微RNA-204-5p、蛋白锌指E盒结合同源盒蛋白1在新生儿肺炎血清中的表达

目的 探讨微RNA-204-5p(miR-204-5p)、蛋白锌指E盒结合同源盒蛋白1(ZEB1)在新生儿肺炎(NP)病儿血清中的表达变化及其在病情评估及预后预测中的临床价值。方法 选取2021年10月至2022年5月张家口市妇幼保健院收治的NP病儿80例为NP组,另选取同期该院出生的健康新生儿80例为对照组。检测血清miR-204-5p、ZEB1、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)及C反应蛋白(CRP)水平并比较;采用Pearson法分析NP病儿血清miR-204-5p、ZEB1水平及其与临床指标的相关性;应用受试者操作特征(ROC)曲线分析miR-204-5p、ZEB1及二者联合预测NP不良预后的价值。结果 NP组血清miR-204-5p水平(0.47±0.16比1.01±0.21)、血氧饱和度[(83.99±6.15)%比(95.32±6.74)%]显著低于对照组,血清ZEB1[(4.76±0.71)ng/L比(2.15±0.36)ng/L]、CK、CK-MB[(46.25±12.52)U/L比(23.22±9.64)U/L]及CRP水平[(18.09±4.29)mg/L比(3.31±0.71)mg/L]均显著高于对照组(P<0.05)。重症组血清miR-204-5p水平、血氧饱和度显著低于轻症组,血清ZEB1、CK、CK-MB及CRP水平均显著高于轻症组(P<0.05)。血清miR-204-5p与CPIS评分、CK-MB及CRP水平呈负相关(r=-0.33、-0.30、-0.40,P<0.05),与血氧饱和度呈正相关(r=0.41,P<0.05);血清ZEB1水平与CPIS评分、CK-MB及CRP水平呈正相关(r=0.28、0.37、0.44,P<0.05),与血氧饱和度呈负相关(r=-0.36,P<0.05);血清miR-204-5p与ZEB1水平呈负相关(r=-0.56,P<0.05)。预后不良组血清miR-204-5p水平、血氧饱和度低于预后良好组(P<0.05),血清ZEB1、CK、CK-MB及CRP水平均显著高于预后良好组(P<0.05)。ROC曲线显示,miR-204-5p对NP不良预后预测的AUC为0.89,截断值为0.47,其灵敏度、特异度分别为95.12%、72.41%;ZEB1对NP不良预后预测的AUC为0.92,截断值为5.16,其灵敏度、特异度分别为87.80%、86.21%;二者联合对预后预测的AUC为0.99,明显高于二者单独诊断,其灵敏度、特异度分别为97.56%、94.83%。结论 miR-204-5p在NP病儿血清中低表达,ZEB1在NP病儿血清中高表达,均与NP病情严重程度有关,二者联合对NP不良预后具有较高的预测价值。

胰升糖素样肽-1对胰腺-十二指肠同源异型盒基因-1表达的调节

目的胰升糖素样肽-1(glucagons-1ike peptide l,GLP-1)最重要的生理作用是葡萄糖依赖的胰岛素刺激作用,但其分子基础尚不清楚。文中研究不同浓度GLP-1对大鼠胰岛细胞胰腺-十二指肠同源异型盒基因-1(pancreatic-duodenal homeobox-1,PDX-1)表达的调节作用,探讨GLP-1对胰岛素基因转录的调节机制和临床意义。方法不同刺激浓度GLP-1(0、1、10、100、1000 nmol/L)与葡萄糖浓度分别为2.2、5.5、11.1 mmol/L的RPMI1640营养液共培养24 h后,提取胰岛细胞总RNA。运用RT-PCR技术检测PDX-1基因表达的变化。结果葡萄糖浓度为2.2和5.5 mmol/L时,随GLP-1浓度升高,PDX-1基因表达量呈钟型方式升高;葡萄糖浓度为11.1 mmol/L时,随GLP-1浓度升高,PDX-1基因表达量呈浓度依赖性升高。结论 GLP-1以葡萄糖依赖和浓度依赖方式促进PDX-1基因的表达。

