升清降糖合剂对H_2O_2诱导凋亡的胰岛β细胞周期和Caspase-3的影响

目的:探讨升清降糖合剂(以下简称SQ)对氧化损伤的胰岛β细胞凋亡的保护作用。方法:以H2O2诱导建立胰岛细胞凋亡模型,采用半仿生提取法提取复方有效成分,以10μg/ml作用于胰岛细胞凋亡模型,采用TUNEL法检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期,分光光度法检测凋亡蛋白Caspase-3的活性。结果:H2O2可诱导胰岛β细胞凋亡,加用SQ后细胞凋亡现象明显下降。与正常组比较,模型组RINm5F细胞在G2/M期比例减少(P<0.01),保护组RINm5F细胞在G0/G1的比例减少(P<0.05),在G2/M期细胞比例上升(P<0.01)。模型组RINm5F细胞Caspase-3活化增强,模型组原代胰岛细胞Caspase-3活化增强,保护组Caspase-3活性下降,与模型组比较,有统计学差异(P<0.01)。结论:SQ对氧化损伤诱导的胰岛β细胞凋亡具有保护作用,其机制与调节胰岛β细胞的细胞周期和调节凋亡相关蛋白Caspase-3表达有关。

担载丝裂霉素纳米纤维片的缓释作用及对膀胱癌T24细胞周期的影响

化疗是肿瘤众多治疗办法中发展最快的一个领域,在肿瘤的治疗中发挥越来越大的作用。然而,尽管药物在治疗肿瘤已经取得了很多成绩,但仍存在很多问题,一方面是因为化疗药物对机体产生的毒副反应太大;另一方面是肿瘤易对药物产生抗药性。因此将传统抗癌药物重新进行剂型改进成为当务之急。

糖尿病治疗药物与胰岛B细胞功能的保护作用

2型糖尿病发病的中心环节是胰岛β细胞功能进行性减退和胰岛素抵抗,而胰岛素抵抗贯穿于糖尿病的整个病程,与糖毒性、脂毒性共同损伤胰岛β细胞,导致胰岛β细胞功能进行性衰退。糖尿病的最大危害在于疾病导致的各种急慢性并发症,而血糖控制水平与糖尿病急慢性并发症密切相关。

续断对成骨细胞增殖、分化、凋亡和细胞周期的影响

在动物实验的基础上 ,探讨续断对成骨细胞增殖、分化、凋亡、细胞周期和 Ⅰ 型前胶原αmRNA表达影响。根据文献方法培养大鼠成骨细胞株UMR 10 6 /0 1,采用3 H Tdr法检测细胞增殖 ,PNPP法、RIA法、茜素红染色法以及定量RT PCR法分别检测碱性磷酸酶活性、骨钙素活性、矿化结节形成和Ⅰ 型胶原αmRNA的表达 ,从而了解续断对成骨细胞增殖、分化的影响 ;FCM法检测细胞周期。结果显示续断中、高剂量能显著促进成骨细胞的增殖、增加碱性磷酸酶的表达及矿化结节形成的数量 ,促进成骨细胞骨钙素和Ⅰ 型前胶原mRNA的表达 (P <0 .0 1,P <0 .0 5 ) ,和雌激素组比较差异无显著性。续断高剂量组细胞增殖率、S期细胞比率和细胞增殖指数等均显著高于空白对照组 (P <0 .0 1,P <0 .0 5 ) ,和雌激素组比较差异也无显著性。细胞凋亡率和G0 G1期细胞比率显著低于空白对照组 (P <0 .0 1,P <0 .0 5 )。表明续断能有效促进成骨细胞的分化、增殖 ,防止成骨细胞凋亡 ,可能是该药促进骨折愈合、防治骨质疏松的机制之一。

