胰升糖素样肽-1对胰腺-十二指肠同源异型盒基因-1表达的调节

目的胰升糖素样肽-1(glucagons-1ike peptide l,GLP-1)最重要的生理作用是葡萄糖依赖的胰岛素刺激作用,但其分子基础尚不清楚。文中研究不同浓度GLP-1对大鼠胰岛细胞胰腺-十二指肠同源异型盒基因-1(pancreatic-duodenal homeobox-1,PDX-1)表达的调节作用,探讨GLP-1对胰岛素基因转录的调节机制和临床意义。方法不同刺激浓度GLP-1(0、1、10、100、1000 nmol/L)与葡萄糖浓度分别为2.2、5.5、11.1 mmol/L的RPMI1640营养液共培养24 h后,提取胰岛细胞总RNA。运用RT-PCR技术检测PDX-1基因表达的变化。结果葡萄糖浓度为2.2和5.5 mmol/L时,随GLP-1浓度升高,PDX-1基因表达量呈钟型方式升高;葡萄糖浓度为11.1 mmol/L时,随GLP-1浓度升高,PDX-1基因表达量呈浓度依赖性升高。结论 GLP-1以葡萄糖依赖和浓度依赖方式促进PDX-1基因的表达。

基于Cre-LoxP系统的高尔基体蛋白73胰腺特异性敲除小鼠模型建立与鉴定

目的建立并鉴定高尔基体蛋白73(GP73)胰腺特异性敲除小鼠模型,为后续探究胰腺GP73的生理及病理功能提供基础。方法采用受精卵同源重组的方式,将两个LoxP位点分别插入GP73基因4号外显子两端,建立GP73^(flox/+)小鼠。将GP73^(flox)/+小鼠与Pdx1^(Cre+)小鼠杂交获得GP73^(flox/+)Pdx1^(Cre+)小鼠,经GP73^(flox/+)小鼠与GP73^(flox/+)Pdx1^(Cre+)小鼠杂交获得的GP73^(flox/flox)Pdx1^(Cre+)小鼠,即为所需模型小鼠。通过PCR鉴定flox及Cre基因型;采用实时荧光定量PCR(qPCR)及Western印迹分别从mRNA水平和蛋白水平鉴定胰腺GP73敲除效果及组织特异性;通过小鼠杂交后代的基因型统计分析,判断出生情况是否符合孟德尔遗传定律;通过计算小鼠各组织重量与体重的比例分析小鼠的生长发育情况。结果通过小鼠杂交和PCR鉴定,成功获得GP73^(flox/flox)Pdx1^(Cre+)小鼠。与对照小鼠相比,模型小鼠胰腺GP73的mRNA水平和蛋白水平显著降低,而其他组织无明显差异,表明模型小鼠建立成功。此外GP73^(flox/flox)Pdx1^(Cre+)小鼠能正常出生,无胚胎致死现象,各组织的生长发育与对照小鼠无显著差异,可用于后续研究。结论成功建立GP73胰腺特异性敲除小鼠模型,为胰腺GP73功能研究提供了重要实验材料。