葡萄糖对胰岛细胞胰腺-十二指肠同源盒基因-1表达的影响

目的研究不同浓度葡萄糖对大鼠胰岛细胞胰腺-十二指肠同源盒基因-1(PDX-1)表达的调节作用。方法用不同浓度葡萄糖分别刺激胰岛细胞1、4、7、14d,运用RT-PCR技术检测PDX-1基因表达的变化。结果与对照组相比(葡萄糖浓度为5.5mmol/L),刺激胰岛细胞1d时,葡萄糖浓度为2.2mmol/L时,PDX-1表达显著降低,当葡萄糖浓度高于对照组时,PDX-1基因的表达量呈浓度依赖性升高;4d时,低糖浓度仍然显著抑制PDX-1基因表达,浓度升至11.1mmol/L,PDX-1基因表达量呈显著升高,浓度为16.7mmol/L时,PDX-1基因表达量呈下降趋势,浓度升至33.3mmol/L时,PDX-1基因表达量明显降低;7d时,除浓度11.1mmol/L外,其余浓度PDX-1基因表达均降低;刺激时间延长到14d,非生理浓度葡萄糖均表现为对PDX-1基因的抑制作用。结论低血糖可以抑制PDX-1基因表达。短期的血糖升高可以一定程度地刺激PDX-1基因表达,但长期的高血糖则使PDX-1基因表达明显受抑。

白细胞介素10基因对未发病非肥胖型糖尿病小鼠肝脏胰-十二指肠同源盒1表达的影响

背景:研究发现肝脏细胞在给予转入胰-十二指肠同源盒1基因后可合成胰岛素,抗CD20单克隆抗体可抑制产胰岛素的肝脏细胞发生自身免疫反应,但机制尚不明确。目的:了解腺病毒介导的小鼠白细胞介素10(Adenovirus vector-mediated murine interleukin,Ad-mI L-10)及抗CD20单克隆抗体联合干预未发病非肥胖糖尿病模型小鼠,对其肝脏细胞以及肝脏胰-十二指肠同源盒1表达的影响。方法:3-5周龄雌性未发病非肥胖糖尿病模型小鼠40只,随机分为抗CD20单克隆抗体组、抗CD20单克隆抗体+白细胞介素10组、白细胞介素10组和对照组,分别于第1,8,15,21天尾静脉注射抗CD20单克隆抗体、抗CD20单克隆抗体+Ad-m IL-10、Ad-mI L-10和生理盐水。结果与结论:12周后,与对照组相比,经抗CD20单克隆抗体和/或白细胞介素10治疗的未发病非肥胖糖尿病模型小鼠血糖水平明显降低,而血清和肝脏中胰岛素、白细胞介素10和CD20表达明显增加,同时肝脏中胰-十二指肠同源盒1表达水平增加;且经抗CD20单克隆抗体和白细胞介素10联合对上述指标的影响高于单独应用;但无论是联合干预还是单独干预均对小鼠肝脏炎症病变无明显影响。证实CD20单抗及白细胞介素10基因联合干预为促使非肥胖糖尿病模型小鼠肝脏胰-十二指肠同源盒1表达机制之一。

胰十二指肠同源盒基因-1逆转录病毒表达载体的构建及其在肝干细胞中的稳定表达

目的:通过克隆胰十二指肠同源盒基因-1(pancreatic duodenal homeobox-1,PDX-1),构建表达PDX-1的逆转录病毒表达载体和稳定表达PDX-1的肝原始细胞系(liver epithelial progenitor cells,LEPCs),以研究肝干细胞向胰腺细胞的转分化潜能。方法:通过PCR方法克隆PDX-1基因全长,将其构建到pMSCVpuro逆转录病毒载体中获得pMSCV PDX-1 puro载体。将该载体导入Phoenix包装细胞系,进而采用乒乓转染的方法感染包装细胞PT67,获得高滴度稳定产毒的PT67细胞系。结果:成功构建了pMSCV PDX-1 puro载体,并转染PT67细胞。利用PT67细胞系产生的病毒上清可以高效的感染体外培养的肝干细胞LEPCs,获得稳定表达PDX-1基因的LEPCs(LEPCs PDX-1)。结论:PDX-1逆转录病毒表达载体的成功构建和稳定表达PDX-1的肝干细胞系的获得为研究LEPCs向胰腺细胞的转分化奠定了基础。

