热量限制对db/db小鼠胰岛β细胞退分化的影响

目的 研究热量限制(CR)在改善db/db小鼠胰岛β细胞退分化中的作用。方法 选取3周龄的db/db小鼠,随机分为自由进食(db-FD)组和CR(db-CR)组,相同周龄的雄性C57BL/6J小鼠作为正常对照(C-FD)组。C-FD和db-FD组自由进食,db-CR组每日进食量为C-FD组的60%。饮食干预6 w,每周测小鼠体质量、空腹血糖。干预结束后,检测糖耐量、胰岛素耐量、空腹胰岛素水平、胰腺胰岛素含量;免疫组化检测胰岛结构和形态;胰岛RNA-seq分析寻找热量限制后表达改变的胰岛β细胞功能相关基因;免疫荧光染色检测胰岛β细胞特异转录因子和退分化相关蛋白的表达。结果 饮食干预期间db-CR组体质量(2~6 w)和空腹血糖(4~6 w)较db-FD组明显减轻(P<0.05)。干预结束时,与db-FD组相比,db-CR组糖耐量和胰岛素耐量明显改善,胰腺胰岛素含量明显提高(P<0.05),胰岛结构完整,胰岛素淡染区减少。RNA-seq分析和免疫荧光染色显示,db-CR组胰岛β细胞特异转录因子[胰腺十二指肠同源蛋白(Pdx)1,NK6同源框1(Nkx6.1)]表达升高,退分化相关因子乙醛脱氢酶家族1成员(Aldh1)A3表达减少,叉头盒(FOX)O1表达升高。结论 CR可通过减少β细胞退分化改善db/db小鼠胰岛β细胞功能。

糖调节受损模型大鼠胰岛β-细胞功能、胰岛素抵抗水平及胰腺组织中AMPK-mTOR信号通路相关蛋白表达水平变化

目的:观察糖调节受损大鼠模型胰岛β-细胞功能、胰岛素抵抗水平及胰腺组织中AMPK-mTOR信号通路相关蛋白表达水平变化。方法:选取82只雄性Wistar大鼠,采用高脂饲料饲养及腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)建立糖调节受损(IGR)模型组,普通饲料饲养建立对照组,各组选6只检测血清样本中胰岛素、血糖、2小时后血糖含量,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);利用Western-blot方法检测p-AMPK、p-mTOR、ULK1、LC3、Beclin-1。结果:与对照组比较,模型组大鼠血清FBG、FINS、2 h后血糖、HOMA-IR均升高,大鼠胰腺组织p-AMPK、p-mTOR、ULK1、LC3、Beclin-1表达均升高,差异有统计学意义(P < 0.05)。结论:IGR模型大鼠胰岛素抵抗明显、胰岛β细胞功能降低,AMPK-mTOR信号通路相关蛋白表达升高。

METTL3在同型半胱氨酸诱导小鼠胰岛β细胞自噬中的作用

背景:高同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)血症与胰岛β细胞功能密切相关,但其具体分子机制尚不完全明确。目的:探讨METTL3在Hcy诱导小鼠胰岛β细胞自噬中的作用。方法:取第3,4代小鼠胰岛β细胞进行实验。①细胞模型建立和分组:对照组细胞不加入Hcy,Hcy组细胞加入浓度为100µmol/L Hcy干预48h;②按Lipofectamine^(TM) 2000说明书将过表达质粒Ad-METTL3及si-METTL3转染小鼠胰岛β细胞,设计3种不同干扰片段,PCR验证、筛选出干扰效率最好的干扰片段;③转染后实验分组:对照组、Hcy组、Ad-NC(阴性对照)+Hcy组、Ad-METTL3+Hcy组、si-NC(阴性对照)+Hcy组和si-METTL3+Hcy组;④采用qRT-PCR及Western blot检测细胞中METTL3及细胞自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、p62的表达;ELISA法测定胰岛素水平来评价胰岛β细胞胰岛素分泌能力;分别过表达和干扰METTL3后检测细胞自噬相关蛋白及胰岛素水平。结果与结论:①与对照组相比,Hcy组自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ的表达水平升高(P<0.05),而p62表达明显降低(P<0.05),胰岛素分泌能力明显下降(P<0.05);②与对照组相比,Hcy组中METTL3蛋白及mRNA水平表达均降低(P<0.05);③胰岛β细胞中沉默METTL3后,Hcy进一步上调了细胞中LC3Ⅱ/Ⅰ的表达(P<0.05),而p62表达显著下降(P<0.05),细胞中胰岛素水平增加(P<0.05);过表达METTL3后,Hcy则使LC3Ⅱ/Ⅰ表达显著降低且p62表达则增高(P<0.05);④结论:METTL3参与了Hcy诱导的胰岛β细胞自噬调控,对胰岛素的分泌发挥着调控作用。

