基于Wnt/β-Catenin通路探讨胡萝卜苷对多发性骨髓瘤的抑制作用及机制

目的 探讨胡萝卜苷通过调控Wnt/β-Catenin信号通路对多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226和H929的抗肿瘤活性。方法 采用不同浓度的胡萝卜苷处理2种细胞株,CCK-8法检测细胞增殖活力;Annexin V-PE/7-AAD双染流式细胞术检测细胞凋亡水平;Western blotting分析不同浓度的胡萝卜苷处理细胞后β-catenin, p-β-catenin、Wnt5a和Cleaved-Caspase3蛋白水平的变化。结果 与0μg/mL组相比,50~200μg/mL胡萝卜苷作用RPMI 8226细胞和H929细胞48 h后,细胞增殖活性伴随浓度升高而逐渐降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与0μg/mL组相比,不同浓度的胡萝卜苷作用RPMI8226细胞48 h后,50~200μg/mL组的Annexin V阳性细胞比例呈浓度依赖性升高,差异有统计学意义(P<0.05);100~200μg/mL组的7-ADD阳性细胞比例亦呈浓度依赖性升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与0μg/mL组相比,不同浓度的胡萝卜苷作用H929细胞48 h后,100~200μg/mL组Annexin V阳性细胞比例伴随药物浓度升高而逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05);50~200μg/mL组7-ADD阳性细胞比例伴随药物浓度升高亦逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05)。胡萝卜苷处理RPMI 8226细胞株48 h后,与对照组0μg/mL相比较,25~200μg/mL组的p-β-catenin/β-catenin、Wnt5a蛋白表达水平呈下降趋势,150~200μg/mL组的Cleaved-Caspase3蛋白表达水平呈上升趋势,各组差异均有统计学意义(P<0.05)。胡萝卜苷处理H929细胞株48 h后,与对照组0μg/mL相比较,25~200μg/mL组的p-β-catenin/β-catenin蛋白表达水平表现出下降趋势,50~200μg/m L组的Wnt5a蛋白表达水平亦表现出下降趋势,150~200μg/mL组的Cleaved-Caspase3蛋白表达水平表现出上升趋势,各组差异有统计学意义(P<0.05)。结论 胡萝卜苷能抑制人多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226和H929的增殖活性,促进凋亡,其机制可能与Wnt/β-Catenin信号通路的激活有关。

胡萝卜苷对人肝癌细胞株HepG2增殖、凋亡的影响及其机制探讨

目的观察胡萝卜苷对人肝癌细胞株HepG2增殖、凋亡的影响,并探讨其机制。方法体外培养HepG2细胞,取对数生长期细胞,分为胡萝卜苷组和对照组。将HepG2细胞按5×10~5/mL接种于96孔板中,胡萝卜苷组分别加入25、50、100、150、200μg/mL的胡萝卜苷,对照组不加入药物,继续培养48 h后采用CCK-8法测算细胞增殖抑制率。将HepG2细胞按5×105/mL接种于6孔板中,胡萝卜苷组分别加入50、100μg/mL的胡萝卜苷,对照组不加入药物,继续培养48 h后采用流式细胞仪观察细胞凋亡情况,采用Western blotting法检测细胞中的凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白WNT3A、β-catenin。结果胡萝卜苷各亚组细胞增殖抑制率均高于对照组,且胡萝卜苷组中25、50、100、150、200μg/mL亚组细胞增殖抑制率依次增高(P均<0.05)。胡萝卜苷组50μg/mL亚组、100μg/mL亚组细胞凋亡率均高于对照组,且100μg/mL亚组细胞凋亡率高于50μg/mL亚组(P均<0.05)。对照组及胡萝卜苷组的50μg/mL亚组、100μg/mL亚组细胞中Bax蛋白相对表达量依次增高,Bcl-2、WNT3A、β-catenin蛋白相对表达量依次降低(P均<0.05)。结论胡萝卜苷可抑制HepG2细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路、调节凋亡相关蛋白表达有关。

HPLC-ELSD法测定金线草中β-谷甾醇和胡萝卜苷含量

目的建立同时测定金线草中β-谷甾醇和胡萝卜苷的HPLC方法。方法采用HPLC-ELSD法,色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（250 mm×4.6 mm,5μm）,甲醇—水（96∶4）为流动相洗脱,体积流量1.0 mL·min^-1,柱温30℃,漂移管温度70℃,载气体积流量1.8 L·min^-1,进样体积10μL。结果β-谷甾醇和胡萝卜苷分别在0.152 8-1.910μg（r=0.999 5）和0.101 6-1.270μg（r=0.999 3）有良好的线性关系;平均回收率为99.7%和98.9%,RSD分别为1.4%和1.8%（n=5）。结论该方法能准确测定金线草中β-谷甾醇和胡萝卜苷的含量。