高脂状态下Exendin-4对胰岛βTc6细胞内胰-十二指肠同源盒-1表达、细胞增殖功能及胰岛素分泌能力的干预作用

目的 探讨Exendin-4在高脂状态下是否具有抗脂毒性及其相关机制是否涉及胰-十二指肠同源盒（PDX）-1。方法 不同浓度的Exendin-4培育βTc6细胞不同时间,再应用1 mmol/L游离脂肪酸（FFA）干预24 h,检测细胞内PDX-1表达及增殖能力和胰岛素分泌功能。结果 1Exendin-4干预6 h,各组细胞PDX-1表达、细胞增殖能力和胰岛素分泌功能均未见明显改善;2当Exendin-4干预延长至12~24 h,随着干预浓度增高,细胞内PDX-1逐渐升高,细胞增殖能力和胰岛素分泌功能明显好转。结论 高脂状态下适宜浓度的Exendin-4干预一定时限可上调β细胞内PDX-1的表达,并改善细胞增殖功能及胰岛素分泌能力。

胰十二指肠同源盒基因-1启动子在肝干细胞分化研究中的应用

背景与目的利用报告基因监测肝干细胞向胰腺细胞的转分化潜能。材料与方法通过PCR从小鼠基因组中克隆胰十二指肠同源盒基因-1(Pancreaticduodenalhomeobox-1,PDX-1)启动子片段,构建PDX-1启动子调控的绿色荧光蛋白报告载体(pPDX-1EGFP),并利用报告载体标记的肝原始细胞系(Liverepithelialprogenitorcells,LEPCs)观察肝干细胞向胰腺细胞的转分化潜能。结果获得PDX-1启动子调控的绿色荧光蛋白报告载体及报告载体标记的LEPCs。结论pPDX-1EGFP报告载体的成功构建为研究LEPCs向胰腺细胞的转分化提供了简捷的分子工具。

胰高血糖素样肽-1受体激动剂对糖耐量减低大鼠胰岛β细胞胰腺十二指肠同源盒因子-1的影响

糖耐量减低（IGT）是2型糖尿病（T2DM）患者的必经阶段,近20年来T2DM呈迅猛发展,Yang等[1]研究显示,城市、乡镇和富裕农村20岁以上人群中糖调节受损的患者达15.5%,平均每年有10%～15%的发展为糖尿病。

艾塞那肽在高糖和低糖条件下对INS-1细胞胰腺十二指肠同源盒表达和细胞凋亡的影响

目的探讨胰高糖素样肽-1(GLP-1)类似物艾塞那肽在高糖和低糖条件下对胰岛B细胞株INS-1细胞胰腺十二指肠同源盒(PDX-1)表达和细胞凋亡的影响。方法体外培养INS-1细胞,分为正常对照组、高糖组、低糖组、高糖艾塞那肽干预组、低糖艾塞那肽干预组、高糖二甲双胍干预组。使用相差显微镜观察细胞生长状态,采用流式细胞仪双染法和原位TUNEL法检测INS-1细胞凋亡情况,分别采用实时PCR法、Western印迹法和免疫组织化学法检测PDX-1表达情况。结果高糖组和低糖组的细胞凋亡指数和细胞凋亡率均显著高于正常对照组(P值均<0.01),高糖组与低糖组间的差异均无统计学意义(P值均>0.05);高糖艾塞那肽干预组的细胞凋亡指数和细胞凋亡率均显著高于正常对照组(P值均<0.05),但均显著低于高糖组(P值均<0.05);低糖艾塞那肽干预组的细胞凋亡指数和细胞凋亡率均显著高于正常对照组(P值均<0.05),但均显著低于低糖组(P值均<0.05);高糖艾塞那肽干预组与低糖艾塞那肽干预组间细胞凋亡指数和细胞凋亡率的差异均无统计学意义(P值均>0.05);高糖二甲双胍干预组的细胞凋亡指数和细胞凋亡率均显著高于正常对照组(P值均<0.05),但与高糖组的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。高糖组和低糖组的PDX-1表达均显著低于正常对照组(P值均<0.01),高糖组与低糖组间的差异无统计学意义(P>0.05);高糖艾塞那肽干预组的PDX-1表达显著低于正常对照组(P<0.05),但显著高于高糖组(P<0.05);低糖艾塞那肽干预组的PDX-1表达显著低于正常对照组(P<0.05),但显著高于低糖组(P<0.05);高糖艾塞那肽干预组与低糖艾塞那肽干预组间PDX-1表达的差异无统计学意义(P>0.05);高糖二甲双胍干预组的PDX-1表达显著低于正常对照组(P<0.05),但与高糖组的差异无统计学意义(P>0.05)。结论在高糖和低糖条件下,艾塞那肽均能抑制INS-1细胞的凋亡,同时上调PDX-1的表达水平。

