成年大鼠胰岛的分离纯化及体外培养

目的：探讨大鼠胰岛细胞分离纯化及体外培养方法。方法：胆总管内逆行灌注胶原酶V，分次短时间消化胰腺，Ficoll 400间断密度梯度法纯化胰岛，所得胰岛进行培养鉴定。结果：大鼠胰腺消化后胰岛产量为1050±59个胰岛／胰腺，Ficoll 400纯化后产量为498±60个胰岛／胰腺，纯度可达70％，细胞存活率在93％以上，胰岛素释放试验显示高糖刺激后胰岛素释放量为低糖时的1．91倍，表明胰岛细胞功能良好。培养第13天，约有30％～40％胰岛存活，并具有完整的形态结构，胰岛素分泌量约降为最高值的30％。结论：该方法所得胰岛产量、纯度较高，功能良好，是一种较理想的胰岛细胞分离方法。普通培养条件适合胰岛的短期培养。

大鼠胰岛分离纯化实验研究

目的介绍一种大鼠胰岛分离纯化方法。方法SD大鼠和Wistar大鼠共10只,以0.05%Ⅴ型胶原酶胆管灌注,经消化后用葡聚糖(dextran)不连续密度梯度法纯化胰岛。DTZ和AO/PI染色检测纯度及活性。结果胰岛收获量为(930±168)个,Ⅴ型胶原酶灌注及不连续密度梯度法可获得纯度高、活性好胰岛。结论以0.05%的胶原酶胆管灌注消化的方法可得纯度高、活性良好的胰岛。

大鼠胰岛细胞原代培养方法的改良

目的探讨一种简单易行的大鼠胰岛细胞培养方法,获取尽可能多的高质量胰岛,并寻找进行体外实验研究的最佳时间和条件。方法运用胶原酶原位灌注法分离胰腺,Ficoll400纯化胰岛细胞,双硫腙(DTZ)染色鉴定胰岛,运用倒置显微镜观察细胞生活状态,放免法检测胰岛素分泌考察胰岛功能。结果每只大鼠可分离438±27个胰岛/胰腺,细胞存活率为92.3±2.3%,GSIS实验中胰岛素释放指数SI为3.25±0.26。结论本分离纯化方法可获得数量多,质量高的胰岛细胞,为原代胰岛细胞的体外研究提供实验条件。

大鼠胰岛细胞原代培养方法比较研究

目的:比较减碎消化法和原位灌注消化法在大鼠胰岛细胞原代培养中的优缺点,探讨一种简单易行的大鼠胰岛细胞培养方法。方法:雄性SD大鼠30只随机分成减碎组(CC组,n=15),胰腺剪为小组织块后,Ⅴ型胶原酶逐级消化分离;原位灌注组(YY组,n=15),采用胆总管逆行灌注Ⅴ型胶原酶分离胰岛。双硫腙(DTZ)染色检测胰岛纯度,葡萄糖刺激胰岛素释放试验检测胰岛功能。结果:2组获得的胰岛对于葡萄糖刺激均具有良好的分泌活性(P<0.01);YY组比CC组获得的胰岛数量多(P<0.01),形态较好,等量胰岛的胰岛素释放量亦多(P<0.05)。结论:胆总管原位灌注Ⅴ型胶原酶消化可以获取数量多,活性和纯度较好的胰岛。