人诱导多能干细胞来源功能性胰岛β细胞的体外定向分化方法的建立

1型糖尿病是由胰岛β细胞功能受损、胰岛素分泌不足所致,目前,主要通过外源性胰岛素补充来治疗,但外源性胰岛素无法精准调控血糖,严重低血糖可危及生命。胰岛移植是一种替代疗法,但面临器官供体不足和异种来源胰岛β细胞存在人畜共患病交叉感染风险的问题。因此,获得足量且安全的胰岛β细胞是1型糖尿病细胞治疗面临的难题。本研究旨在通过人诱导多能干细胞(human induced pluripotent stem cells,hiPSCs)在体外向胰岛β细胞分化,提供一种潜在的1型糖尿病治疗新策略。为实现这一目标,我们采用了结合2D和3D培养系统的分化策略,模拟胰岛β细胞的体内发育环境,并使用多种生长因子调节在胰腺发育和β细胞分化中发挥重要作用的关键信号包括Notch信号通路(Notch signaling pathway)、Wnt信号通路(Wnt signaling pathway)、TGF-β/Smad信号通路(TGF-β/Smad signaling pathway)等,在体外将hiPSC定向诱导分化至胰岛β细胞。结果显示,在2D、3D结合的培养条件下,分化过程中定型内胚层细胞,胰腺祖细胞,胰腺内分泌细胞及胰岛β细胞阶段的特异性基因的表达显著提高(P<0.05),并在胰岛素含量及葡萄糖刺激后表现出显著增强的胰岛素分泌能力(P<0.05)。总之,本研究成功建立了一种从hiPSC到功能性胰岛β细胞的分化策略,为1型糖尿病提供了一种新的细胞治疗途径。这种方法不仅为研究胰岛β细胞的发育生物学提供了新的工具,也为临床应用提供了一种潜在的胰岛β细胞来源,有望解决现有治疗方法的局限性。

轻断食对2型糖尿病模型大鼠胰岛素抵抗及胰岛β细胞功能的作用及其机制研究

目的探讨轻断食对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗以及胰岛β细胞AMPK-mTOR-ULK1自噬信号通路的影响及其可能的机制。方法46只雄性Wistar大鼠中随机选取6只作为正常对照组(给予普通饲料饲养4 w),其余40只大鼠建立2型糖尿病模型(给予高脂饲料饲养,每5天腹腔注射1次STZ 25 mg/kg体重,共4 w)。40只2型糖尿病大鼠模型建立成功后,根据干预的不同分为模型组、模型+轻断食组、模型+运动干预组、模型+药物干预组、模型+运动+轻断食组。所有干预组大鼠同时每5天腹腔注射1次小剂量STZ 25 mg/kg体重,正常对照组同时每5天腹腔注射1次生理盐水0.5 mL/100 g体重。干预结束行简易糖耐量试验(OGTT),检测各组大鼠空腹血糖、空腹血清胰岛素水平,计算出胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛β细胞功能指数(HOMA-β),评价干预效果。Western-blot法检测干预前、后大鼠胰腺组织中AMPK-mTOR-ULK1信号通路及自噬相关蛋白腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化-AMPK(p-AMPK)、哺乳动物类雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化-mTOR(p-mTOR)、UNC-51样激酶1(ULK1)、微管相关蛋白轻链3(LC3)、卷曲螺旋状Myosin样Bcl-2相互作用蛋白-1(Beclin-1)的表达水平。结果与模型组大鼠比较,模型+轻断食组、模型+运动+轻断食组大鼠的空腹血糖、空腹胰岛素及服糖后2 h血糖水平、HOMA-IR水平显著降低(P均<0.05);大鼠胰腺组织Beclin-1、p-AMPK、ULK1表达均显著降低,p-mTOR表达明显升高(P<0.05)。与模型组大鼠比较,模型+运动+轻断食组的HOMA-β水平显著升高(P<0.05),大鼠胰腺组织中的LC3表达显著降低(P<0.05)。结论轻断食干预对2型糖尿病大鼠具有改善胰岛素抵抗、提升胰岛β细胞功能的作用,并影响细胞自噬AMPK-mTOR-ULK1信号通路。