胰腺十二指肠同源盒-1在乳腺癌分子亚型中的表达及临床意义

目的通过检测乳腺癌病变中胰腺十二指肠同源盒-1(PDX-1)蛋白及mRNA的表达情况,分析其与乳腺癌分子亚型之间的关系。方法采用免疫组织化学EnVision法检测PDX-1、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、第二号人类表皮生长因子受体(Her-2)、细胞角蛋白5&6(CK5/6)和上皮生长因子受体(EGFR)蛋白的表达,实时定量RT-PCR法检测PDX-1mRNA的表达。结果 PDX-1蛋白和mRNA在乳腺癌管腔A型和管腔B型中的表达显著低于在Her-2过表达型、基底细胞样型和未分类型中的表达(P<0.05)。结论 PDX-1蛋白和mRNA在乳腺癌管腔A型和管腔B型中的表达显著降低,PDX-1有望成为乳腺癌基因分型的筛选新指标。

胰腺十二指肠同源盒基因-1/神经生成素3信号通路在胰岛β细胞分化中的作用机制研究进展

胰岛β细胞数量的绝对不足或相对减少可导致糖尿病的发生发展。胰腺十二指肠同源盒基因-1(Pdx-1)是胰腺发育和胰岛素基因转录的重要调控基因,在胰腺发育和胰腺各种细胞的分化中发挥重要作用。神经生成素3(Ngn3)是对胰岛发育有重要影响的转录因子,可始动内分泌祖细胞,促进胰内胚层细胞向内分泌细胞分化,同时维持成熟胰岛细胞的功能。Pdx-1/Ngn3信号通路可促进干细胞向胰岛β细胞的分化和增殖,Pdx-1是Ngn3的上游调控因子,对胰干细胞的作用在于激活Ngn3的表达,Ngn3可通过调控神经细胞分化因子1、胰岛素瘤相关蛋白1(Insm1)、胰岛素基因增强结合蛋白1及Insm2、桩蛋白6、Nkx2同源框2、NK6 Homeobox 1等直接靶基因,影响胰内分泌细胞的分化和形成。

胰腺-十二指肠同源盒1与胰岛β细胞受体相互作用的研究进展

胰腺-十二指肠同源盒1(PDX-1)作为调节激素表达的转录因子特异表达于胰岛内分泌细胞。它含有3个结构域,即氨基末端转录活化结构域、同源结构域、羧基末端结构域,并且不同物种间PDX-1的氨基酸序列保持高度的同源性。活化的PDX-1与核输入受体importinβ1结合形成复合物从细胞质转位到细胞核内发挥生物学功能。多种细胞受体与配体结合后通过不同的信号转导通路参与PDX-1的表达和生物学活性的调控。胰高血糖素样肽1受体、过氧化物酶体增殖物激活受体、Fas、肝X受体的活化将促进PDX-1的表达与转位,而微小异源二聚体伙伴基因、糖皮质激素受体的活化对PDX-1功能的发挥则有抑制作用。

胰十二指肠同源框基因-1在骨髓来源nestin阳性细胞的转染及表达

目的将真核表达载体pEGFP-C1-PDX-1转染大鼠骨髓来源nestin阳性细胞,并对其转染条件进行优化以获得较高效率。方法将已构建好的重组载体转染骨髓来源nestin阳性细胞,改变DNA的量、转染后培养基中的血清浓度,在荧光显微镜下观察荧光并计算转染效率;转染后48h用RT-PCR检测目的基因的表达情况。结果质粒2～10μg获得最佳的转染效率,提高转染后培养基的血清浓度可提高转染后细胞存活率及转染效率。RT-PCR检测转染后骨髓来源nestin阳性细胞有PDX-1表达。结论通过优化转染条件提高了pEGFP-C1-PDX-1转染大鼠骨髓来源nestin阳性细胞的效率,为其成为组织工程的种子细胞提供了实验依据。