薯蓣皂苷元对HL-60细胞增殖及细胞周期的影响

采用XTT比色法和流式细胞仪技术观察薯蓣皂苷元(Diosgenin,Dio)对人急性髓性白血病细胞株HL-60的增殖抑制作用以及细胞周期变化。结果表明:XTT法检测其24h的半数抑制浓度(IC_(50))为7.36mg/L;流式细胞仪检测Dio作用24h后,G_0/G_1期细胞增多,S期细胞减少,凋亡细胞增多。Dio可明显抑制HL-60细胞的增殖。

姜黄素对Hela细胞周期各时相的影响

目的:探讨姜黄素对Hela细胞(人宫颈癌细胞)增殖周期各时相的影响,为宫颈癌化疗寻求有效药物。方法:应用MTT比色法和流式细胞术测定不同浓度姜黄素(0、10、20和40 mg.L-1)对Hela细胞增殖的抑制率和细胞周期各时相的变化,并应用电子显微镜观察Hela细胞的亚细胞改变。结果:0、10、20和40 mg.L-1姜黄素对Hela细胞增殖的抑制率分别为3.0%、21.4%、32.8%和49.2%,且呈剂量依赖性;流式细胞术显示,G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞相对增多;细胞结构显示,细胞空化、染色质凝集、凋亡小体增多。结论:姜黄素能够抑制HeLa细胞增殖,阻止G1期细胞向S期转化的进程,促进Hela细胞凋亡。

奥沙利铂对肝癌细胞HepG2细胞周期的影响

目的:探讨奥沙利铂(Oxaliplatin,L-OHP)对人肝癌细胞株HepG2周期的影响及其相关机制,为其应用于原发性肝细胞癌临床治疗提供理论依据。方法:MTT方法检测L-OHP对肝癌细胞HepG2生长的抑制作用;流式细胞术(FCM)检测L-OHP诱导HepG2细胞周期阻滞的作用;RTPCR和Western blot方法观察L-OHP对细胞周期调节因子CyclinD1、CDK2、CDK4及p16、p21、p53表达的影响。结果:MTT结果显示L-OHP对HepG2细胞增殖抑制率随药物浓度增加及作用时间延长有升高趋势,呈时间剂量依赖性。L-OHP能够诱导HepG2细胞周期阻滞于S期,并可下调CDK4和CyclinD1蛋白的表达,上调p21,p53蛋白的表达,CDK2和p16表达无明显变化。结论:L-OHP可能通过影响CDK4、CyclinD1及p21的活性使HepG2细胞阻滞在S期,从而抑制肝癌细胞HepG2的增殖。

来源于天然产物的细胞周期抑制剂

细胞周期抑制剂可通过选择性地抑制癌细胞的细胞周期周转发挥其抗癌作用 ,因此通过筛选新的细胞周期抑制活性物质有望寻找到新的抗癌药物。本文按化合物结构类型 ,简要概述近十年来从天然产物中发现的细胞周期抑制剂的研究概况。

细胞色素C诱导HL-60细胞凋亡及其与细胞周期关系分析

目的 分析细胞色素 C诱导 HL- 6 0细胞凋亡的时间效应及其与细胞周期的关系。方法 (1)利用透射电镜观察细胞色素 C诱导 HL- 6 0细胞凋亡时凋亡小体的形成。 (2 )应用流式细胞仪技术检测细胞色素 C诱导 HL-6 0细胞的凋亡率并分析其凋亡的时 -效关系以及凋亡与细胞周期的关系。结果 (1)细胞色素 C作用 HL- 6 0细胞2 4小时出现凋亡 ,形成凋亡小体。 (2 )细胞色素 C诱导 HL- 6 0细胞凋亡的作用体现一定的时间效应 ,8～ 2 4小时作用时间范围内 ,凋亡率随时间延长而明显增高。 (3)细胞色素 C诱导 HL- 6 0凋亡与细胞周期密切相关 ,随凋亡率升高 ,S期和 G2 期细胞比例随之下降 ,且 S期细胞比例与凋亡率二者呈显著负相关 (r=- 0 .718,P<0 .0 1)。结论 细胞色素 C诱导 HL- 6 0细胞凋亡与细胞周期密切相关 ,其周期特异性具有一定的实际意义。