1,8-桉叶油素对2型糖尿病胰岛β细胞铁死亡的干预作用及机制

目的 研究1,8-桉叶油素对2型糖尿病胰岛β细胞铁死亡的干预作用及机制。方法 使用高糖作用于小鼠胰岛β细胞以建立细胞铁死亡模型,考察低、高剂量1,8-桉叶油素(0.25、0.5μmol/L)对胰岛β细胞中Fe2+水平的影响,并考察1,8-桉叶油素(0.5μmol/L)联合铁死亡诱导剂Erastin(20μmol/L)和抑制剂Ferrostatin-1(20μmol/L)后对胰岛β细胞中谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、环氧合酶2(COX2)蛋白表达的影响。采用高脂高糖饲料饲养联合腹腔注射链脲佐菌素构建2型糖尿病小鼠模型,考察低、高剂量1,8-桉叶油素(50、200 mg/kg)对模型小鼠胰腺组织病理形态、铁含量以及GPX4、COX2蛋白表达的影响。结果 细胞实验结果显示,与模型组比较,经1,8-桉叶油素干预后,胰岛β细胞中Fe2+水平显著降低(P<0.05);GPX4蛋白表达水平显著升高(P<0.05),COX2蛋白表达水平显著降低(P<0.05),且联合Ferrostatin-1后上述两种蛋白表达趋势相同,而联合Erastin后差异无统计学意义。动物实验结果显示,与模型组比较,经1,8-桉叶油素干预后,小鼠胰岛结构恢复完整,形态有所改善;胰腺组织中铁含量和COX2蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),GPX4蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论 1,8-桉叶油素对2型糖尿病胰岛β细胞损伤具有明显的改善作用,其作用机制可能与降低细胞内铁沉积以及调控铁死亡相关蛋白有关。

二甲双胍对消化道恶性肿瘤合并糖耐量异常患者胰岛β细胞功能的影响

目的分析二甲双胍对恶性消化道肿瘤合并糖耐量异常患者胰岛β细胞功能的影响。方法选取2019年6月至2023年6月在联勤保障部队第908医院就诊的120例恶性消化道肿瘤合并糖耐量异常患者作为研究对象,按照随机数字表法将其分为二甲双胍治疗组及治疗对照组,各60例,另选取同期在联勤保障部队第908医院体检的60例健康人群作为健康组。比较3组空腹血糖(GLU0)、空腹乳酸(LA0)、稳态模式评估法胰岛素分泌指数(HOMA-β)、糖负荷30 min后胰岛素增量和血糖增量(ΔINS30/ΔGLU30)比值、糖负荷30 min后乳酸(LA30)、糖负荷30 min后乳酸增量和血糖增量(ΔLA30/ΔGLU30)比值、血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平。结果治疗对照组GLU0、LA0、TNF-α、IL-6水平及ΔLA30/ΔGLU30比值高于健康组和二甲双胍治疗组,差异均有统计学意义(P<0.05)。二甲双胍治疗组HOMA-β、ΔINS30/ΔGLU30比值低于健康组,而高于治疗对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论二甲双胍可有效减轻炎症反应,改善恶性消化道肿瘤合并糖耐量异常患者胰岛β细胞功能不全和糖代谢障碍。

胰岛β细胞去分化与2型糖尿病

最新的流行病学数据显示,截止2018年,我国糖尿病患病率已上升至12.4%,在非传染性疾病中仅次于心血管疾病和肿瘤,是严重威胁我国人民健康的常见病、多发病[1],其中绝大多数为2型糖尿病(type 2 diabetes,T2D)。胰岛β细胞数量减少与胰岛素分泌功能障碍是T2D的病理生理学基础之一。以往认为,β细胞减少与细胞凋亡相关,近十年的研究发现β细胞去分化是T2D进程中β细胞衰竭的主要原因。本文就β细胞去分化的特征、原因和机制等最新研究进展做一综述,为更深入地了解T2D的发病机制和干预方法提供参考。

