miRNAs对胞质附着蛋白1表达调节的研究进展

目的 miRNAs是一类高度保守的内源性非编码单链小分子RNA,长约22个核苷酸,其通过降解靶基因的mRNA或抑制其翻译,主要在转录后水平调控基因表达。miRNA存在于各种细胞中,对细胞增殖凋亡等起重要调节作用。胞质附着蛋白1(ZO-1)属于膜结合鸟苷酸环化酶激活蛋白家族,参与构成细胞间的紧密连接,在维持血脑屏障、肠上皮屏障等的稳定中起重要作用。miRNAs对ZO-1表达的调节影响血脑屏障、血肿瘤屏障、肠屏障的结构和功能。

乳鼠心肌细胞中C反应蛋白对基质金属蛋白酶-10表达调控的研究

目的:研究在乳鼠心肌细胞中C反应蛋白诱导基质金属蛋白酶-10(MMP-10)表达的作用及其分子机制。方法:培养乳鼠心肌细胞,以炎性因子C反应蛋白诱导MMP-10的表达。分别应用酶谱法和实时定量反转录—聚合酶链反应检测培养上清中MMP-10的活性和细胞中MMP-10信使核糖核酸(mRNA)表达水平的变化,应用蛋白免疫印迹杂交技术观察胞外调节激酶(ERK)通路以及转录因子活化蛋白-1的蛋白水平的变化。实验分为4组:对照组,C反应蛋白组,C反应蛋白+抑制剂组和抑制剂组。结果:心肌细胞给予C反应蛋白(5μg/ml)刺激后24 h,细胞培养上清中MMP-10活性较对照组升高了9.23倍(P<0.01);细胞MMP-10 mRNA水平与0 h相比,6 h增加了0.83倍(P<0.05),12 h达最高,增加了2.67倍(P<0.05),24 h略有下降,增加了1.92倍(P<0.05),差异均有统计学意义。C反应蛋白可激活心肌细胞p-ERK1和p-ERK2,从15 min开始,可持续到240 min;C反应蛋白刺激细胞4 h,活化蛋白-1的蛋白水平与0 h相比,增加了3.66倍(P<0.01),差异有统计学意义;ERK抑制剂PD98059预处理心肌细胞,可阻断C反应蛋白引起的活化蛋白-1的蛋白水平的上调作用以及MMP-10活性的增加及MMP-10 mRNA的表达。结论:C反应蛋白通过ERK通路,上调转录因子活化蛋白-1的蛋白水平,从而对心肌细胞中MMP-10基因的转录和表达进行调节。

铜绿假单胞菌对支气管扩张患者气道中基质金属蛋白酶-9和金属蛋白酶组织抑制因子-1表达的影响

目的对不同细菌感染的支气管扩张(BE)患者气道中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的表达进行研究,分析铜绿假单胞菌(PAE)对MMP-9、TIMP-1表达的影响。方法采用病例对照研究的方法,分设BE组及对照组,BE组又根据支气管肺泡灌洗液(BALF)培养结果分为PAE组及其他菌株组两个亚组。收集患者的BALF,ELISA法检测其中MMP-9和TIMP-1的浓度,并计算TIMP-1/MMP-9比值。同时取气管内膜活检组织,免疫组织化学法检测其中MMP-9及TIMP-1的表达。结果 MMP-9在PAE组及其他菌株组的BALF中均明显升高(P均=0.0000);MMP-9在PAE组(P=0.0421)及其他菌株组(P=0.0003)支气管内膜活检组织中的表达亦明显升高。TIMP-1在PAE组BALF中的浓度明显低于其他菌株组(P=0.0324);BALF中TIMP-1/MMP-9比值在BE组明显低于对照组(P=0.0000),PAE组明显低于其他菌株组(P=0.0026)及对照组(P=0.0000),而其他菌株组又明显低于对照组(P=0.0000)。结论 PAE感染可能是通过促使MMP-9分泌并抑制TIMP-1同步分泌而使BE病情恶化。