TSA诱导胰腺癌BxPC-3细胞周期阻滞与凋亡的研究

目的观察曲古抑菌素A(tricho-statin A,TSA)对胰腺癌BxPC-3细胞增殖及凋亡的诱导作用,探讨TSA抗胰腺癌的作用机制。方法BxPC-3细胞应用TSA处理后采用流式细胞技术分析其细胞周期分布和细胞凋亡率,免疫组化方法检测细胞乙酰化组蛋白H4表达,Western blot分析p21 WAF1/CIP1蛋白表达。结果TSA对胰腺癌BxPC-3细胞具有生长抑制作用,且呈时间和剂量依赖性。TSA可将BxPC-3细胞阻滞于G0/G1期,TSA组G0/G1期细胞达(61.8±2.5)%,较空白对照组(42.5±2.2)%和乙醇对照组(47.3±3.4)%明显增多(P=0.004);三组细胞凋亡率分别为25.5%、5.5%和5.1%(P=0.000)。TSA组细胞p21 WAF1/CIP1蛋白表达及其相关染色质乙酰化组蛋白H4表达上调。结论TSA对胰腺癌BxPC-3细胞增殖和细胞周期具有影响作用并可诱导细胞凋亡,p21 WAF1/CIP1蛋白及其相关染色质乙酰化组蛋白H4表达上调可能是其抗胰腺癌作用机制之一。

薏苡仁酯对人鼻咽癌细胞周期的影响

目的 :探讨薏苡仁酯 (coixenolide,CXL)对人鼻咽癌 CNE- 2 Z细胞周期的作用。方法 :采用微量细胞克隆形成法检测 CNE- 2 Z细胞的增殖能力和对药物的敏感性 ,用流式细胞仪分析细胞周期时相。结果 :CXL 以量效方式抑制CNE- 2 Z细胞的克隆形式 ,ID5 0 =10 - 5.0 0 3mol/ L。小剂量、短时间使细胞阻滞于 S期 ,大剂量、长时间则停留在 G2 / M期。结论 :CXL通过作用于 S期或 G2 / M期而抑制 CNE- 2 Z细胞生长。

探讨键合表阿霉素纳米胶束对肝癌Walker-256细胞周期的影响

原发性肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,早期诊断困难,手术切除率低,临床治疗以化学疗法为主。传统的小分子化疗药物缺乏对肿瘤组织的特异性,间断性的冲击化疗在杀死肿瘤细胞的同时,也会对正常组织产生毒副作用,并易导致肿瘤细胞耐药性的产生,远期疗效并不满意。

由胰岛素信号通路筛选糖尿病药物作用靶点

胰岛素是维持血糖稳定的一种重要激素 ,通过效应细胞受体将胰岛素信号传递到细胞内 ,引发胞内一系列反应而发挥功能。随着对胰岛素信号通路的了解逐渐增多 ,已经从中筛选到一些用于治疗糖尿病的药物作用靶点 ,它们主要涉及增强靶细胞对胰岛素的敏感性和促进对葡萄糖的利用等环节。