Circ_ZFYVE1对胰岛β细胞周期和自噬的影响

目的:观察Circ_ZFYVE1(cZFYVE1)对小鼠胰岛β细胞(MIN6)周期和自噬的影响。方法:Sanger测序分析验证cZFYVE1的环化位点;MIN6细胞分为正常组(NC,含葡萄糖浓度5.5 mmol/L)、高糖1组(HG1,含葡萄糖浓度15 mmol/L)和高糖2组(HG2,含葡萄糖浓度25 mmol/L)进行培养48 h,qRT-PCR法检测NC组、HG1组和HG2组cZFYVE1表达水平;慢病毒转染实验构建空载体组(sh-NC)、稳定过表达cZFYVE1组(circ-ZFYVE1)和稳定敲低cZFYVE1组(si-cZFYVE1)。qRT-PCR法检测转染后各组MIN6细胞中cZFYVE1基因的表达量;流式细胞术检测各组细胞周期百分率;透射电子显微镜观察各组细胞自噬小体和细胞器的变化;免疫荧光法检测各组细胞自噬相关蛋白Beclin-1荧光强度;Western Blot法检测各组细胞周期调节蛋白Cyclin D1以及自噬相关蛋白Beclin-1、P62和LC3-Ⅱ的表达水平。结果:Sanger测序证实cZFYVE1存在环化剪接位点。qRT-PCR结果显示,与NC组相比,HG1组和HG2组cZFYVE1表达水平降低,HG2组cZFYVE1水平较HG1组表达降低(P<0.01)。与sh-NC组比较,circ-ZFYVE1组cZFYVE1表达升高,si-cZFYVE1组cZFYVE1表达降低(P<0.01)。流式细胞术结果显示,与sh-NC组比较,circ-ZFYVE1组G1期细胞百分率降低,S期细胞百分率升高,G2期细胞百分率升高,si-cZFYVE1组G1期细胞百分率升高,S期细胞百分率降低,G2期细胞百分率降低(P<0.01)。透射电镜结果显示,与sh-NC组比较,si-cZFYVE1组自噬体减少。免疫荧光结果显示,与sh-NC组比较,circ-ZFYVE1组自噬相关蛋白Beclin-1免疫荧光强度升高,si-cZFYVE1组Beclin-1免疫荧光强度降低(P<0.01)。Western blot结果显示,与sh-NC组比较,circ-ZFYVE1组细胞周期调节蛋白Cyclin D1表达水平升高,自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ表达水平升高,P62表达水平降低,si-cZFYVE1组Cyclin D1蛋白表达水平降低,Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达水平降低,P62蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:Circ_ZFYVE1可能促进MIN6胰岛β细胞自噬并影响细胞周期。

黄连大黄药对调控ROS/NF-κB/GSDMD信号通路对2型糖尿病大鼠胰岛β细胞焦亡的影响

目的基于活性氧(reactive oxygen species,ROS)/核转录因子κB(nuclear transcription factor-κB,NF-κB)/消皮素D(gasdermin D,GSDMD)焦亡信号通路探讨黄连大黄药对发挥2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)胰岛β细胞保护作用的分子机制。方法选取自发性T2DM大鼠—Goto-Kakizaki(GK)大鼠构建动物模型,24只符合成模标准的GK大鼠随机分为模型组、二甲双胍组(0.1 g·kg^(-1)·d^(-1))、黄连大黄高剂量组(4.72 g·kg^(-1)·d^(-1))及低剂量组(2.36 g·kg^(-1)·d^(-1)),并随机选取6只正常Wistar大鼠设为正常组,连续灌胃干预8周后采用免疫荧光法检测大鼠胰腺组织胰岛素(insulin,INS)阳性表达,RT-PCR法检测细胞增殖相关细胞周期蛋白D1(cyclin D1,CCND1)、髓细胞瘤病毒癌基因(cellular-myelocytomatosis viral oncogene,c-Myc)mRNA表达,TUNEL染色检测胰岛细胞死亡,流式细胞术检测ROS水平,Western blot法检测NF-κB p65、GSDMD及消皮素D N端片段(gasdermin D-N,GSDMD-N)蛋白的表达,ELISA法检测白介素1β(interleukin 1β,IL^(-1)β)水平。结果与正常组比较,模型组大鼠胰腺组织INS平均光密度值显著降低,CCND1、c-Myc mRNA表达显著下调,TUNEL阳性率、ROS水平和NF-κB p65、GSDMD-N蛋白表达以及IL-1β水平均显著升高(P均<0.01);与模型组比较,黄连大黄低剂量组INS平均光密度值有效升高,CCND1、c-Myc mRNA表达有效上调,TUNEL阳性率、ROS水平以及NF-κB p65、GSDMD-N蛋白表达、IL-1β水平均明显降低(P<0.01,P<0.05),黄连大黄高剂量组仅c-Myc mRNA表达有效上调,NF-κB p65蛋白表达明显降低(P均<0.05)。结论黄连大黄药对可能通过ROS/NF-κB/GSDMD信号通路抑制细胞焦亡,促进增殖进而起到保护T2DM大鼠胰岛β细胞的作用。