胞质附着蛋白与血脑屏障

ZO蛋白家族是构成血脑屏障的重要蛋白,主要在上皮和内皮细胞的紧密连接处表达。作为一种胞质附着蛋白,它对紧密连接的稳定起重要作用。当ZO蛋白家族出现结构和功能上的障碍时,血脑屏障功能即随之改变。所以,研究ZO蛋白家族结构和功能的改变,为选择性开放血脑屏障提供了新的途径。本文对ZO蛋白家族的结构、功能以及对血脑屏障调节的影响进行综述。

esiRNA分析人源驱动蛋白MKLP1在胞质分裂中的功能

为探讨人源驱动蛋白MKLP1在有丝分裂和胞质分裂中的作用,以E.coliRNaseⅢ制备MKLP1的3′UTResiRNA转染HeLa细胞,通过定量RTPCR、Western印迹检测MKLP1esiRNA对MKLP1基因的沉默效率.再利用FACS分析、免疫荧光染色和活细胞成像分析检测MKLP1表达缺失后在有丝分裂和胞质分裂不同时期的细胞形态学、细胞分裂指数、细胞百分数,动态观察有丝分裂和胞质分裂期间的表型改变,以系统分析MKLP1的功能.最后通过挽救实验验证MKLP1esiRNA的作用特异性.实验显示MKLP1esiRNA转染HeLa细胞能够有效地特异性消除MKLP1的表达,并被异位表达的MKLP1所挽救.MKLP1蛋白在有丝分裂后期和末期前期位于纺锤体中间带,在末期后期和胞质分裂的最后阶段集中于中间体的中心处.MKLP1表达缺失使中间体正确形成和胞质分裂的完成受到严重抑制,造成大量双多核细胞堆积.结果表明,MKLP1在胞质分裂中间体形成和有丝分裂末期前期向后期过渡过程中起关键作用,是纺锤体中间体中间带相关蛋白,为胞质分裂所必需.

小鼠骨髓间充质干细胞体外成肌分化中基质金属蛋白酶1的作用

背景:小鼠骨髓间充质干细胞体外成肌诱导分化效率较低。目的:观察基质金属蛋白酶1在体外对小鼠骨髓间充质干细胞成肌分化的作用。方法:利用差速贴壁法体外分离培养小鼠骨髓间充质干细胞并进行鉴定后,按照不同基质金属蛋白酶1药物处理浓度将小鼠骨髓间充质干细胞分成4组,即10μg/L组、1μg/L组、0.1μg/L组、对照组,给予相应处理后,Real-time定量PCR检测MyoD、Desmin mRNA表达,WesternBlotting检测Desmin蛋白表达。结果与结论:利用差速贴壁法分离培养的小鼠骨髓间充质干细胞形态较一致,表面分子检测示CD29+、Sca-1+、CD45-、CD34-,并具有多向分化潜能;经基质金属蛋白酶1处理后,Real-time定量PCR检测示Desmin、MyoD mRNA表达上调,Western Blotting检测示Desmin蛋白表达上调,并且以上各成肌相关基因、蛋白表达增高程度与基质金属蛋白酶1具有浓度依赖性。提示基质金属蛋白酶1在体外可促进骨髓间充质干细胞向肌肉细胞分化。

血浆置换对抗中性粒细胞胞质抗体相关性血管炎患者外周血高迁移率族蛋白-1水平的影响

目的：观察血浆置换对抗中性粒细胞胞质抗体相关性血管炎（ANCA-associated vasculitis,AAV）外周血高迁移率族蛋白-1（highmobility group box chromosomal protein 1,HMGB1）的影响。方法：13例活动期AAV患者,男10例,女3例,年龄41岁~76岁,BVAS评分（21.8±4.9）分,其中11例p/MPO-ANCA阳性,2例c/PR3-ANCA阳性,ANCA水平（295.78±52.76）RU/m L。均给予糖皮质激素及其冲击疗法等治疗基础上,辅以血浆置换。分别留取血浆置换治疗前空腹（TO）、治疗开始后2 h（T1）、血浆置换停止后12 h（T2）患者静脉血标本,分离血清后采用ELISA法检测其中的HMGB1。结果：本组患者行血浆置换后2 h血清HMGB1水平（3.67±0.93）ng/ml,较血浆置换前血清HMGB1水平（7.8±1.26）ng/ml显著下降,血浆置换后12 h血清HMGB1水平（5.18±0.93）ng/ml稍有回升,但仍低于血浆置换前浓度（P〈0.05）;血管炎活动指标（ESR、CRP、BVAS评分）较血浆置换前均降低。结论：血浆置换能有效清除AASV患者外周血清HMGB1,可明显降低疾病活动度。