Pdx-1、Ngn3联合MafA诱导干细胞分化为胰岛素分泌细胞移植治疗1型糖尿病大鼠的效果

目的通过胰十二指肠同源盒1(Pdx-1)、神经元素3(Ngn3)联合V型肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源基因A(MafA)共转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)诱导分化为胰岛素分泌细胞(IPCs),移植治疗1型糖尿病大鼠并观察其疗效。方法Pdx-1、Ngn3和MafA共转染BMSCs诱导为IPCs,链脲佐菌素(STZ)制备45只1型糖尿病SD大鼠模型,BMSCs组(15只)肾被膜下移植2×10^(6) BMSCs,IPCs组(15只)大鼠肾被膜下移植2×10^(6) IPCs,sham-operation组(15只)大鼠肾被膜下注入等量生理盐水,另取15只健康SD大鼠肾被膜下注入等量生理盐水作为normal组。监测各组大鼠移植第0、7、14、21、28 d空腹血糖及体重;第21天对各组大鼠均行葡萄糖耐量试验;第28天取各组大鼠肾脏组织进行免疫组化。结果BMSCs和IPCs组大鼠血糖随时间下降,移植第21天两组大鼠空腹血糖低于移植第0天,且均低于同期sham-operation组(P<0.05),移植第28天IPCs组大鼠空腹血糖低于BMSCs组(P<0.05)。糖尿病大鼠中IPCs组和BMSCs组腹腔葡萄糖耐量实验曲线下面积小于sham-operation组,且IPCs组曲线下面积最小(P<0.05)。BMSCs组和IPCs组大鼠肾脏组织可见棕色荧光的胰岛素表达,且IPCs组胰岛素荧光光密度高于BMSCs组(P<0.05)。结论Pdx-1-Ngn3联合MafA诱导BMSCs形成的IPCs移植后在糖尿病大鼠体内可降低糖尿病大鼠的空腹血糖。

黑色素瘤细胞外泌体通过Prospero同源异形盒蛋白1调控肿瘤淋巴转移机制的研究

目的探讨黑色素瘤外泌体(melanoma exosomes,MM-ex)携带的果蝇Prospero同源异形盒蛋白1(prospero homeobox protein 1,Prox-1),在调控淋巴管内皮细胞(lymphatic endothelial cells,LECs)增殖、迁移以及生成具有转移肿瘤细胞功能淋巴管过程中的作用。方法采用慢病毒转染实验构建低表达Prox-1黑色素瘤细胞株(MM^(shProx-1))。采用试剂盒法获取MM和MM-ex^(shProx-1)的外泌体(MM-ex和MM-ex^(shProx-1))。采用免疫荧光检测、蛋白质印迹法检测、细胞增殖及细胞迁移实验,观察MM-ex及MMex^(shProx-1)对LECs生物学特性的影响。采用免疫组化(IHC)法检测2015年9月至2021年4月江苏大学附属医院收治的32例皮肤黑色素瘤病理标本中Prox-1及淋巴管内皮细胞透明质酸受体-1(lymphatic vessel endothelial hyaluronic acid receptor-1,LYVE-1)的表达情况,统计微淋巴管密度(microlymphatic vessel density,MLVD),并分析Prox-1及MLVD与黑色素瘤生物学特性的相关性。结果细胞实验:MM-ex促进淋巴管内皮细胞增殖及迁移,促进了淋巴管的成形。MM-ex^(shProx-1)对LECs无增殖及迁移的影响,对淋巴管成形无促进作用。临床研究:免疫组化的结果表明Prox-1、LYVE-1在黑色素瘤组织及肿瘤周围组织中的阳性表达率显著高于正常皮肤组织。Prox-1信号在黑色素瘤淋巴结转移组和Ⅲ期及Ⅳ期肿瘤组的表达率[87.50%(14/16)、79.17%(19/24)]明显高于无淋巴结转移组和Ⅰ期及Ⅱ期肿瘤组[37.50%(6/16)、12.50%(1/8)](均P<0.05)。LYVE-1在黑色素瘤转移组和Ⅲ期及Ⅳ期肿瘤组的表达(9.30±4.65、5.15±1.72)明显高于无淋巴结转移组和Ⅰ期及Ⅱ期肿瘤组(5.66±1.69、5.30±1.65,均P<0.05)。Prox-1、LYVE-1的表达情况均与病人的年龄、性别无关(均P>0.05)。结论MM-ex通过Prox-1促进LECs的增殖及迁移,在肿瘤淋巴管再生中起到重要作用。Prox-1、LYVE-1及MLVD与黑色素瘤淋巴转移及预后呈明显相关性,为皮肤黑色素瘤的早期淋巴转移及预后提供一个新的判断指标,也为皮肤黑色素瘤的临床治疗提供新的方法和策略。