血液灌流联合序贯血液透析滤过对糖尿病肾病患者胰岛β细胞功能、营养状态及炎症反应的影响

目的探讨血液灌流联合序贯血液透析滤过对糖尿病肾病(DN)患者胰岛β细胞功能、营养状况及炎症反应的影响。方法选择2020年2月至2023年2月南阳市中心医院收治的100例DN患者为研究对象,按照随机数字表法将患者分为对照组和观察组,每组50例。对照组患者采用序贯血液透析滤过治疗,观察组患者采用序贯血液透析滤过联合血液灌流治疗。分别于治疗前、治疗6个月后,测量2组患者的体质量和身高,计算体质量指数(BMI);应用皮脂厚度计测量肱三头肌皮皱厚度(TSF);采用主观综合性营养评分(SCA)评估患者营养状况;抽取2组患者空腹静脉血,采用放射免疫分析法测定空腹胰岛素(FINS)、空腹血糖(FPG)水平,计算稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和稳态模型胰岛素分泌指数(HOMA-β);应用全自动生化分析仪测定血胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平;酶联免疫吸附法测定血清C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平。结果治疗前,对照组与观察组患者的HOMA-β、FINS、HOMA-IR比较差异无统计学意义(P>0.05)。2组患者治疗后的FINS、HOMA-IR显著低于治疗前,HOMA-β显著高于治疗前(P<0.05)。治疗后,观察组患者的FINS、HOMA-IR显著低于对照组,HOMA-β显著高于对照组(P<0.05)。治疗前,对照组与观察组患者的BMI、TSF、SGA比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,2组患者的BMI、TSF、SGA显著高于治疗前,且观察组患者的BMI、TSF、SGA显著高于对照组(P<0.05)。治疗前,对照组与观察组患者的TC、TG、LDL-C、HDL-C水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。2组患者治疗后的TC、TG、LDL-C水平显著低于治疗前,HDL-C水平显著高于治疗前(P<0.05)。治疗后,观察组患者的TC、TG、LDL-C水平显著低于对照组,HDL-C水平显著高于对照组(P<0.05)。治疗前,对照组与观察组患者的血清CRP、TNF-α、IL-6水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,2组患者的血清CRP、TNF-α、IL-6水平显著低于治疗前,且观察组患者的血清CRP、TNF-α、IL-6水平显著低于对照组(P<0.05)。结论序贯血液透析滤过联合血液灌流可显著改善DN患者胰岛β细胞功能、营养状况和脂代谢水平,抑制炎症反应。

α-葡萄糖苷酶低表达对胰岛β细胞形态、增殖能力、炎症及氧化应激反应的影响

目的观察α-葡萄糖苷酶(GAA)低表达对胰岛β细胞形态、增殖能力、炎症反应及氧化应激反应的影响,以探讨GAA在糖尿病发病机制中的潜在作用。方法分别用siRNA1、2、3、4序列干扰胰岛素瘤胰岛β细胞(βTC6细胞)中GAA的表达,结果siRNA4序列的干扰效果最好,将其作为后续实验的干扰序列。将βTC6细胞随机分为siRNA组、阴性对照组(NC组)、空白对照组(Con组)。siRNA组转染siRNA4序列,以降低GAA的表达;阴性对照组转染siRNANC序列;Con组不进行任何处理。在细胞培养24、48、72和96 h,用CCK8法观察各组细胞增殖能力;培养48 h,使用倒置显微镜观察各组细胞数目及形态,采用Western blotting法检测细胞中炎症因子IL-6和IL-1β蛋白,免疫荧光法检测细胞中活性氧(ROS)。结果与Con组和NC组相比,siRNA组在显微镜下细胞数目增加,细胞间隙变小,培养24、48、72、96 h的细胞OD值均升高,培养48 h的细胞IL-6、ROS降低(P均<0.01)。Con组与NC组上述指标比较,P均>0.05。结论GAA低表达可使胰岛β细胞形态改变,增殖能力提高,炎症反应及氧化应激反应减弱;GAA可能通过使胰岛β细胞形态改变、增强炎症反应及氧化应激反应而参与糖尿病的发病过程。

大柴胡汤加减方治疗2型糖尿病肝胃郁热证对胰岛β细胞功能的影响分析

目的观察在2型糖尿病肝胃郁热证中应用大柴胡汤加减方治疗对患者血糖水平和胰岛β细胞功能的影响。方法选取2022年1月至2023年1月期间宿迁市中医院收治的72例2型糖尿病肝胃郁热证患者,依据随机数字表法分为常规组和试验组,各36例。常规组开展常规短期胰岛素强化治疗,试验组在常规治疗基础上予以大柴胡汤加减方治疗,两组患者均以14 d为1个治疗周期,均开展2个周期的治疗。比较两组患者治疗后临床疗效,治疗前后中医证候积分、血糖水平、胰岛β细胞功能,以及治疗期间低血糖发生情况。结果试验组患者临床疗效优于常规组,治疗总有效率高于常规组(均P<0.05);与治疗前比,治疗后两组患者中医证候积分、餐后2h血糖、空腹血糖、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)均降低,且试验组均低于常规组(均P<0.05);与治疗前比,治疗后两组患者胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)水平均升高,且试验组高于常规组(均P<0.05);试验组患者低血糖发生率低于常规组(P<0.05)。结论在常规胰岛素强化治疗的基础上联合大柴胡汤加减方治疗肝胃郁热证2型糖尿病能够改善患者胰岛功能,降低患者血糖水平,改善患者临床症状,提高治疗效果,且能够预防低血糖的发生。

