突触结合蛋白Ⅰ的胞质片段与磷脂膜的相互作用

突触结合蛋白Ⅰ是神经细胞突触囊泡上的一个膜整合蛋白 ,C2AB是其具有重要功能的胞质片段 .近年的研究表明 ,突触结合蛋白Ⅰ在钙引发的神经递质快速释放过程中起到钙感受器的作用 ,它与神经细胞突触前膜的相互作用与其生理功能有关 ,但是其作用机制还不清楚 .利用气 /液单层膜技术结合荧光发射光谱和圆二色光谱技术 ,发现C2AB倾向于插入带负电荷的磷脂膜中 (如磷脂酰丝氨酸 ) ,而且插膜是钙依赖性的 ;对于不带电荷的磷脂不插膜 .C2AB与膜之间的作用力主要为静电力 .荧光发射光谱和圆二色光谱结果显示 ,它与膜相互作用时二级结构不发生显著变化 .结果表明 ,突触结合蛋白Ⅰ钙依赖的插入负电荷膜特点 ,可以帮助解释其钙感受器的作用机制 .

具有生物活性的人带3蛋白胞质片段融合蛋白的克隆、表达与纯化

用 PCR法从质粒 p HB3中扩增了人红细胞带 3蛋白胞质片段 (CDB3 )基因 .PCR产物经限制性内切酶切割后与多克隆位点处带有编码 6个组氨酸序列的高效表达载体 p ET2 8b连接 ,构建为重组子p CDBHistag.重组子经酶切及序列测定后在大肠杆菌 BL2 1 (DE3 )中获得高效表达 ,可溶性目的蛋白占菌体总蛋白的 4 0 %左右 .C端带有 6个连续组氨酸的带 3蛋白胞质片段作为融合蛋白不仅可以降低宿主菌蛋白酶对其水解程度 ,而且简化了目的蛋白的纯化过程 .经一步螯合 Ni2 +的亲和层析获得了电泳纯的带 3蛋白胞质片段融合蛋白 .活性测定结果表明 ,带 3蛋白胞质片段融合蛋白能够抑制醛缩酶 (Aldolase)活性的70 % ,与文献报道的人红细胞内带 3蛋白胞质片段具有相同的功能 .