HPLC-ELSD法同时测定三叶青中胡萝卜苷和β-谷甾醇的含量

目的建立同时测定三叶青药材中胡萝卜苷和β-谷甾醇含量的方法。方法采用HPLC-ELSD法,岛津VPN-ODS C18柱（150 mm×4.6 mm,5μm）为色谱柱,以甲醇为流动相,体积流量为0.7 m L·min^-1,柱温为30℃;漂移管温度60℃,氮气体积流量1.8 L·min^-1。结果胡萝卜苷和β-谷甾醇分别在0.1~2.0μg和0.2~4.0μg范围内呈良好线性关系,回归方程分别为Y=0.696X＋2.737,r=0.999 7;Y=0.752 X＋2.909,r=0.999 6。平均回收率分别为99.32%、100.13%。结论该方法简便,结果准确、可靠,可作为三叶青药材中胡萝卜苷和β-谷甾醇的含量测定方法,为三叶青质量控制提供依据。

胡萝卜苷抑制HepG-2细胞增殖和迁移及拓扑异构酶表达

目的探讨胡萝卜苷对HepG2细胞增殖、迁移及DNA拓扑异构酶(topoisomerase,TOPO)Ⅰ和Ⅱ表达的影响。方法体外培养人肝癌HepG2细胞。CCK-8实验观察不同浓度(200μg/ml、150μg/ml、100μg/ml和50μg/ml)胡萝卜苷对HepG2细胞增殖的影响。qRT-PCR实验观察200μg/ml胡萝卜苷对HepG2细胞TOPOⅠ和TOPOⅡmRNA表达的影响。Transwell小室模型检测200μg/ml胡萝卜苷对HepG2细胞迁移的影响。结果胡萝卜苷对HepG2细胞增殖有明显抑制作用,并在一定范围内(0μg/ml^200μg/ml)呈现浓度依赖性。与未用胡萝卜苷处理的HepG2比较,经200μg/ml胡萝卜苷作用的HepG2细胞穿越基膜的数量显著减少,TOPOⅠ和TOPOⅡmRNA相对表达量显著降低。结论胡萝卜苷可能通过下调TOPOⅠ、TOPOⅡ基因表达而抑制HepG2细胞增殖,并具有抑制HepG2细胞迁移的能力。

RP-HPLC-ELSD法测定白花丹野生药材根·茎·叶中胡萝卜苷的含量

[目的]建立测定白花丹药材中胡萝卜苷含量的方法,并研究不同采收期的野生白花丹药材根、茎、叶中胡萝卜苷的含量变化情况。[方法]采用RP-HPLC-ELSD检测法。迪马色谱柱C18(250 mm×4.6 mm,5μm);柱温25℃;流动相为无水甲醇;体积流量为1.0ml/min;载气为氮气,漂移管温度65℃。[结果]在0.129～2.58μg/ml浓度范围内,胡萝卜浓度对数值与峰面积对数值呈良好线性关系,R为0.9994(n=7);平均回收率99.93%,RSD为0.212%(n=9)。叶中含量最高,根中含量最低,2、7、8月份含量最高,5、6月份含量最低。[结论]该方法快速、简便、稳定,为建立白花丹野生变家种的栽培技术规范打下基础。

HPLC法同时测定徐长卿及老君须提取物中咖啡酸、橙皮苷、白薇苷A和胡萝卜苷含量

目的:建立HPLC法同时测定徐长卿及老君须提取物中咖啡酸、橙皮苷、白薇苷A和胡萝卜苷,并比较两种提取物中各成分的含量差异。方法:采用Agilent Zorbax C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以0.15%磷酸水(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,流速1 ml·min^(-1),柱温40℃,检测波长为260 nm和210 nm。结果:咖啡酸、橙皮苷、白薇苷A和胡萝卜苷分别在2.1700~86.8000 mg·L^(-1)、5.4125~216.5000 mg·L^(-1)、3.5950~143.8000 mg·L^(-1)和4.0900~163.6000 mg·L^(-1)范围内线性关系良好。通过研究发现,徐长卿提取物中咖啡酸、橙皮苷、白薇苷A和胡萝卜苷的含量分别为2.0440,5.9540,3.9050,4.3100 mg·g^(-1),而老君须提取物中仅可检测到白薇苷A和胡萝卜苷,含量分别为4.953,7.672 mg·g^(-1)。结论:该方法简便、稳定,重复性好,可用于徐长卿及老君须提取物的质量评价。

