微小RNA靶向胰岛再生源蛋白3A对肺上皮细胞增殖和凋亡的影响

目的检测重症肺炎患儿血清中可能靶向抑制胰岛再生源蛋白3A(REG3A)的miRNA表达情况,并探究miR-137与miR-342-3p对肺上皮细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法qRT-PCR检测重症肺炎患儿和健康儿童血清样本中相关miRNA和REG3A mRNA表达;将肺上皮细胞A549随机分为空白对照组、miR-137 NC组、miR-137 mimic组、miR-342-3p NC组、miR-342-3p mimic组,qRT-PCR检测miR-137、miR-342-3p和REG3A mRNA表达,Western blot检测REG3A、Caspase-3、Bcl-2、Bax和p53蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验检测荧光活性,CCK-8法和EdU染色检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果重症肺炎患儿血清中miR-425-5p、miR-137、miR-325-3p、miR-342-3p、miR-203a-3p及miR-9-3p相对表达量均高于健康儿童,而REG3A mRNA相对表达量低于健康儿童(P<0.05);miR-137、miR-342-3p均与REG3A 3′-UTR存在碱基互补现象,并靶向调控其表达(P<0.05);miR-137过表达和miR-342-3p过表达均能够使A549细胞增殖活性和EdU阳性细胞率降低、细胞凋亡率升高,Caspase-3、Bax和p53蛋白表达增加而Bcl-2蛋白表达减少(P<0.05)。结论miR-137和miR-342-3p可能通过靶向REG3A抑制肺上皮细胞增殖,并促进细胞凋亡。

胰岛再生源蛋白3A对胶质瘤细胞增殖和迁移的影响及机制

目的探讨胰岛再生源蛋白3A(REG3A)对胶质瘤细胞增殖和迁移的影响及其分子作用机制。方法收集2017年10月17日至2018年10月18日于临沂市人民医院行手术治疗的10例胶质瘤患者的癌及癌旁组织,低级别和高级别胶质瘤各5例。体外培养不同胶质瘤细胞株(SF295、U251、TG905、A172和CRT)及原代胶质瘤细胞株PT1,采用实时荧光定量聚合酶链反应和Western blot检测组织标本及各细胞株中REG3A的mRNA和蛋白表达水平。通过脂质体转染si-REG3A至TG905细胞敲低REG3A的表达,通过慢病毒包装REG3A质粒感染SF295细胞上调REG3A的表达,使用REG3A重组蛋白和Akt抑制剂单独或联合处理胶质瘤细胞,采用细胞计数试剂盒8法检测细胞增殖能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot法检测细胞中N-cadherin、vimentin和磷酸化Akt(p-Akt)的表达情况。结果实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)结果显示,U251、TG905、CRT、A172和PT-1细胞中REG3AmRNA的表达水平分别为2.129±0.13、2.22±0.59、5.02±0.31、6.62±1.34和9.18±0.61,高于SF295细胞(1.00±0.18,均P<0.001)。高级别胶质瘤组织中REG3AmRNA的表达水平为3.18±2.92,高于癌旁组织(1.00±1.14,P=0.031)和低级别胶质瘤组织(0.90±0.67,P=0.014)。Western blot和免疫组化检测结果与RT-qPCR结果一致。si-REG3A组TG905细胞的迁移率为(60.57±5.30)%,低于空白对照组[(79.65±12.09)%,P=0.076]和si-NC组[(84.18±13.63)%,P=0.038]。REG3A质粒转染组SF295细胞的迁移率为(96.05±6.41)%,高于空载转染组[(74.47±8.23)%,P=0.021]。REG3A重组蛋白能够上调SF295细胞中N-cadherin、vimentin和p-Akt的表达。与对照组[(100.00±2.53)%]相比,REG3A重组蛋白组的增殖率[(117.70±10.24)%]明显提高,REG3A重组蛋白+Akt抑制剂组的增殖率[(98.31±3.64)%]明显低于REG3A重组蛋白组(P=0.017)。REG3A重组蛋白+Akt抑制剂组的迁移率为(63.35±4.06)%,低于REG3A重组蛋白组[(89.26±11.07)%,P=0.019]。结论REG3A能够通过激活磷酯酰肌醇-3-激酶/Akt信号通路促进人胶质瘤细胞的增殖和迁移。