阿托伐他汀对脑梗死患者P-选择素、可溶性细胞间粘附因子-1、基质金属蛋白酶-9的影响

目的探讨阿托伐他汀对脑梗死患者P-选择素、可溶性细胞间粘附因子-1(SICAM-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的影响。方法选择105例脑梗死患者随机分为两组,分别给予阿托伐他汀和常规治疗,采用双抗体夹心法测定P-选择素、酶联免疫法测定SICAM-1、夹心酶联免疫吸附法测定MMP-9。结果阿托伐他汀治疗组三项指标浓度明显降低(P<0.05),常规治疗组无明显变化(P>0.05)。结论阿托伐他汀有抗炎及稳定粥样斑块作用。

三七总皂苷对铝暴露脑微血管内皮细胞胞质紧密黏连蛋白1表达的影响

目的从血脑屏障的角度探讨三七总皂苷对铝暴露脑微血管内皮细胞胞质紧密黏连蛋白1(zonulaoccludens-1,ZO-1)表达的影响,初步揭示三七总皂苷抗老年痴呆的可能靶点及机制。方法采用脑微血管内皮细胞系Balb/c,以含20%胎牛血清和100 mg/L生长因子的DMEM培养基培养,随机分为正常组、模型组、铝螯合剂组及三七总皂苷低、中、高剂量组,经铝暴露24 h后,分别以荧光实时定量PCR和Western blot的方法测定ZO-1的基因转录和蛋白表达水平,观察不同剂量三七总皂苷对ZO-1表达的影响。结果与正常组相比,铝暴露24 h可使脑微血管内皮细胞ZO-1的转录及表达明显减少(P<0.01)。与模型组比较,三七总皂苷高剂量组能显著增加ZO-1的基因转录水平(P<0.05),中、高剂量组能显著提高ZO-1的蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论三七总皂苷对铝暴露下的脑微血管内皮细胞具有一定的保护作用,可增加血脑屏障紧密连接主要组成蛋白ZO-1的表达。

低密度脂蛋白对高糖状态下血管内皮细胞脂质过氧化物和细胞间黏附分子-1的影响

目的:观察高糖状态下低密度脂蛋白(LDL)对体外培养的血管内皮细胞(ECV-304)脂质过氧化物(LPO)代谢变化中丙二醛(MDA)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)分泌的影响。方法:不同浓度(5.5、20mmol/L)葡萄糖(Glu)的培养液细胞中,分别加入不同浓度LDL(0、50、100μg/mL)进行氧化损伤48h,采用倒置显微镜观测细胞形态学、MTT法检测细胞活性、硫代巴比妥酸(TBA)法测定MDA的含量、细胞ELISA法测定ICAM-1的分泌。结果:(1)高糖状态下ECV-304细胞脂质过氧化的量明显增加(P<0.05或P<0.0者),加入LDL后,MDA含量显著增加,脂质过氧化损伤显著加重,表现出明显协同作用(P<0.05或P<0.01)。(2)高糖状态下高浓度LDL抑制内皮细胞的活力(P<0.05),且呈浓度依赖性;(3)高浓度Glu和LDL具有正协同作用,促进ICAM-1的分泌。结论:高浓度Glu和LDL对血管内皮细胞具有协同损伤作用,高糖状态下LDL可直接导致内皮细胞损伤,引起ICAM-1产生增多,促进糖尿病血管并发症的发生、发展。

胞质紧密粘连蛋白1的研究现状

胞质紧密粘连蛋白1(ZO-1)是多域蛋白家族膜结合鸟苷酸激酶同系物中的一员,作为紧密连接的组成成分在组织分化和器官发生发面起关键作用,同时ZO-1的改变与细胞通透性的增加有关。ZO-1在包括肾、胎盘、血脑屏障等许多组织中表达,可与紧密连接上的很多跨膜蛋白相互作用。

