葡萄糖调控的胰岛素原真核表达载体的构建

【目的】构建胰岛素原真核表达载体,在肝细胞内实现葡萄糖调控下的成熟胰岛素的表达。【方法】(1)RT-PCR方法从胎儿胰腺获取野生型人胰岛素原cDNA;(2)重叠延伸PCR法在人胰岛素原cDNA上制造两个点突变,该胰岛素原cDNA片段命名为胰岛素/furin(INS/furin);(3)将INS/furin亚克隆至含葡萄糖反应元件(GlRE)的p(GlRE)3BP-1Luc的多克隆位点上。【结果】HindⅢ和EcoRV酶切及测序均证实载体p(GlRE)3BP-11×furin构建成功。【结论】含葡萄糖反应元件的点突变胰岛素原基因真核表达载体p(GlRE)3BP-11×furin有望成为糖尿病基因治疗理想的候选载体之一。