1种新型功能性杂交胰岛β细胞系的建立

目的通过应用基因转染及细胞融合技术构建永生化细胞,建立1种功能良好、无致瘤性、增殖可控的杂交胰岛β细胞系。方法通过脂质体介导逆转录病毒载体SSR69转染至原代成纤维细胞中,筛选稳定表达SV40 LTag的永生化细胞。提取大鼠胰岛,通过胰蛋白酶及DNA酶裂解成单胰岛细胞。对永生化成纤维细胞及单个胰岛β细胞进行电融合,通过有限稀释法获得杂交胰岛β细胞克隆。比较杂交及正常β细胞内胰岛素的含量及对葡萄糖刺激胰岛素释放反应。通过RT-PCR及Westernblot分析杂交胰岛β细胞中SV40 LTag、insulin、葡萄糖激酶(GK)及葡萄糖转运体-2(Glut-2)基因的表达。结果建立的永生化成纤维细胞系的增殖能力明显优于原代成纤维细胞(P<0.05)。成功获得杂交胰岛β细胞克隆,其细胞呈短梭形或扁圆形,且具有贴壁生长等特性。透射电子显微镜下可见细胞内胰岛素分泌颗粒,杂交与正常胰岛β细胞之间细胞内胰岛素含量、胰岛素释放指数及insulin、GK、Glut-2蛋白及mRNA表达水平无统计学差异(P>0.05),但2种细胞内insulin、GK、Glut-2的表达水平显著高于RIN-m5F细胞(P<0.05)。结论可通过永生化成纤维细胞及单个胰岛β细胞电融合诱导生成杂交胰岛β细胞,且杂交细胞能够对葡萄糖的变化产生应答反应。

“永生化”胰岛β细胞系研究进展

目前迅猛发展的分子生物学技术使建立新型功能性"永生化"胰岛β细胞系成为可能。文章综述了"永生化"胰岛β细胞系的建立及应用进展。就胰岛素瘤衍生的胰岛β细胞系、转基因技术建立的胰岛β细胞系、胰岛或非胰岛细胞来源的胰岛素分泌细胞、干细胞来源的胰岛素分泌细胞、细胞融合的杂交胰岛β细胞系进行论述。

京尼平苷对INS-1细胞增殖与凋亡的影响

目的观察京尼平苷对大鼠胰岛β细胞系(INS-1)增殖及凋亡的影响。方法用CCK-8法测定细胞增殖,用毒胡萝卜素处理细胞后,用流式细胞仪测定细胞凋亡率,并用CCK-8法测定细胞活力。结果京尼平苷同胰高血糖素样肽1(GLP-1)一样能促进INS-1的增殖,并有浓度依赖性;京尼平苷同GLP-1一样能抑制毒胡萝卜素处理后的细胞凋亡,并有浓度依赖性;同时京尼平苷能抑制毒胡萝卜素对细胞的毒性作用。结论京尼平苷能促进INS-1细胞增殖,抑制INS-1细胞凋亡。