HPLC-ELSD法测定柏子仁霜中胡萝卜苷的含量

目的:建立测定柏子仁霜中胡萝卜苷含量的方法,并比较不同产地柏子仁炮制后的霜品中胡萝卜苷的含量。方法:采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法。色谱柱为Scienhomeinertex C18(150mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-水(80∶20),流速为1.0mL·min-1,柱温为30℃;载气为氮气,气体压力为30.0psi,漂移管温度为80℃。结果:胡萝卜苷进样量在0.77～4.45μg范围内,其对数值与峰面积对数值呈良好线性关系(r=0.9997);平均回收率为96.55%,RSD=1.68%(n=6)。不同产地柏子仁霜中胡萝卜苷含量分别为0.4070%(河南辉县)、0.3281%(安徽淮北)、0.3384%(山东枣庄)、0.3261%(山东长清)。结论:本方法稳定、简便、快速,适用于柏子仁霜的质量控制。

HPLC-ELSD同时测定链荚豆中胡萝卜苷和β-谷甾醇含量

目的:建立同时测定链荚豆中胡萝卜苷和β-谷甾醇含量的方法。方法:采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法,色谱柱为Diamonsil C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相甲醇-水(95∶5),流速1.0 mL·min-1,漂移管温度80℃,载气体积流量2.5 L·min-1。结果:胡萝卜苷和β-谷甾醇浓度分别在10～100 mg·L-1(r=0.999 3)和25～250 mg·L-1(r=0.999 1)线性关系良好;平均加样回收率分别为99.5%,98.9%,RSD分别为2.4%,2.1%。结论:该法专属、简便、准确,可用于同时测定链荚豆中胡萝卜苷和β-谷甾醇,为链荚豆的质量控制提供依据。

胡萝卜苷对刀豆蛋白A诱导的急性肝损伤的保护作用

目的探究胡萝卜苷对刀豆蛋白A(concanavalin A,conA)诱导的急性肝损伤的保护作用及相关机制。方法将50只C57 BL/6小鼠随机分成5组:正常组、模型组和胡萝卜苷低、中、高剂量组,每组10只。尾静脉注射conA制备急性肝损伤模型后,胡萝卜苷各剂量组立即灌胃胡萝卜苷治疗,12 h后处死动物。测定肝指数,检测血清中谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)活性及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的含量。HE染色观察肝组织病理学改变。qRT-PCR检测TNF-α、IL-1β、IL-6在肝组织中的转录水平。Western blotting检测信号转导与转录激活子(signal transduction and activator of transcription,STAT3)及p-STAT3的表达。结果胡萝卜苷各剂量组的血清ALT、AST、TNF-α、IL-1β、IL-6含量,肝脏TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达,肝脏STAT3、p-STAT3水平皆低于模型组(P<0.05或P<0.01)。HE染色结果也表明,胡萝卜苷的治疗能够有效减轻肝损伤。结论胡萝卜苷具有抵抗conA诱导的肝损伤的作用,该作用可能与抑制STAT3的表达有关。

苦瓜中胡萝卜甾苷的高效薄层色谱分析方法研究

以硅胶G60为固定相、氯仿-乙醚-丙酮-冰醋酸-水-吡啶为流动相,建立了苦瓜胡萝卜甾苷的高效薄层色谱分析方法。苦瓜胡萝卜甾苷标样和醇提液上展开5cm,其Rf值为0.70。苦瓜胡萝卜甾苷的检测量在200～1000ng范围,其斑点的面积与苦瓜甾苷的检测量具有良好的线性关系,相关系数为0.9953。胡萝卜甾苷的平均回收率达100.64%,方法的精密度良好(RSD<1.5%),该方法快速、准确,可用于苦瓜甾苷的定性定量分析。

胡萝卜苷药理作用研究现状

胡萝卜苷是一种广泛存在于植物中的植物甾醇糖苷,经分离后,被陆续用于药理作用及疾病防治的研究。为促进胡萝卜苷相关研究并提供理论基础,通过搜索、收集并整理胡萝卜苷相关文献,归纳并论述其药理作用及作用机制,发现其具有良好的抗肿瘤、抗氧化及保护神经等药理作用,但目前研究尚处起步阶段,还需深入探索。

