四甲基秋兰姆二硫化物对肉鸡胫骨生长板超微结构的影响

本研究拟研究四甲基秋兰姆二硫化物(福美双)对肉鸡胫骨生长板超微结构的时序性影响。7日龄AA肉鸡饲喂含100mg·kg-1福美双的饲料48h,分别在8、9、13日龄剖杀试验鸡,迅速采取胫骨生长板放入2.5%戊二醛溶液于4℃固定,制备超薄切片,用透射电镜做超微结构观察。结果发现:8日龄鸡增殖软骨细胞变圆、坏死,线粒体增多、稍肿胀、出现致密颗粒,内质网断裂扩张呈泡状,而9日龄时更为严重;在8、9日龄时,前肥大软骨细胞多数无完整的细胞结构、细胞质溶解、有疑似凋亡细胞,13日龄时,前肥大软骨细胞已有完整的细胞结构,但细胞器仍呈坏死状、分泌旺盛。由此可见,福美双在短时间内可导致胫骨生长板增殖细胞、前肥大软骨细胞坏死,且前肥大软骨细胞更易受损,影响了软骨细胞的正常发育,推测其可能引发能量代谢障碍,并干扰了细胞内信号转导,使细胞周期紊乱,从而引发肉鸡胫骨软骨发育不良。

大鼠胫骨生长板软骨细胞的体外培养及鉴定

【目的】建立体外培养及鉴定大鼠胫骨生长板软骨细胞的方法。【方法】采用胰酶和Ⅱ型胶原酶序贯消化法对5～8只3周龄SD大鼠胫骨生长板软骨行体外分离、培养并传至第6代、观察各代软骨细胞形态,MTT法绘制细胞生长曲线,Ⅱ型胶原免疫组化染色,阿力新蓝染色检测各代软骨细胞外基质硫酸糖氨多糖(GAG)含量和结构,采用逆转录聚合酶链反应检测各代细胞Ⅱ型胶原和aggreacan mRNA表达水平。【结果】体外培养的软骨细胞随着传代次数的增加,细胞形态由原代的多角形逐渐变为长梭形;MTT比色法显示,4代以前的软骨细胞的生长曲线近似"S"形,在第4～8天细胞呈对数生长,在第9～10天达平台期,至第11天开始出现生长抑制。4代以前的软骨细胞Ⅱ型胶原免疫组化呈强阳性。原代至第6代软骨细胞的GAG含量、长链分子百分比分别为0.35±0.04,(83.0±3.6)%;0.33±0.02,(78.7±4.2)%;0.31±0.06,(77.7±2.3)%;0.30±0.05,(77.0±5.3)%;0.14±0.01,(44.3±4.0)%;0.10±0.01,(39.3±2.5)%及0.07±0.01,(28.0±2.0)%,显示从第4代后随着传代次数的增加逐渐下降(P<0.05),Ⅱ型胶原和aggreacan mRNA表达水平亦显著减少(P<0.05)。【结论】本研究所采用的软骨细胞分离和培养的方法,能在短时间内获得高纯度和高存活率的软骨细胞,第3代及以前的细胞保留了软骨细胞的表型特征,增殖较快,这一方法为更深入地从细胞水平研究儿童的生长提供了可靠有效的模式。

SOX9在SD大鼠胚胎发育髁突软骨与胫骨生长板软骨中的时间表达研究

目的通过建立SD大鼠的发育模型,观察髁突软骨与胫骨生长板软骨在胚胎发育过程中的不同生长特性,探讨比较SOX9在2种不同性质软骨生长发育过程中的表达变化及其意义。方法30只成年SD大鼠按2雌1雄的比例合笼,观察雌鼠于合笼后是否发现阴栓作为怀孕的标志,计为妊娠0 d,隔离常规饲养。分别于孕鼠妊娠13 d、14 d、15 d、16 d、17 d、18 d、19 d、20 d、21 d剖腹取出胎鼠(embryo,E),连续切片获得E13 d~E21 d的髁突软骨和胫骨生长板软骨不同发育时间的切片标本。利用HE染色、免疫组织化学方法观察2种软骨胚胎发育中的组织学结构特点并检测SOX9在两种软骨胚胎发育中的表达变化。采用SPSS17.0软件包对数据进行单因素方差分析和两独立样本t检验。结果E14 d~E21 d,髁突软骨和胫骨生长板软骨的HE染色观察发现其组织学形态结构存在显著差异;免疫组化染色结果显示,E15 d、E17 d、E20 d胎鼠胫骨生长板软骨SOX9阳性表达强于髁突软骨,有统计学意义(P<0.05)。2种软骨组织中SOX9阳性细胞的分布规律基本一致,且均多位于增殖层。结论髁突软骨和胫骨生长板软骨组织结构具有相似的胚胎发育,其差异主要表现为细胞分层排列的方式,而早期胚胎发育相关基因SOX9在髁突软骨、胫骨生长板软骨中均有表达,呈现一定的时空变化,提示SOX9与2种软骨细胞的分化和软骨发育密切相关。

儿童胫骨远端生长板骨折的MRI诊断价值

目的探讨评价MRI诊断儿童胫骨远端生长板骨折的临床应用价值。方法选取我院收治的30例儿童胫骨远端生长板骨折患儿为研究对象,所有患儿入院时均已完善DR检查,入院7 d内行MRI检查,随访1~2年利用CR以及MRI复查。结果骨折类型:本组30例患儿中三平面骨折4例,按照Salter-Harris分型标准:I型、II型、III型、IV型、V型,分别为2例、11例、4例、7例、2例。骺板骨折MRI主要表现为生长板呈台阶状或者连续性中断,内部可见局限性线状异常信号(如斜行、垂直、水平等),部分生长板会连接干骺端骨折线或骨骺。经1个月随访,11例形成骨桥,2例骺早闭;随访半年时发现,胫骨远端骨梗死者3例,骨桥形成者9例;随访1年时发现骨桥2例;随访1.5年时发下骨桥形成1例,成角畸形1例,需行手术治疗。结论 MRI检查在儿童胫骨远端生长板骨折临床诊断中具有较高的应用价值,尤其是伤后7 d^6个月。