六磷酸肌醇对人前列腺癌细胞增殖的抑制作用及其与胰岛素样生长因子结合蛋白-3的关系

目的：研究六磷酸肌醇（IP6）抑制人前列腺癌细胞LNCaP细胞增殖的情况,及该抑制过程与胰岛素样生长因子结合蛋白-3（IGFBP-3）表达水平的关系.方法：将LNCaP细胞分为四组：空白对照组不做任何处理;小分子干扰RNA（siRNA）组使用siRNA技术对LNCaP细胞实施IGFBP-3基因沉默;siRNA＋ IP6组为接受IP6刺激的IGFBP-3基因沉默的LNCaP细胞;IP6组为接受IP6刺激的普通LNCaP细胞.MTT法计算不同浓度IP6处理后各组细胞的存活率.PI染色结合流式细胞技术分析各组细胞的细胞周期,AnnexinV-FITC/PI双染结合流式细胞技术分析IP6对LNCaP细胞的凋亡诱导情况.荧光实时定量PCR技术和蛋白质印迹法分析各组细胞内IGFBP-3和Bcl-2的表达变化.结果：1.5 mmol的IP6可以引起LNCaP细胞的增殖抑制,诱导G2期阻滞,并可以诱导细胞凋亡.IP6刺激细胞后可以引起IGFBP-3的表达增高,Bcl-2的表达降低,而IGFBP-3基因沉默可以减轻IP6对LNCaP细胞的增殖抑制作用,同时抑制Bcl-2的表达降低.结论：IP6可引起LNCaP细胞的增殖抑制,其机制可能与IGFBP-3的高表达有关,IGFBP-3可能通过影响Bcl-2的表达发挥作用.

与胰岛素治疗相关的药物相互作用

胰岛素在糖尿病管理中应用广泛,是不可缺少的一种治疗方案。同时,在糖尿病管理中常需联合应用多种药物,因此,药物相互作用则是临床医生不可忽视的一个问题。本文就与胰岛素治疗相关的药物相互作用作一简单综述,为临床合理应用胰岛素给出建议,以期提高治疗疗效,减少低血糖风险。

磺脲类药物的非胰岛素依赖性降糖作用

磺脲类降糖药主要通过刺激胰岛β细胞释放胰岛素而降低血糖,但近来发现长期治疗过程中部分磺脲类药物还具有非胰岛素依赖的降糖机制。一方面磺脲类药可激活细胞内特异的蛋白磷酸化酶而促进葡萄糖转运子4/1的转位,激活糖原合成酶,降低糖原合成酶激酶-3活性,从而促进外周组织的葡萄糖利用。另一方面,部分磺脲类药特别是格列美脲分子可直接插入脂肪细胞/肌细胞膜上的吞饮小泡/不溶于去污剂的富含糖脂筏(caveolae/DIGs区),激活后者的非受体酪氨酸激酶pp59Lyn,进而使胰岛素受体底物-1酪氨酸磷酸化,发动代谢性的拟胰岛素信号级联反应。

辛酰化和非酰化ghrelin对胰岛β细胞的作用

目的：探讨辛酰化和非酰化ghrelin对胰岛β细胞的作用及其作用途径。方法：分别用不同浓度辛酰化ghrelin及非酰化ghrelin作用于NIT-1胰岛β细胞,48 h后观察二者是否有促进胰岛β细胞增殖的作用,并随后用阻断剂NF449分别与辛酰化ghrelin及非酰化ghrelin共同作用于NIT-1胰岛β细胞,验证二者促进增殖作用途径是否为Gαs途径。结果：MTT法结果提示10^-9～10^-7mol/L ghrelin和10^-10～10^-7mol/L非酰化ghrelin均能促进胰岛β细胞增殖,并且二者都是通过Gαs途径促进胰岛β细胞增殖。结论：辛酰化ghrelin和非酰化ghrelin都通过Gαs途径促进胰岛β细胞增殖。