胡萝卜苷棕榈酸酯改善阿尔茨海默病大鼠学习记忆障碍的神经保护作用

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种与年龄相关的神经退行性疾病,其特征是进行性记忆减退和认知障碍。淀粉样β蛋白(Aβ)被认为是AD发病的致病因素。越来越多的证据表明Aβ神经毒性是由谷氨酸兴奋毒性介导的。胡萝卜苷棕榈酸酯(daucosterol palmitate,DSP)是从抗衰老中草药益智(Alpinia oxyphylla)中分离得到的一种具有抗谷氨酸兴奋毒性作用的植物类固醇。在我们之前的研究中。基于DSP的抗谷氨酸兴奋毒性作用,探讨了DSP改善AD模型大鼠学习记忆障碍的潜在保护作用及其机制。结果表明,DSP能有效改善Aβ诱导的大鼠学习记忆障碍,显著抑制Aβ诱导的海马组织ROS产生,有效地防止Aβ诱导的海马神经元损伤,显著恢复海马突触素的表达水平。这项研究表明,DSP可能是一个开发作为AD认知下降的治疗剂潜在的候选。

基于UHPLC-Q-TOF/MS技术分析肿节风总黄酮提取物促进巨核细胞分化的效应成分

目的筛选肿节风总黄酮提取物促进巨核细胞分化的效应成分。方法(1)以人巨核细胞白血病细胞(Dami)与人骨髓基质细胞(HS-5)共培养的方式建立巨核细胞分化障碍模型作为评价体系,实验分组:Dami组(Dami)、对照组(Dami+HS-5)、PMA组[Dami+HS-5+5 ng·mL-1佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯(PMA)]、模型组[Dami+HS-5+1%兔抗大鼠血小板血清(APS)+5 ng·mL-1PMA],培养48 h。采用流式细胞术检测巨核细胞分化成熟表面标记分子CD41a、CD61的表达情况。(2)将49只SD雄性大鼠随机分为空白血浆组、15 min组、30 min组、60 min组、90 min组、120 min组、240 min组,每组7只。各给药组大鼠灌胃肿节风总黄酮提取物1.26 g·kg^(-1),在6个设定时间点(15、30、60、90、120、240 min)采血制备肿节风总黄酮提取物经时含药血浆。(3)采用超高效液相色谱-四极杆串联飞行时间质谱法(UHPLC-Q-TOF/MS)对肿节风总黄酮提取物经时含药血浆进行分析,以峰面积构建肿节风总黄酮提取物经时含药血浆中的化学成分随时间变化量矩阵(X矩阵)。将所采集的6个不同时间点的肿节风总黄酮经时含药血浆对巨核细胞分化成熟障碍模型进行干预,采用流式细胞术检测细胞表面分子CD41a、CD61的表达水平,构建肿节风总黄酮提取物经时含药血浆效应矩阵(Y矩阵)。(4)将X矩阵和Y矩阵数据标准化处理后,采用偏最小二乘法(Partial least squares,PLS)计算分析量效关系,以变量重要性投影(Variable importance for projection,VIP)>1为阈值,筛选与细胞表面分子CD41a、CD61变化相关的效应成分,并进行化学成分鉴定,作为肿节风总黄酮提取物中促进巨核细胞分化的潜在效应成分,最后回归评价体系验证其药效。结果(1)与Dami组比较,对照组Dami细胞表面的CD41a表达水平明显升高(P<0.05)。与对照组比较,PMA组Dami细胞表面的CD41a、CD61表达水平均显著升高(P<0.01)。与PMA组比较,模型组Dami细胞表面的CD41a、CD61表达水平均显著降低(P<0.01)。(2)与空白血浆组比较,15、30、60、90、120、240 min各时间点Dami细胞表面分子CD41a、CD61表达水平均显著升高(P<0.01),且CD41a、CD61均在30 min组表达水平最高。在正、负离子模式下筛选出VIP值>1的潜在效应成分,并选取540.3638@12.25与559.2991@11.53两个成分进行药效学验证。559.2991@11.53被鉴定为胡萝卜苷(Daucosterol,Dau),540.3638@12.25被鉴定为迷迭香酸-4-O-β-D-葡萄糖(Rosmarinic acid 4-O-β-Dglucoside,Ros)。Ros、Dau分别干预巨核细胞分化成熟障碍模型后,与模型组比较,Ros及Dau低、中、高剂量组(40、60、80μg·mL-1)的Dami细胞表面的CD41a、CD61表达水平均显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论Ros、Dau可能是肿节风总黄酮提取物促进巨核细胞分化的效应成分。