新辅助化疗对胃癌细胞超微结构及核基质结合区结合蛋白质1表达的影响

目的探讨新辅助化疗对胃癌细胞超微结构的影响与对胃癌组织中核基质结合区结合蛋白质1(Special AT rich sequence binding protein 1,SATB1)表达的关系。方法对2013年12月至2015年12月江苏省中医院消化系肿瘤外科60例进展期胃癌患者术后癌组织进行超微结构观察,60例中40例行新辅助化疗,其中20例用介入途径(介入组),20例用静脉途径(静脉组),另20例直接行手术治疗为对照组。同时检测新辅助化疗前、后胃癌组织及癌旁组织SATB1的免疫组化表达。结果对化疗敏感的病例癌细胞的细胞器严重损伤,包括核固缩、线粒体和内质网肿胀;对化疗不敏感的病例癌细胞的细胞器未受破坏或仅轻度损伤,其中介入组细胞损伤程度高于静脉组(P=0.047)。在癌细胞损伤明显的病例中,SATB1的表达更加明显(P=0.035)。结论介入法新辅助化疗对胃癌细胞的损伤作用更大。SATB1的表达与胃癌细胞损伤程度相关,可作为评估新辅助化疗疗效新的标志物。

正肝汤对肝硬化大鼠肠道紧密连接蛋白OCLN和ZO-1表达的影响

目的:探讨正肝汤对肝硬化大鼠肠道紧密连接蛋白OCLN和ZO-1表达的影响。方法:30只SD大鼠随机分为正常组、模型组和正肝汤组,每组各30只。制备四氯化碳肝硬化大鼠模型,正肝汤组大鼠予正肝汤(1.5 g/100 g·d)灌胃干预。对肝组织进行苏木素-伊红染色,透射电镜观察小肠组织的超微结构,免疫印迹法检测小肠组织中OCLN和ZO-1的蛋白表达。结果:与正常组相比较,模型组大鼠的肝组织中胶原纤维广泛增生,纤维间隔相互连接,徦小叶形成,电镜见小肠黏膜上皮细胞表面微绒毛稀疏,减少、变短,排列不规则,部分断裂扭曲,脱落明显。正肝汤组大鼠的肠黏膜损伤较模型组明显减轻。正常组大鼠小肠组织中OCLN和ZO-1的表达量分别是模型组2.94和3.91倍,均P<0.01,差异显著。正肝汤组的小肠组织中OCLN和ZO-1的表达量分别是模型组1.74和1.91倍,与模型组相比均P<0.05,有统计学差异。结论:正肝汤能显著减轻肝硬化大鼠的肠黏膜损伤,并上调小肠组织中OCLN和ZO-1的蛋白表达。

CPEB1与Bcl-xL蛋白在人脑胶质瘤中的表达及其与恶性程度和预后的关系

目的探讨胞质多聚腺苷酸化成分结合蛋白1(CPEB1)与Bcl-xL蛋白在人脑胶质瘤中的表达及其与恶性程度和预后的关系。方法选取2008年5月—2014年12月收集的68例人脑胶质瘤组织和68例瘤旁正常组织,回顾性分析所有标本来源患者的临床及随访资料,观察2组CPEB1与Bcl-xL蛋白的表达情况,并分析影响预后的危险因素。结果脑胶质瘤组织CPEB1与Bcl-xL蛋白阳性表达率均高于瘤旁正常组织(P <0. 05)。CPEB1与Bcl-xL蛋白阳性表达患者3年总生存率均低于阴性表达者(P <0. 05)。肿瘤分级过高、分化程度过低、出现淋巴结转移、术前KPS评分过低、术后未进行放化疗及CPEB1和Bcl-xL蛋白阳性均为影响人脑胶质瘤患者预后的独立危险因素(P <0. 05)。结论 CPEB1与Bcl-xL蛋白在人脑胶质瘤患者其癌组织中均以高水平表达,且随着病情的加重其阳性表达率均上升,且过高表达均为影响人脑胶质瘤患者预后的独立危险因素,故临床可将其作为评估人脑胶质瘤患者病情及预后的有效指标。