肺腺癌中锌指E-盒结合同源异型盒蛋白-1、-2和增殖细胞核抗原表达及意义

目的检测肺腺癌中锌指E-盒结合同源异形盒蛋白(ZEB)-1、ZEB-2和增殖细胞核抗原(PCNA)标记的增殖指数的关系。方法 59例肺腺癌患者临床资料及术后蜡块组织作为观察组,同期肺肿物切除后距肿物边缘>3 cm肿瘤周围正常肺组织59例作为对照组,应用免疫组化方法检测两组中ZEB-1、-2和PCNA的表达。结果两组中ZEB-1、-2和PCNA的阳性率差别显著,观察组中ZEB-1、-2和PCNA表达的阳性率与肿瘤的最大径、肿瘤的胸膜累犯密切相关,PCNA表达的阳性率与淋巴结转移及是否伴有坏死密切相关。观察组中ZEB-1和PCNA的表达呈正相关。结论肺腺癌术后组织中ZEB-1、-2和PCNA高表达,不仅对肿瘤的形成有重要意义,还可以促进肿瘤的进展,尤其是PCNA高表达可能对肿瘤进展有多种生物学意义。

锌指E-盒结合同源异形盒蛋白-1、-2和上皮型黏附素在结肠腺癌中的表达

目的观察锌指E-盒结合同源异形盒蛋白(ZEB)-1、-2和上皮型黏附素(E-cadherin)在结肠腺癌术后组织中的表达。方法观察组为63例结肠腺癌术后患者,收集临床资料及术后蜡块组织。选择距肿物边缘>3 cm的非肿瘤性结肠黏膜组织36例作为对照组,应用免疫组化SP法检测二组中ZEB-1、-2和E-cadherin表达。结果观察组中ZEB-1和-2的阳性率明显高于对照组,观察组中E-cadherin的阳性率明显低于对照组。观察组中ZEB-1、-2和E-cadherin的表达与脉管浸润、淋巴结转移密切相关,ZEB-1、-2的表达与肿瘤最大径、浸润深度密切相关。E-cadherin的表达与肿瘤的最大径、浸润深度无明显相关性。相关性分析显示观察组中ZEB-1和E-cadherin、ZEB-2和E-cadherin的表达呈负相关。结论 ZEB-1、-2高表达、E-cadherin低表达在结肠腺癌发生和进展中有重要作用。ZEB-1、-2可能通过对E-cadherin的调节发挥生物学作用。

内质网应激前后肝癌细胞中C/EBP同源蛋白及X-盒-结合蛋白-1的表达

目的:观察内质网应激(ERS)标志蛋白X-盒-结合蛋白-1(XBP-1)和C/EBP同源蛋白(CHOP)在正常肝细胞及不同分化程度肝癌细胞中的表达。方法:将培养获得的正常肝细胞LO2、高分化肝癌细胞株Hep G2及低分化肝癌细胞株SMMC-7721细胞分为无水乙醇未处理组(ERS前组)和无水乙醇处理组(ERS组),ERS组的3种细胞分别给予无水乙醇处理获得ERS细胞模型;采用Western Blot方法检测3种细胞ERS前后XBP-1、CHOP表达。结果:在ERS前组中,XBP-1表达从高到低依次为LO2、Hep G2、SMMC-7721;ERS组中,XBP-1在3种细胞中的表达都上调,与ERS前组比较差异有统计学意义(P<0.05),增加量从高到低依次为SMMC-7721、LO2及Hep G2,3种细胞间两两比较差异无统计学意义(P>0.05);ERS前后,Hep G2细胞中均无CHOP表达;ERS前组中,CHOP表达高低依次为SMMC-7721、LO2;ERS组中,CHOP在LO2细胞及SMMC-7721细胞表达均上调,与ERS前组比较差异有统计学意义(P<0.05),而在SMMC-7721细胞中表达上调更明显(与LO2细胞比较,P<0.05)。结论:发生ERS后,LO2、Hep G2及SMMC-7721细胞中XBP-1的表达水平都升高,分化程度低的SMMC-7721细胞中的XBP-1及CHOP的表达升高更明显。