胰岛β细胞功能及同型半胱氨酸、尿微量白蛋白/肌酐比值对2型糖尿病患者心率变异性的影响研究

目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者心率变异性(HRV)与胰岛β细胞功能及同型半胱氨酸(Hcy)、尿微量白蛋白/肌酐比值(ACR)的相关性。方法选择上海市第六人民医院收治的300例T2DM患者作为研究对象,男性156例,女性144例;年龄(55.54±8.90)岁,年龄范围为32~78岁。根据24 h正常窦性心搏RR间期标准差(SDNN)将患者分为HRV正常组(100 ms≤SDNN≤180 ms,n=163)及HRV下降组(SDNN<100 ms,n=137)。收集HRV正常组和HRV下降组患者的一般资料、生化指标及HRV指标,分析胰岛β细胞功能及Hcy、ACR与T2DM患者HRV下降的相关性,采用Logistic回归模型评估T2DM患者HRV下降的危险因素,绘制受试者工作曲线分析预测指标对T2DM患者HRV下降的预测价值。结果与HRV正常组比较,HRV下降组年龄较大,病程较长,空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、Hcy、空腹C肽(C_(0))、ACR水平较高,餐后2 h C肽(C_(2))、C_(2)/C_(0)水平较低,SDNN、5 min正常RR间期均值的标准差(SDANN)、相邻正常RR间期相差超过50 ms的心搏数占总窦性心搏数的百分比(pNN50)、相邻RR间期之差的均方根(rMSSD)、低频功率(LF)、高频功率(HF)水平较低,差异均有统计学意义(P<0.05)。经Pearson相关系数分析显示,C_(2)、C_(2)/C_(0)与HRV指标之间均呈显著性正相关(P<0.05),C_(0)、Hcy、ACR与HRV指标之间均呈显著性负相关(P<0.05)。经Logistic回归模型分析显示,病程较长、FPG升高、Hcy升高、C_(0)升高、C_(2)降低、C_(2)/C_(0)降低及ACR升高是T2DM患者HRV下降的独立危险因素(P<0.05)。病程、FPG、Hcy、C_(0)、C_(2)、C_(2)/C_(0)、ACR及各指标联合对预测T2DM患者HRV下降均具备一定价值,且联合预测价值更高。结论病程、FPG、Hcy、C_(0)、C_(2)、C_(2)/C_(0)及ACR是T2DM患者HRV下降的独立危险因素,均具备一定预测价值,且联合预测价值更高。

大柴胡汤加减结合常规西药治疗2型糖尿病的疗效及对临床症状积分、胰岛β细胞功能指标的影响

目的 探讨大柴胡汤加减结合常规西药治疗2型糖尿病的疗效及对临床症状积分、胰岛β细胞功能指标的影响。方法 选择2022年9月—2023年9月辽阳市中心医院收治的98例2型糖尿病患者为研究对象,以随机数表法分为两组,各49例。对照组用常规西药治疗,观察组用大柴胡汤加减结合常规西药治疗,比较两组的疗效及临床症状积分、胰岛β细胞功能指标。结果 观察组有效率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组治疗12周的临床症状积分低于对照组,差异有统计学意义(P均<0.05);观察组治疗4周、治疗12周胰岛β细胞功能指数高于对照组,差异有统计学意义(P均<0.05)。不良反应发生率组间比较,差异无统计学意义(χ^(2)=0.178,P=0.674)。结论 大柴胡汤加减结合常规西药治疗2型糖尿病的疗效较高,可降低临床症状积分,改善胰岛β细胞功能指标,且具有较高的安全性。

基线胰岛β细胞功能与短期胰岛素治疗后2型糖尿病疾病缓解的关系

目的分析基线胰岛β细胞功能与短期胰岛素治疗后2型糖尿病疾病缓解的关系。方法选取2021年1月至2023年12月于浙江省丽水市人民医院建档并行短期胰岛素治疗的2型糖尿病患者150例,收集基线临床指标、胰岛素抵抗稳态模型(homeostasis model assessment of insulin resistance,HOMA-IR)、胰岛β细胞功能指数(homeostasis model assessment-β,HOMA-β)、胰岛素分泌敏感性指数-2(insulin secretion sensitivity index-2,ISSI-2)以及修正的胰岛β细胞功能指数(modifiedβ-cell function index,MBCI),按照停药后观察期内的糖尿病缓解情况分为缓解组(52例)与未缓解组(93例)。比较缓解组与未缓解组临床资料,采用多因素二元Logistic回归模型分析基线β细胞功能与短期胰岛素治疗后2型糖尿病疾病缓解的关系。结果将不符合要求的5例患者剔除后最终纳入研究患者145例。未缓解组年龄中位数50.09岁,缓解组40.83岁,基线空腹血糖水平(6.4±1.4)mmol/L、HbA1c水平(6.9±0.8)%比缓解组的(5.3±1.2)mmol/L、(6.1±0.5)%更高,HOMA-β中位数37.80、ISSI-2中位数149.24以及MBCI中位数22.94较缓解组(50.14、278.21、32.80)低,病程较缓解组长,差异有统计学意义(t/Z=-10.301、-4.974、-6.884、27.037、30.702、13.914、-4.803,P<0.05)。多因素分析结果发现,HOMA-β、ISSI-2以及MBCI均为疾病缓解的保护因素(OR=0.903、0.871、0.857,P<0.05)。结论基线胰岛β细胞功能是短期胰岛素治疗后2型糖尿病疾病缓解的主要病理生理学因素,基线胰岛β细胞功能越好疾病得到缓解的可能性也越大。

