接种叶锈菌的小麦叶片胞间洗脱液对叶肉细胞原生质体微丝骨架的影响

用异硫氰酸 鬼笔环肽 (FITC Ph)标记和共聚焦激光扫描显微镜 (CLSM )观察发现 ,以具有激发子活性的接种叶锈菌的小麦叶片的胞间洗脱液 (IWF)处理叶肉细胞原生质体一定时间后 ,抗病小麦品种洛夫林 10的原生质体内微丝骨架保持完整的网络状结构 ,而感病品种 5 389的大部分微丝骨架处于解聚状态。同时 ,抗病品种因IWF处理诱发的防卫反应———H2 O2 突发和HR反应的程度 (用原生质体活力下降的程度表示 )也大大高于感病品种。用细胞松弛素D(CD)预处理抗病品种原生质体可以明显抑制IWF处理诱发的H2 O2突发和HR反应 ,表明微丝骨架的状态可能与抗病性有密切的关系 ,完整的微丝骨架是H2 O2 突发和HR反应的一个重要条件。

小麦叶片胞间洗脱液的蛋白质组学检测分析

植物叶片胞间液蛋白主要是一些低丰度蛋白,其中某些种类在植物抗病反应中起着重要的作用。通过改进已有的技术方法,结合超滤和丙酮沉淀处理,从500 g抗条锈病近等基因系小麦Taichung29*6/Yr5的叶片中获得了1.5 mg可溶性的胞间洗脱液蛋白。SDS-PAGE电泳分析显示,胞间洗脱液蛋白样品和总蛋白样品存在着明显的差异。进一步的双向电泳分析证实,两个样品在胶图上可分别检测到1 241±59(n=3)和1 849±138(n=3)个蛋白点,其中胞间洗脱液样品有1 042±47(n=3)个不同于总蛋白样品的蛋白点,与总蛋白样品共有的蛋白点仅198±13(n=3)个。随意取100个差异蛋白点进行MALD I-TOF质谱分析,鉴定到一些已被确证存在于小麦胞间液中的蛋白质,如-β1,3-葡聚糖酶、葡聚糖--βD-1,3-葡萄糖苷内切酶、几丁质酶、过氧化物酶等。从蛋白质组学角度初步分析了小麦叶片胞间洗脱液的组成,为进一步探索小麦叶片胞间液中低丰度蛋白的抗病功能提供依据。