刺参体壁胰/类胰丝氨酸蛋白酶的性质及其在自溶中的作用

以刺参体壁中丝氨酸蛋白酶为研究对象,对其部分酶学性质及其与刺参自溶的关系进行研究。采用Tris-HCl缓冲溶液提取、硫酸铵盐析、透析及超滤获得刺参体壁粗酶液。结果显示,以Boc-Phe-Ser-Arg-MCA为底物时,粗酶液的丝氨酸蛋白酶活力最高;以其为底物,测得该类蛋白酶在pH值为6.2和8.5时呈现较强酶活力峰值,两者最适温度范围均为50~55℃;Cu^2+、Fe^3+、Pb^2+、Zn^2+强烈抑制该酶的活性,Ca^2+可提高该酶活力;邻菲咯啉、乙二胺四乙酸以及半胱氨酸修饰剂均能够部分抑制该酶活力。4-(2-氨乙基)苯磺酰氟盐酸盐、苯甲基磺酰氟、Na-对甲苯磺酰-L-苯丙氨酸氯甲基酮、(3S)-7-氨基-1-氯-3-磺酰氨基-2-庚酮盐酸盐、大豆胰蛋白酶抑制剂能够显著抑制蛋白酶的活力以及自溶过程中可溶性蛋白、三氯乙酸可溶性多肽的生成。上述结果表明,刺参体壁中存在至少2种具有一定的金属离子依赖性的胰/类胰丝氨酸蛋白酶,其活性中心或底物识别位点可能有半胱氨酸的参与,该类蛋白酶很可能参与刺参自溶过程中蛋白质的降解。

跨膜丝氨酸蛋白酶TMPRSS2的纯化及类胰蛋白酶活性研究

目的纯化LNCaP细胞中TMRPSS2蛋白,测定其酶促反应米氏常数Km值。方法应用Protein A亲和层析柱纯化TMPRSS2,免疫蛋白印记法鉴定分子量,Graf it@软件计算酶促反应米氏常数Km。结果TMPRSS分子量为70 kD。米氏常数Km为686.65μM。结论Protein A亲和柱可用于纯化LNCaP细胞中TMPRSS2。TMPRSS2具有类蛋白酶活性。

固定化胰凝乳蛋白酶拆分L-苯丙氨酸

用酶活力为２．５ｍｇ／ｇ的多孔硅球固定化胰凝乳蛋白酶可拆分ＤＬ－苯丙氨酸甲酯得Ｌ－苯丙氨酸，拆分收率９２．３％，光学纯度９６．２％。

α-胰凝乳蛋白酶的固定化及其对DL-苯丙氨酸的光学拆分

以氨丙基多孔硅球为载体，戊二醛为交联剂制得固定化α-胰凝乳蛋白酶．其含酶量为3．6mg／g，米氏常数Km=1．2×10－3mol／L，最适宜温度为35℃，pH值为7．0，对热、酸碱、甲醇以及尿素的稳定性有较大提高，Ca2+激活效应明显．用该固定化酶连续拆分DL-苯丙氨酸制备L-苯丙氨酸时，拆分产率高于90％，产品纯度超过96％；连续使用2个月后仍能保持较高酶活力．

金黄色葡萄球菌丝氨酸类蛋白酶B的表达及活性鉴定

目的:以金黄色葡萄球菌基因组DNA为基础,在枯草芽孢杆菌中得到具有剪切功能的金黄色葡萄球菌丝氨酸类蛋白酶B。方法:以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板,PCR扩增得到SplB基因,同源重组到表达载体pHTSHIS上,再转化枯草芽孢杆菌;优化诱导条件发酵枯草芽孢杆菌,离心后超滤浓缩上清液,再经镍柱分离纯化;利用SDS-PAGE、Lowry法对蛋白的相对分子质量、浓度等进行分析,对蛋白的酶切活性进行鉴定。结果:金黄色葡萄球菌基因组DNA经PCR扩增得到与预计大小相符的DNA片段,通过同源重组构建了表达载体pHTS-SplB-His;选取诱导前菌液D_(600nm)为2.0、IPTG浓度为0.5 mmol/L、诱导4 h的最优条件发酵枯草芽孢杆菌,表达大量金黄色葡萄球菌丝氨酸类蛋白酶B;蛋白浓缩后,经镍柱分离纯化得到纯度较高且具有剪切功能的金黄色葡萄球菌丝氨酸类蛋白酶B。结论:采用枯草芽孢杆菌进行发酵表达,可提高金黄色葡萄球菌丝氨酸类蛋白酶B的表达量,并且能够得到具有剪切功能的蛋白。本研究可为外源蛋白在枯草芽孢杆菌中的发酵技术提供重要参考。