二烯丙基二硫对人胶质瘤U251细胞增殖及细胞周期的影响

目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对人恶性胶质瘤U251细胞增殖及细胞周期的影响。方法采用MTT法、流式细胞术等方法检测DADS对U251细胞的增殖抑制及细胞周期的影响。免疫细胞化学、qRT-PCR与Western blot检测cyclin B1与c-Myc表达。结果 MTT法显示,15、30、45、60 mg/L DADS处理U251细胞48小时后,生长抑制率分别为22.0%、38.8%、49.2%、55.3%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术结果显示,15、30、45、60 mg/L DADS作用U251细胞48小时后,G2/M期细胞分别为(14.1±1.2)%、(25.0±0.6)%、(41.2±1.4)%、(53.5±3.3)%,较对照组(9.6±0.9)%差异具有统计学意义(P<0.05)。免疫细胞化学显示,45 mg/L DADS处理U251细胞48小时后,cyclin B1与c-Myc蛋白平均光密度值分别从0.52±0.09、0.56±0.08显著下降至0.23±0.02、0.39±0.04(P<0.05)。qRT-PCR结果显示,cyclin B1与c-Myc mRNA表达分别下调42.0%与63.0%(P<0.05)。Western blot结果显示,cyclin B1、c-Myc蛋白与β-actin的平均灰度值比分别为1.12±0.14与1.20±0.15,明显低于对照组1.74±0.15与2.23±0.19(P<0.05)。结论 DADS可明显抑制恶性胶质瘤U251细胞增殖与阻滞G2/M期,机制与下调cyclin B1、c-Myc有关。

胰岛素样生长因子-1对甲状腺相关眼病眼眶成纤维细胞的促生长作用

背景甲状腺相关眼病（TAO）是一种自身免疫性疾病，目前对其发病机制的研究主要集中在共同抗原上。胰岛素样生长因子-1（IGF．1）功能的发挥需要IGF-1受体（IGF-1R）的参与，IGF-1在促甲状腺激素受体（TSHR）的信号传导通路中也起着重要作用。目的探讨IGF-1对TAO患者眼眶成纤维细胞（OFs）增生及IGF-1R、TSHR表达的影响，探讨IGF-1在TAO发病机制中的作用。方法收集2016年3-6月于四川大学华西医院行TAO眼眶脂肪切除术取得的眶组织标本17例17份及正常人美容手术取得的眼眶组织4人4份，采用含体积分数5％胎牛血清的DMEM／F12培养液培养OFs。分别于培养液中加入不同质量浓度（O、50、100、125μg／L）的IGF-1，采用MTS比色法绘制OFs生长曲线，评估IGF-1对TAO和正常来源OFs增生的影响；采用流式细胞术测定不同质量浓度IGF-1对TAO和正常来源OFs中IGF-1R、TSHR表达水平的影响。结果TAO患者与正常人来源的OFs均生长良好，呈梭形，细胞质丰富，TAO患者与正常人来源的OFs形态学特点一致。培养的OFs波形蛋白呈阳性反应，结蛋白、S-100、肌红蛋白和角蛋白均呈阴性反应。不同质量浓度IGF-1作用后TAO组和正常组OFs增生均呈逐渐上升趋势，总体比较差异有统计学意义（F分组=219．639，P〈0．001；F质量浓度=17．752，P〈0．001），以100μg／LIGF-1的促进作用最强。0、50、100、125μg／LIGF-1作用后TAO组OFs中IGF-1R表达量分别为（0．0091±0．0087）％、（0．0953±0．0233）％、（0．0837±0．0227）％和（0．0709±0．0241）％，正常组OFs中IGF-1R表达量分别为（0．0023±0．0006）％、（0．0093±0．0012）％、（0．0073±0．0015）％和（0．0083±0．0012）％，其中50、100和125μg／LIGF-1作用后各组OFs中IGF-1R表达量均高于无添加IGF-1者，TAO组OFs细胞中IGF-1R的表达量均明显高于正常组，差异均有统计学意义（均P〈0．05）；0、50、100和125μg／LIGF-1作用后TAO组和正常组OFs中TSHR表达量的总体比较差异均无统计学意义（F分组=0．133，P〉0．05；F质量浓度=0．004，P〉0．05）。结论IGF-1对TAO患者和正常人OFs的生长均有促进作用并能上调OFs中IGF-1R的表达，但其对OFs中TSHR的表达变化无明显影响。