小麦叶片胞间隙蛋白的提取与鉴定

采用真空渗入离心法,通过特定的装置并在不同的离心力和时间条件下分离小麦叶片胞间隙液,结合十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）技术,以胞内高含量的蛋白-Rubisco大亚基为胞内物污染的指示,利用高效价的兔抗Rubisco抗体进行Western-blotting检测分析。结果表明,在离心力为3 000g,离心时间为10,15和20 min所提的胞间隙液量最大,且均检测到Rubisco的污染。结合胞间隙液的产率确定小麦叶片胞间隙液提取最佳的离心条件应为离心力1 000-2 500 g,时间15-20 min。

乙烯利诱导黄瓜叶片胞间隙几丁质酶累积的变化

以"津春4号"黄瓜为试材,研究喷施不同质量浓度乙烯利对黄瓜幼苗叶片胞间隙液几丁质酶的诱导积累及对幼苗生长的影响。结果显示,与对照相比,乙烯利处理后黄瓜叶片胞间隙液蛋白质量浓度增加;几丁质酶活性水平也随乙烯利处理质量浓度的增加出现不同幅度上升,其中,252mg/L的乙烯利对几丁质酶诱导作用最强;通过SDS-PAGE电泳,观察到252mg/L乙烯利处理后第1天,一种27.0ku几丁质酶在胞间隙积累,并在随后的取样时间显著表达。Western blotting分析进一步证实了上述结果。此外,与对照相比,质量浓度分别为126mg/L和252mg/L乙烯利处理后第7天,黄瓜幼苗株高增量显著降低,252mg/L处理的茎粗增量显著增加。乙烯利可以诱导黄瓜叶片胞间隙几丁质酶的累积,诱导的效果与黄瓜叶片对乙烯利质量浓度的感受直接相关。

黄瓜叶片胞间隙几丁质酶与抗霜霉菌侵染关系的研究

采用高抗霜霉病的‘津春4号’和易感霜霉病的‘长春密刺’黄瓜的温室穴盘幼苗为材料,研究了接种霜霉菌对黄瓜叶片胞间隙几丁质酶累积变化及幼苗生长的影响。结果显示:(1)与易感品种相比,抗病品种叶片胞间隙液蛋白浓度升高快、含量高;同时几丁质酶活性上升的速度快、幅度大,于接种后第2天达到峰值,且高活性维持至第7天;(2)SDS-PAGE电泳分析发现,抗病品种有一种27kD的酸性几丁质酶在接种后第2天迅速积累,并在接种后第4、7天呈现出较高的表达量;Western blotting的结果也证实了上述胞间隙几丁质酶积累的变化。(3)与未接种对照相比,接种处理后第4、7天,易感黄瓜幼苗鲜重、干物质积累量均出现显著降低,但在接种后第7天抗病品种的上述生长指标要显著高于易感病品种。研究表明,接种霜霉菌后,抗病黄瓜叶片胞间隙几丁质酶迅速累积且活性快速升高,以减轻霜霉病对幼苗生长的侵害,这可能是黄瓜抗霜霉菌侵染的一种防御机制。