±0.17,1.31±0.29pmol/mgvs0.86±0.12pmol/mg,P<0.01;1.38±0.29,1.46±0.35pmol/mgvs0.89±0.20pmol/mg,P<0.01).结论:缺氧可通过第二信使系统促进HSC的增生,而Octreotide无论常氧还是低氧条件下剂量依赖性抑制HSCs增殖;cAMP,cGMP参与了对HSC的调节.

辛伐他汀及oxLDL对人脐静脉内皮细胞蛋白激酶C活性和胞质内游离钙水平的影响

目的 :探讨氧化低密度脂蛋白 (ox L DL)及 3-羟基 - 3甲基戊二酰辅酶 A(HMG- Co A)还原酶抑制剂辛伐他汀对人脐静脉内皮细胞 (HU VEC)蛋白激酶 C(PKC)活性和胞质内游离钙浓度 ([Ca2 + ]i)的影响。 方法 :HUVEC的 PKC活性采用γ- 32 P- ATP磷酸转移法 ,细胞内游离钙采用 Fluo- 3/ Am荧光负载 ,流式细胞术检测。 结果 :ox L DL呈剂量依赖方式促进 HU -VEC PKC活性增加 ,12 min时达峰值 ,然后缓慢下降 ,30 m in时仍维持较高水平 ;胞质内 [Ca2 + ]i升高分快速相和持续相 2个时相 ;移去细胞外液钙 ,ox L DL仍引起快速相 ,但持续相消失 ;辛伐他汀则能明显抑制 ox L DL引起的 HU VEC PKC活性增加 ,并显著降低持续相胞质内钙水平 ,而对快速相无影响。 结论 :ox L DL能引起 HUVEC内信号通路 PKC及 [Ca2 + ]i的动态变化 ,二者密切相关。 ox L DL刺激 HUVEC [Ca2 + ]i升高的快速相是由胞质钙池释放引起 ,持续相升高主要由胞外钙内流引起。辛伐他汀抑制 HU VEC PKC活性可能是通过胞内 [Ca2 +

奥曲肽对肝星状细胞收缩的影响

目的:探讨奥曲肽(OCT)对内皮素-1(ET-1)刺激的肝星状细胞(HSC)收缩的影响,以及此过程中胞质游离钙([Ca2+]i)的变化.方法:应用体外HSC培养技术,借助激光共聚焦显微镜(LSCM),采用第三代钙荧光探针Fluo-3/AM观察OCT、ET-1介导的HSC[Ca2+]i荧光强度、细胞面积及最大长径的变化.结果:2.5mg/LOCT对HSC内Ca2+浓度及收缩无显著影响;5.0mg/L、10.0mg/L组OCT能够即刻引起HSC内Ca2+浓度显著下降,10min时下降率分别为36.59%、39.13%(P<0.05),但对HSC收缩无显著影响.ET-1引起HSC内Ca2+浓度短暂而明显的升高以及HSC显著的收缩.5.0mg/L、10.0mg/L组OCT能够抑制ET-1引起的HSC内Ca2+浓度升高及收缩作用(P<0.05).结论:OCT可即刻引起HSC内Ca2+浓度下降,但对HSC收缩影响不大.OCT能够抑制ET-1引起的HSC收缩.

吸烟、硝酸甘油对动脉粥样硬化家兔血管平滑肌细胞钙浓度的影响

目的研究吸烟、硝酸甘油对动脉粥样硬化血管平滑肌细胞胞内游离钙浓度([Ca2+]i)的影响,探讨吸烟对动脉粥样硬化形成及硝酸甘油的生物效应的作用。方法复制家兔动脉粥样硬化模型,分离血管平滑肌细胞。Fluo-3/AM负载细胞,应用流式细胞仪检测血管平滑肌细胞[Ca2+]i,激光扫描共聚焦显微系统测定单个血管平滑肌细胞内Ca2+的时空变化。结果各组动物主动脉壁均见到程度不同的动脉粥样硬化斑块形成。动脉粥样硬化家兔血管平滑肌细胞[Ca2+]i明显升高(48.45±5.31,与生理盐水对照组38.09±2.57比较,P<0.01);吸烟能增加动脉粥样硬化家兔血管平滑肌细胞[Ca2+]i(56.48±2.99,与单纯动脉粥样硬化组48.45±5.31比较,P<0.01);硝酸甘油则能明显降低动脉粥样硬化家兔血管平滑肌细胞[Ca2+]i(41.91±3.16,与单纯动脉粥样硬化组48.45±5.31比较,P<0.05);吸烟能明显抑制硝酸甘油降低血管平滑肌细胞[Ca2+]i的作用(47.99±5.10,与硝酸甘油组41.91±3.16比较,P<0.05)。结论吸烟能明显增加动脉粥样硬化血管平滑肌细胞[Ca2+]i,硝酸甘油则能明显降低动脉粥样硬化血管平滑肌细胞[Ca2+]i,吸烟能抑制硝酸甘油的生物学效应。

米贝地尔增强3,3′二吲哚甲烷对肝癌细胞的抑制作用

目的:探讨T型钙通道阻滞剂米贝地尔对3,3′二吲哚甲烷(3,3′-diindolylmethane,DIM)抗肝癌效应的影响及其潜在的分子机制。方法:选用肝癌SMMC-7721和HepG2细胞,分别设4组,对照组用含10%胎牛血清的高糖培养基培养24.5 h;米贝地尔组用5μmol/L米贝地尔处理24.5 h;DIM组用60μmol/L DIM处理24.5 h;米贝地尔+DIM组用5μmol/L米贝地尔预处理0.5 h,再与60μmol/L DIM共同处理24 h;采用倒置显微镜观察细胞的形态学变化;采用CCK-8法检测各组细胞增殖活力;Hoechst 33342染色观察细胞凋亡水平,蛋白免疫印迹法检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、裂解的半胱氨酸蛋白酶3(cleaved-caspase 3)以及磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(phosphorylation of p38 mitogen activated protein kinase,p-p38 MAPK)表达水平;以Fluo-3/AM为探针,观察肝癌细胞胞质游离钙(cytosolic free calcium,[Ca^(2+)]i)水平。结果:与对照组相比,DIM组细胞增殖活力下降,PCNA表达明显降低,凋亡水平升高,cleaved-caspase 3、p-p38 MAPK表达水平明显升高(P均<0.05);部分细胞形态消失,[Ca^(2+)]i荧光增强。与DIM组相比,米贝地尔+DIM组细胞增殖活力明显降低,PCNA表达明显下降,凋亡水平进一步升高,且cleaved-caspase 3、p-p38 MAPK表达水平进一步升高(P均<0.05);多数细胞形态消失,[Ca^(2+)]i荧光增强更明显。结论:T型钙通道阻滞剂米贝地尔可增强DIM抗肝癌作用,可能与[Ca^(2+)]i水平增加以及p-p38 MAPK表达升高有关。

尼莫地平对大鼠颅脑损伤的作用

目的:观察尼莫地平对实验性颅脑损伤后神经细胞胞质内游离钙的作用.方法:用可监控打击强度的流体冲击致脑损伤装置使大鼠中度脑损伤,荧光指示剂Fura-2/AM标记,检测脑损伤后脑海马胞质内游离钙的浓度.伤后用尼莫地平(0.04mg/kg,iv)处理.结果:脑损伤后胞质内游离钙明显增加.尼莫地平处理后明显地降低胞质内游离钙的浓度(P<0.01).结论:尼莫地平可明显地阻断神经细胞膜上钙通道,减少钙内流,减轻脑损伤后钙内流对细胞造成的损害.