大鼠Notch1胞质段的克隆及其表达

Notch 1信号途径参与决定细胞命运 ,其水解后产生的活性片段———胞质段 (Notch 1intracellularcytoplasmicdomain ,NICD)能被转运进核 ,激活下游靶基因的表达 .Notch 1参与细胞的增殖、分化、程序性死亡、发育过程中的形态发生和器官形成等许多重要过程 .为了获得重组的NICD ,以大鼠脑cDNA文库为模板 ,用PCR方法扩增出编码NICD的基因片段 ,克隆至谷胱甘肽 S 转移酶 (GST)融合表达载体pGEX KG中 ,并在大肠杆菌中获得较高水平的表达 .表达的融合蛋白GST NICD分子质量约为 12 0ku左右 ,以包涵体和可溶性两种形式存在 ,易于亲合层析纯化 .为制备抗体和进一步的功能研究奠定了基础 .

补阳还五汤联合骨髓间充质干细胞移植脑缺血再灌注大鼠脑组织紧密连接蛋白的表达

背景:急性脑缺血时内皮细胞间的紧密连接受到破坏,紧密连接蛋白转录或表达发生改变,引起血脑屏障通透性增加而形成脑水肿。目的:旨在从紧密连接蛋白的调控方面,探讨补阳还五汤联合骨髓间充质干细胞移植对脑缺血再灌注大鼠血脑屏障修复的作用机制。方法:80只大鼠(山东省动物实验中心提供)随机分为假手术组(n=16),模型组(n=16),骨髓间充质干细胞组(n=16),补阳还五汤组(n=16),补阳还五汤联合骨髓间充质干细胞组(联合组,n=16)。利用改良线栓法制备大脑中动脉栓塞缺血再灌注大鼠模型,造模前3 d开始,补阳还五汤组、联合组给予补阳还五汤15 mL/kg灌胃,假手术组、模型组、骨髓间充质干细胞组给予等量生理盐水灌胃;造模后1d时,骨髓间充质干细胞组、联合组尾静脉注射含1×10~6个骨髓间充质干细胞悬液1m L,其他组给予等量生理盐水。在造模后3,5d取缺血侧脑组织,采用Western Blot法检测脑组织中Occludin、Claudin-5、JAM-A、ZO-1等紧密连接相关蛋白的表达。结果与结论:(1)与假手术组相比,模型组大鼠缺血脑组织中Occludin、Claudin-5、JAM-A、ZO-1的蛋白表达显著下降(P<0.01);(2)与模型组相比,补阳还五汤组、骨髓间充质干细胞组和联合组缺血脑组织中Occludin、Claudin-5、JAM-A、ZO-1的蛋白表达量上升(P <0.05),以联合组上调最为明显(P <0.01);(3)结果表明,补阳还五汤联合骨髓间充质干细胞对血脑屏障的修复具有协同作用,可能是通过上调缺血脑组织中Occludin、Claudin、JAM-A、ZO-1的蛋白表达来维持血脑屏障紧密连接的完整性,以实现脑保护的作用。

髓过氧化物酶-抗中性粒细胞胞质抗体相关性血管炎患者血清IgG4及Th1/Th2细胞因子检测分析

目的了解髓过氧化物酶(MPO)-抗中性粒细胞胞质抗体相关性血管炎(AAV)患者血清中IgG4及辅助性T细胞(Th)1/Th2细胞因子的表达情况。方法收集苏州大学附属第二医院50例AAV患者及40例同期健康体检者的血清样本,采用免疫比浊法测定IgG水平,采用ELISA法测定IgG4水平,采用流式细胞术微球阵列(CBA)技术检测血清中Th1/Th2细胞因子的水平,比较两组样本上述指标的差异,分析不同指标之间的相关性。结果共收集到50例AAV患者血清样本,其中MPO-AAV患者40例(80.0%)。MPO-AAV组血清IgG4水平为(1.13±0.33)g/L,IgG4/IgG比值为0.094±0.032,IL-4水平为(2.54±0.68)pg/mL,IL-6水平为15.22(8.83,59.52)pg/mL,均高于健康体检者[IgG4水平为(0.80±0.27)g/L,IgG4/IgG比值为0.070±0.028,IL-4水平为(1.96±0.60)pg/mL,IL-6水平为4.95(2.82,13.25)pg/mL],差异均有统计学意义(P均<0.01),且MPOAAV患者血清IgG4水平与IL-6水平呈正相关(r_(s)=0.508,P<0.05)。结论我院AAV患者中MPO-AAV比例较高。MPO-AAV患者血清中IgG4水平及IL-4、IL-6水平均升高,且IgG4升高与IL-6升高呈正相关,提示IgG4的升高与MPO-AAV患者Th1/Th2细胞因子平衡失调有关。