壳聚糖-精氨酸树脂固定化胰凝乳蛋白酶及其性质

以具柔性亲水手臂的壳聚糖-精氨酸树脂为载体,用戊二醛交联胰凝乳蛋白酶,获得壳聚糖-精氨酸树脂固定化胰凝乳蛋白酶。最佳固定化条件为:m(酶)∶m(载体)=20∶1000、戊二醛体积分数为1.0%、pH=5.20、30℃交联60min。固定化酶活力达850U/g,Km为1.83mmol/L,比游离酶增大33.6%,比交联壳聚糖固定化酶低24.0%。壳聚糖-精氨酸树脂固定化胰凝乳蛋白酶水解时间进程曲线与游离酶基本一致,均在反应30min达到最大速率,最适温度为70℃,比游离酶升高10℃;在75℃时的半衰期可达6.0h,比游离酶提高约4.3倍;最适pH值为5.92,比游离酶向酸性偏移2pH单位。4℃贮存半衰期为49d。

肥大细胞类胰蛋白酶与支气管哮喘

As an important mediator of allergic inflammation, mast cell tryptase is involved in the induction of hypersensitivity, infiltration of inflammatory cells and tissue remodeling in respiratory tract. The effects of tryptase inhibitors on the actions of tryptase show further the potential of tryptase in the pathogenesis of asthma and its inhibitors in the treatment of asthma.

HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶和NS5B RNA聚合酶抑制剂的临床研究进展

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)NS3/4A丝氨酸蛋白酶和NS5B RNA依赖的RNA聚合酶是病毒蛋白前体加工成熟和复制过程中十分重要的两个酶,是抗HCV治疗的理想靶点.近年来,关于HCV NS3/4A蛋白酶和NS5B RNA聚合酶抑制剂的研究是抗HCV研究最为活跃的方向,本文综述了他们在临床试验中的最新研究进展.

蛇毒丝氨酸蛋白酶的研究进展

蛇毒丝氨酸蛋白酶(Snake Venome Serine Proteinases,SVSPs)是蛇毒中一类重要的蛋白水解酶,与凝血系统关系密切,具有重要的临床应用价值。笔者对SVSPs的种类与生物学功能、应用、纯化、分子生物学研究等方面进行了综述,同时也指出了目前存在的问题及今后的发展方向,以期为进一步的基础研究提供理论基础。

妊娠期糖尿病患者血清内脏脂肪组织源性丝氨酸蛋白酶抑制剂检测及意义

目的探讨内脏脂肪组织源性丝氨酸蛋白酶抑制剂(Vaspin)与妊娠期糖尿病(GDM)的关系。方法严格按照入组及排除标准,设置孕前肥胖GDM组84例,孕前正常GDM组84例,84名糖耐量正常(NGT)健康孕妇为对照组。检测3组空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)及血清Vaspin水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。以单因素相关分析、多元逐步回归分析统计分析相关性及线性关系。结果 1 GDM组中FPG、FINS及HOMA-IR均明显高于健康对照组,且后二者还表现为:孕前肥胖GDM组大于孕前正常GDM组大于健康对照组(P<0.05);2 GDM组血清Vaspin出现孕前肥胖GDM组约等于孕前正常GDM组大于健康孕妇对照组(P<0.05);3相关性分析:血清Vaspin与体质量指数(BMI)、FPG、FINS及HOMA-IR呈正相关(P<0.05);4多元回归分析显示BMI、FPG、FINS是孕妇血清Vaspin的重要影响因素。结论 Vaspin与GDM关系密切,能反映孕妇糖、脂代谢紊乱和胰岛素抵抗程度,可能参与了GDM疾病的发生和发展。

杀线虫真菌——少孢节丛孢菌胞外丝氨酸蛋白酶的研究进展

在家畜寄生性线虫的生物控制中熏利用杀线虫真菌——少孢节丛胞菌在侵染线虫过程中分泌的胞外蛋白酶熏固定线虫并降解其体壁已显示出巨大的应用潜力。近年来,国外学者主要研究了杀线虫真菌胞外蛋白酶,特别是对少孢节丛孢菌胞外丝氨酸蛋白酶基因PⅡ的分离、测序分析、诱导和利用基因工程技术对该蛋白酶基因克隆和异源表达进行了研究。笔者对杀线虫真菌少胞节丛孢菌的研究进展作了阐述。