高速逆流色谱法对独角莲中有效成分皂苷的分离纯化

本文采用高速逆流色谱法对独角莲中的有效成分皂苷进行分离纯化。分别以乙酸乙酯∶正丁醇∶乙腈∶水=5∶1∶1∶5(V/V)及乙酸乙酯∶正丁醇∶乙醇∶水=5∶10∶2∶20(V/V)为溶剂系统,用下相作流动相,上相作固定相,分别采用2 mL/min及1.5 mL/min的流动相流速、800 r/min的转速对独角莲中的有效成分皂苷进行分离,得到纯度98%的胡萝卜苷6 mg。

苦瓜中苦瓜甾苷的提取工艺研究

本研究通过单因素实验和正交实验,采用HPTLC检测方法,以苦瓜甾苷浸提量为考察指标,对影响苦瓜甾苷提取效果的各因素进行了研究。结果表明各因素对苦瓜甾苷提取效果的影响程度从高到低依次为:乙醇浓度>固液比>浸提时间>浸提温度。确定了苦瓜甾苷的最佳提取工艺参数为乙醇浓度80%,浸提温度55℃,浸提时间5h,固液比1:10。

荨麻总皂苷的提取纯化和含量测定

目的:本文是论述测定广西荨麻中总皂苷的含量的方法。方法:以胡萝卜苷为标准对照品,5%香草醛-冰醋酸、高氯酸为显色剂,采用紫外分光光度法,在542nm处测定吸光度,计算荨麻中总皂苷的含量。结果:荨麻的总皂苷浓度在0.0018-0.0072mg/ml与吸光度呈良好的线性关系Y=11.528X+0.117(r=0.9988),平均回收率为98.69%(n=6),RSD=1.11%;荨麻中总皂苷的含量为21.3mg/g。并建立了荨麻中总皂苷超声提取的提取方法和紫外-可见分光光度法对其含量测定方法。结论:此方法方便,准确性高,稳定性好,可用于荨麻药材的总皂苷的含量测定。

马齿苋中总皂苷提取工艺的优选

目的优选马齿苋中总皂苷的最佳提取工艺。方法设计L9(34)正交实验,采用紫外分光光度法测定总皂苷含量,以马齿苋中胡萝卜苷的含量为考察指标,考察提取时间、提取次数、料液比及乙醇体积分数4个因素对总皂苷提取的影响,优化提取工艺。结果得到马齿苋中总皂苷的最佳提取工艺,即乙醇的体积分数为75%,料液比为1∶10,提取次数3次,提取时间为1.0 h。结论该工艺稳定可靠。

冬凌草化学成分的研究

目的 :对河南济源产冬凌草的化学成分进行研究。方法 :运用层析手段和波谱方法分离并鉴定了 7个化合物。结果 :它们的结构分别为正三十三烷 (tritriacontane ,1) ,角鲨烯 (squalene ,2 ) ,木栓酮 (friedelin ,3) ,β 谷甾醇 (β sitosterol,4 ) ,N (2 氨甲酰基 苯基 ) 2 羟基苯甲酰胺 5 O β D 阿洛糖苷 (N (2 Aminoformyl phenyl) 2 hydroxybenzamide 5 O β D allopyranoside ,5 ) ,胡萝卜苷 (daucosterol,6 )和 4 乙酰氨基丁酸 (4 acety laminobutanoicacid ,7)。结论 :化合物 5是一个新化合物 ,化合物 1～ 3和

福建金线莲的化学成分研究Ⅱ

目的:研究福建金线莲Anoectochilusroxburghii的化学成分。方法:利用硅胶柱色谱及SephadexLH20柱色谱分离福建金线莲全草中的化学成分,通过理化常数和波谱分析鉴定化合物的结构。结果:从该植物氯仿萃取部分分得5个化合物,其结构分别鉴定为:对羟基苯甲醛(Ⅰ),阿魏酸(Ⅱ),槲皮素(Ⅲ),胡萝卜苷(Ⅳ),5,4′二羟基6,7,3′三甲氧基黄酮(cirsilineolⅤ)。结论:5种化合物均为首次从该植物中分得,其中化合物Ⅴ为首次从兰科植物中分得,其余为该属植物首次报道。