同源盒蛋白Msx1在骨形成蛋白-4成骨效应中的作用

目的:研究同源盒蛋白Msx1在骨形成蛋白-4(bone morphogenetic protein-4,BMP-4)成骨效应中的作用,并探讨Msx1与BMP-4的调控关系。方法:体外培养成纤维细胞C2C12,BMP-4处理C2C12细胞24h和36h后,用携带Msx1基因的腺病毒转染C2C12细胞,过度表达同源盒蛋白Msx1,4d后检测细胞中碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)的活性,单独用BMP-4处理组和BMP-4连同空白腺病毒组为对照组,未用BMP-4处理组为阴性对照组。结果:在BMP-4处理24h后,Msx1腺病毒转染的细胞ALP活性非常低,而BMP-4处理36h后,Msx1腺病毒转染的细胞显示强ALP活性,单独用BMP-4处理和BMP-4连同空白腺病毒处理的细胞同样显示强ALP活性。结论:同源盒蛋白Msx1能抑制BMP-4的成骨效应,且具有一定的时段特性。

微小RNA-128-3p通过调控锌指盒同源结合蛋白1抑制卵巢癌细胞上皮-间充质转化

目的 探讨微小RNA(miR)-128-3p对卵巢癌细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响及其对锌指E盒同源结合蛋白1(ZEB1)的调控机制。方法 通过Real-time PCR技术检测上皮性卵巢癌组织(EOC)及癌旁正常组织(各30例)中miR-128-3p的表达量并观察其是否存在差异;选取2种人卵巢癌细胞系SKOV3和A2780,分别转染miR-128-3p模拟物(miR-128-3p mimic)组和阴性对照模拟物(NC mimic)组,利用Real-time PCR技术检测4组miR-128-3p的表达量并验证干扰效果,用Transwell实验观察4组细胞的迁移及侵袭能力。通过双荧光素酶实验验证miR-128-3p与ZEB1的调控关系,用Western blotting检测过表达miR-128-3p后ZEB1蛋白的表达水平;在SKOV3和A2780细胞系中转染pcDNA-ZEB1使其过表达ZEB1,分为NC mimic组,miR-128-3p mimic组,miR-128-3p mimic+pcDNA-ZEB1组,用Western blotting检测6组细胞中EMT相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)及波形蛋白(vimentin)的表达水平。结果 Real-time PCR结果显示,与癌旁组织相比,miR-128-3p在EOC组织中表达下降(P<0.01);miR-128-3p mimic组miR-128-3p相对表达量高于NC mimic组,而迁移细胞数量、侵袭细胞数量低于NC mimic组(P<0.01)。双荧光素酶实验结果显示,miR-128-3p对ZEB1存在负向调控作用。SKOV3、A2780细胞中miR-128-3p mimic组的ZEB1蛋白相对表达量均低于NC mimic组,而E-cadhein的蛋白相对表达量均高于NC mimic组(P<0.01)。MiR-128-3p mimic+pcDNA-ZEB1组E-cadhein的蛋白相对表达量低于miR-128-3p mimic组(P<0.01)。SKOV3、A2780细胞中miR-128-3p mimic组vimentin的蛋白相对表达量低于NC mimic组,miR-128-3p mimic+pcDNA-ZEB1组vimentin的蛋白相对表达量高于miR-128-3p mimic组(P<0.01)。结论 MiR-128-3p在上皮性卵巢癌组织中表达下降,其原因可能是通过调控ZEB1影响EMT相关蛋白表达而参与卵巢癌细胞EMT过程。