新的丝氨酸蛋白酶基因ST14(SNC19)在大肠癌中的表达研究

目的 研究新的丝氨酸蛋白酶基因 ST14(SNC19)在大肠癌中的分布和表达情况 ,探讨该基因与淋巴结转移的相关性。方法 采用原位杂交技术检测 30例大肠癌、癌旁黏膜和正常肠黏膜的 ST14表达。结果 30例病人中 ,正常肠黏膜组 ST14表达阳性率 46 .7%,癌旁黏膜组 43.3%,大肠癌组 6 .7%,前两组高于大肠癌组 (P<0 .0 5 )。淋巴结转移组癌旁黏膜 ST14表达阳性率 (6 4.7%)高于无淋巴结转移组 (15 .4%) ,差异有显著性 (P<0 .0 5 )。结论 ST14在部分大肠癌中呈表达缺陷 ,ST14可能作为预测淋巴结转移和判断预后的新指标。

肠道丝氨酸蛋白酶与腹泻型肠易激综合征

肠易激综合征(IBS)为临床常见功能性肠病,其病理生理学机制迄今尚未完全阐明。近年研究发现腹泻型IBS(IBS-D)患者肠黏膜和肠腔内丝氨酸蛋白酶的表达水平和活性明显增高,丝氨酸蛋白酶可能通过激活蛋白酶激活受体-2(PAR-2)引起肠黏膜通透性增加和内脏敏感性增高,在IBS-D的发病中起重要作用。本文就肠道丝氨酸蛋白酶与IBS-D的研究进展作一综述。

新型丝氨酸蛋白酶Matriptase在膀胱移行细胞癌中的表达及意义

【目的】检测新型丝氨酸蛋白酶(Matriptase)在膀胱移行细胞癌(BTCC)中的表达,探讨与BTCC临床病理参数间的关系及其临床意义。【方法】应用免疫组化技术检测Matriptase在BTCC及正常膀胱组织中的表达,并结合临床病理资料分析。【结果】Matriptase在BTCC及正常膀胱黏膜中均有表达;在BTCC中的表达阳性率明显低于正常膀胱组织,差异有统计学意义(P<0.05);膀胱肿瘤中低分化组表达明显低于高分化组,组间差异有统计学意义(P<0.05);不同临床分期、淋巴结转移组间差异无统计学意义(P>0.05)。【结论】Matriptase在BTCC中的表达与促分化有关,可能是一种分化程度的指标。

跨膜丝氨酸蛋白酶TMPRSS3在遗传性耳聋中研究进展

跨膜丝氨酸蛋白酶TMPRSS3属于Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白酶(TTSP)家族成员,具有典型TTSP亚家族结构域,如LDLRA、SRCR结构域和丝氨酸蛋白酶结构域。TMPRSS3突变能导致非综合征型常染色体隐性遗传性耳聋(DFNB8/10),是发现的第一个与耳聋相关的蛋白酶。

草鱼肠道肝胰脏蛋白酶活性初步研究

对不同种类不同蛋白质水平的饲料与草鱼肠道、肝胰脏蛋白酶活性之间的关系,对草鱼前、中和后肠蛋白酶活性的差异,以及这些酶的最适酪蛋白浓度和最适pH值进行了测定研究。草鱼肠道和肝胰脏蛋白酶活性在饲料含蛋白质32—40％的范围内随着蛋白质含量的增加而升高。肝胰脏蛋白酶活性要比肠道稍高些。饲草草鱼肝胰脏蛋白酶比活为每毫克酶蛋白每分钟产生332.5微克酪氨酸,肠道蛋白酶比活为260.0微克酪氨酸。草鱼肠道蛋白酶活性以后肠较高,前、中肠次之。在pH4—9范围内,以酪蛋白作为底物,草鱼肠道、肝胰脏蛋白酶最大活性分别在pH6.5和pH7.0。在酪蛋白实际浓度为83.33—333.33微克/毫升范围内,肠道和肝胰脏蛋白酶最适酪蛋白浓度分别为166.67微克/毫升和208.33微克/毫升。

澳新批准两种丝氨酸蛋白酶作为加工助剂

据澳新食品标准局（FSANZ）消息，澳新食品标准局发布第156号修正案，批准A1098号申请--丝氨酸蛋白酶（胰凝乳蛋白酶）作为加工助剂；批准A1099号申请--丝氨酸蛋白酶（胰蛋白酶）作为加工助剂。