Janus激酶1/胞外信号调节激酶通路参与C反应蛋白诱导的心肌细胞MMP-10活性上调

为探讨心肌细胞中Janus激酶1(JAK1)在C反应蛋白(CRP)诱导的基质金属蛋白酶(MMP)-10活性上调过程中的作用,本研究以炎症细胞因子CRP诱导MMP-10上调的原代乳鼠心肌细胞为研究对象,使用JAK1的特异磷酸化抗体,用Western印迹技术检查JAK1的磷酸化水平的激活情况.应用Western印迹技术和酶谱法分别检测胞外信号调节激酶(ERK)的磷酸化水平和MMP-10的活性变化.实验分为4组:对照组,CRP组,CRP+抑制剂组和抑制剂组.结果显示,磷酸化的JAK1在CRP刺激后1/12 h即可出现,在1 h达到高峰,而总的JAK1不改变;JAK1抑制剂piceatannol可以使磷酸化的ERK水平减弱,也可以使MMP-10的活性明显降低(P<0.01).研究结果提示,JAK1是通过激活ERK,从而上调MMP-10的活性,为心力衰竭提供了一个可能的治疗靶点.

裂殖酵母Cnb1参与胞质分裂过程

丝/苏氨酸特异性钙调磷酸酶(Calcineurin,CN)是一种在真核生物中广泛存在的蛋白,是参与转录调控的重要分子。裂殖酵母中的CN是由催化亚基Ppb1和调节亚基Cnb1组成的异源二聚体。文章报道了裂殖酵母中cnb1+的缺失引起细胞生长速度缓慢,产生多隔膜现象,胞质分裂受阻滞。胞质分裂过程中,Cnb1与Ppb1组成CN复合物,与收缩环在分裂平面上共定位,并与收缩环一起收缩。cnb1Δ菌株的隔膜成熟过程存在缺陷,微管出现纵穿隔膜的现象。上述结果说明Cnb1可能参与隔膜的成熟过程。此外,还检测了cnb1菌株中胞裂蛋白的信号。胞裂蛋白包括Spn1、Spn2、Spn3和Spn4,它们是引导隔膜降解的重要分子。结果显示,在cnb1菌株中,80%左右的细胞在隔膜处缺失Spn2和Spn3的信号,20%左右的细胞缺失Spn1和Spn4的信号。由于胞裂蛋白的蛋白表达量在cnb1中没有降低,因此胞裂蛋白信号的消失不是转录缺陷引起的,这暗示Cnb1可能采用了不依赖转录的方式来调控胞裂蛋白环的稳定性。以上结果提示,Cnb1可能通过影响隔膜的成熟及胞裂蛋白环的稳定性参与调节裂殖酵母的胞质分裂过程。

人前列腺癌细胞中肝X受体特异性激动剂GW3965对核受体结合蛋白1的影响

目的探讨人前列腺癌细胞系DU145细胞中肝X受体(liver X receptor,LXR)特异性激动剂GW3965对核受体结合蛋白1(nuclear receptor binding protein 1,NRBP1)的表达调控作用。方法采用MTT法检测不同浓度GW3965(浓度分别为0.5、5、10μmol/L)作用24 h后对DU145细胞增殖的影响。在人前列腺癌DU145细胞中用LXR的特异性激动剂GW3965处理24 h后,经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测LXR特异性靶基因三磷腺苷结合A1(ATP-bindingcassette A1,ABCA1)转录水平的表达情况;随后在转录水平和翻译水平检测NRBP1的表达。结果 LXR特异性激动剂GW3965各实验组对细胞的活性和增殖无影响(P>0.05)。GW3965作用于DU145细胞后,ABCA1转录水平呈剂量依赖性升高,表明LXR在DU145细胞中具有功能活性。LXR经过活化后在转录和翻译水平对NRBP1的抑制作用呈剂量依赖性降低。结论 LXR在DU145细胞中可抑制NRBP1的表达。