Eicosapentaenoic acid代谢产物促进胰岛α细胞转分化为胰岛β细胞的作用研究

目的 探讨eicosapentaenoic acid(EPA)代谢产物促进胰岛α细胞向β细胞转分化的作用。方法 雄性C57BL/6J小鼠连续5 d腹腔注射60 mg/kg链脲佐霉素(streptozocin, STZ)构建1型糖尿病(T1DM)小鼠模型,2周后随机分为模型组、97%EPA饮食干预组、75%鱼油(50%EPA+25%DHA)饮食干预组,每周检测随机血糖;模型到期后,通过免疫荧光染色观察小鼠胰腺中胰岛β细胞再生情况。提取tdTomato荧光蛋白特意标记α细胞的小鼠(GCGicre小鼠与Rosa26tdTomato小鼠杂交获得)胰岛,加入1 mmol·L^(-1)STZ诱导β细胞凋亡,添加EPA代谢产物,培养48 h后,利用荧光染色观察胰岛素和tdTomato荧光的表达。在小鼠胰岛α细胞系αTC1培养基中添加EPA代谢产物,48 h后,利用荧光染色观察胰岛素和胰高血糖素的表达。结果 EPA和鱼油饮食干预均可明显降低T1DM小鼠的血糖水平,改善葡萄糖稳态,且胰腺中出现胰岛素和胰高血糖素共定位细胞;EPA代谢产物引起已发生β细胞凋亡的小鼠胰岛中发生tdTomato荧光蛋白和胰岛素共定位;EPA代谢产物可促进胰岛αTC1细胞系细胞分泌胰岛素。结论 EPA及其代谢产物可通过促进胰岛α细胞转分化为β细胞,进而增加胰岛素的分泌,缓解T1DM小鼠的高血糖症状。

基于网络药理学和实验验证的三果汤调节胰岛β细胞功能机制研究

目的运用网络药理学及动物实验验证探究三果汤(余甘子、毛诃子、诃子组成)调节胰岛β功能治疗糖尿病的活性成分及潜在分子机制。方法采用中药系统药理分析平台(TCMSP)结合文献检索、SwissADME获取三果汤活性成分及预测靶点;通过Drugbank、Genecards、OMIM、TTD数据库获取糖尿病主要靶点;利用韦恩图(Venn)分析药物和疾病共有基因,采用STRING数据库及CytoScape 3.8.0软件构建“三果汤-成分-靶点-基因-疾病”共同靶点的蛋白相互作用(PPI)网络,并通过ClueGO、CytoHubba可视化分析得到潜在作用基因靶点及其富集通路。将Wistar雄性大鼠随机分为正常组、模型组及三果汤低、中、高(0.43、0.86、1.72 g·kg^(-1))剂量组,采用链脲佐菌素(STZ)腹腔注射复制糖尿病模型及相应药物干预。进行胰岛功能指数测算、病理切片染色及PCR检测。结果三果汤共有23种活性成分,预测靶点434个,疾病基因1200个,维恩(Venn)分析三果汤与糖尿病共有基因146个;三果汤治疗糖尿病主要与调节胰岛素分泌、葡萄糖跨膜运输、蛋白激酶的激活、促进血管生长以及MAPK联级反应等有关,涉及蛋白激酶Bα(AKT1)、甘油醛-3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、血管内皮生长因子A(VEGFA)、丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)、前列腺素内过氧化物合酶(PTGS2)、信号转导与转录活化因子3(STAT3)、Toll样受体4(TLR4)7个核心靶点。动物实验验证结果显示,三果汤能增加HOMA-β指数(P<0.01),促进胰岛体积、β细胞恢复,减少α细胞数量;能明显上调大鼠胰腺组织中AKT1、GAPDH基因的表达(P<0.001),下调VEGFA、MAPK1、PTGS2、STAT3、TLR4基因的表达(P<0.001,P<0.0001),验证了网络药理学结果的部分预测。结论三果汤能多靶点、多通路发挥治疗糖尿病的作用。证实其通过调节AKT1、GAPDH、VEGFA、MAPK1、PTGS2、STAT3、TLR4等7个关键靶点基因,从而调节胰岛β细胞功能,达到治疗糖尿病的效果。

补肾健脾方联合短期胰岛素强化治疗对胰岛β细胞去分化的影响

【目的】观察补肾健脾方联合短期胰岛素强化治疗对脾肾两虚型2型糖尿病患者胰岛β细胞去分化的影响。【方法】将70例脾肾两虚型2型糖尿病患者随机分为对照组和观察组,每组各35例。对照组给予胰岛素强化治疗,观察组在对照组的基础上给予补肾健脾方治疗,疗程为2周。观察2组患者治疗前后中医证候积分、血糖水平、血清高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、胰岛素原/胰岛素比值(PI/I)的变化情况。【结果】(1)脱落情况方面:治疗过程中,对照组脱落1例,观察组脱落2例,最终对照组34例、观察组33例患者纳入疗效统计。(2)中医证候积分方面:治疗后,2组患者的中医证候积分均较治疗前明显降低(P<0.05),且观察组的降低幅度明显优于对照组(P<0.05)。(3)血糖水平方面:治疗后,2组患者的空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(2hPG)水平均较治疗前明显降低(P<0.05),且观察组的降低幅度均明显优于对照组(P<0.05)。(4)HMGB1水平方面:治疗后,2组患者的HMGB1水平均较治疗前明显降低(P<0.05),且观察组的降低幅度明显优于对照组(P<0.05)。(5)炎症因子水平方面:治疗后,2组患者血清IL-1β、TNF-α水平均较治疗前明显降低(P<0.05),且观察组的降低幅度均明显优于对照组(P<0.05)。(6)PI/I值方面:治疗后,2组患者的PI/I值均较治疗前明显降低(P<0.05),且观察组的降低幅度明显优于对照组(P<0.05)。【结论】补肾健脾方联合短期胰岛素强化治疗可有效改善脾肾两虚型2型糖尿病患者的胰岛功能,其机制可能与解除高糖毒性、降低炎症因子水平,从而抑制胰岛β细胞去分化有关。

鸡内金多糖对高糖诱导的胰岛β细胞活性和Nrf2信号通路的影响

目的探究鸡内金多糖对高糖诱导后胰岛β细胞相关活性和对超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)以及核因子E2相关因子2(Nrf2)等相关指标所产生的影响。方法取胰岛β细胞MIN6,培养检测其活性后分为正常组(5.5 mmol·L^(-1)正常糖处理4 h)、高糖组(高脂高糖处理1 h,33.3 mmol·L^(-1)葡萄糖+0.25 mmol·L^(-1)棕榈酸)、鸡内金多糖低剂量组(20μmol·L^(-1)鸡内金多糖预处理4 h+高脂高糖处理24 h)、鸡内金多糖高剂量组(80μmol·L^(-1)鸡内金多糖预处理4 h+高脂高糖处理24 h),采用5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)检测各组细胞增殖率,缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡,分析细胞周期,细胞划痕实验检测MIN6细胞迁移功能,检测MIN6细胞培养液中SOD、MDA水平,免疫印迹法检测MIN6细胞中Nrf2、醌氧化还原酶1(NQO1)和血红素单加氧酶-1(HO-1)蛋白表达,实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测MIN6细胞中Nrf2、HO⁃1、NQO1 mRNA表达。结果与正常组比较,高糖组MIN6细胞增殖率,SOD及Nrf2、HO-1、NQO1 mRNA和蛋白均降低,MDA及细胞凋亡率升高(P<0.05);与高糖组比较,鸡内金多糖低剂量组MIN6细胞增殖率,SOD及Nrf2、HO-1、NQO1 mRNA和蛋白升高、MDA及细胞凋亡率降低(P<0.05);与鸡内金多糖低剂量组比较,鸡内金多糖高剂量组MIN6细胞增殖率,SOD及Nrf2、HO-1、NQO1 mRNA和蛋白升高,MDA及细胞凋亡率降低(P<0.05)。与正常组比较,高糖组MIN6细胞周期G_(0)/G_(1)升高,S、G_(2)/M降低(P<0.05);与高糖组比较,鸡内金多糖低剂量组MIN6细胞周期G_(0)/G_(1)降低,S和G_(2)/M升高(P<0.05);与鸡内金多糖低剂量组比较,鸡内金多糖高剂量组MIN6细胞周期G_(0)/G_(1)降低,S、G_(2)/M升高(P<0.05)。划痕结果显示,0 h各组空白区无差异;24 h高糖组空白区增大;鸡内金多糖低剂量组空白区域有所缩小;鸡内金多糖高剂量组空白区域总体显著变窄。结论鸡内金多糖能够促进胰岛β细胞MIN6的增殖,抑制其凋亡,可能与抑制Nrf2等相关通路相关。